乙酰胆碱受体α4β2亚型在非洲爪蟾卵母细胞中的表达 被引量：2

1

作者 于海鹏 李宝珠 +6 位作者 房立丛 沈立姿 朱晓鹏 胡远艳 张本 长孙东亭 罗素兰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期141-145,共5页

通过建立乙酰胆碱受体α4β2亚型(α4β2 nAChR)在非洲爪蟾卵母细胞中的表达模型,以便以α4β2 nAChR为作用靶点进行药物筛选。将乙酰胆碱受体亚基基因α4、β2体外转录获得的cRNA,通过显微注射的方法注入非洲爪蟾卵母细胞,并对该受体... 通过建立乙酰胆碱受体α4β2亚型(α4β2 nAChR)在非洲爪蟾卵母细胞中的表达模型,以便以α4β2 nAChR为作用靶点进行药物筛选。将乙酰胆碱受体亚基基因α4、β2体外转录获得的cRNA,通过显微注射的方法注入非洲爪蟾卵母细胞,并对该受体的表达情况进行检测。结果显示,乙酰胆碱受体α4β2亚型在蛙卵细胞中获得了有效表达,记录到典型的ACh配体门控的离子通道内向电流。 展开更多

关键词 乙酰胆碱受体亚型α4β2 非洲爪蟾卵母细胞 受体基因表达 配体门控离子通道

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非洲爪蟾卵母细胞内的螺旋钙波和靶波 被引量：1

2

作者 施小民 《上海大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2003年第4期365-368,共4页

该文应用定态线性化的Atri模型方程,描述非洲爪蟾(XenopusLaevis)卵母细胞内钙波的生成和演化.在忽略细胞边界影响的近似下,得到了爪蟾卵母细胞内螺旋钙波和靶波的解析解.对于远离细胞中心的渐近情形,对应的螺旋波为Archimede型.由此得... 该文应用定态线性化的Atri模型方程,描述非洲爪蟾(XenopusLaevis)卵母细胞内钙波的生成和演化.在忽略细胞边界影响的近似下,得到了爪蟾卵母细胞内螺旋钙波和靶波的解析解.对于远离细胞中心的渐近情形,对应的螺旋波为Archimede型.由此得到的波速、波长和周期均与实验和数值模拟结果吻合.并指出IP3R失活常数必须大于2.43s,才能产生胞内周期钙波. 展开更多

关键词 非洲爪蟾卵母细胞 钙波 螺旋波 靶波

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大鼠背根神经节神经元瞬时外向钾电流与非洲爪蟾卵母细胞上表达的Kv4.2通道电流特性的比较

3

作者 聂辉 张玉芹 +4 位作者 李享元 余文静 罗加烈 胡霞敏 李之望 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期157-161,共5页

目的为最终揭示大鼠背根神经节神经元上天然瞬时外向钾通道的结构与功能调节提供依据。方法采用双极电压钳技术记录非洲爪蟾卵母细胞上表达的Kv4.2电流,用全细胞膜片钳技术记录大鼠背根神经节神经元上瞬间外向钾电流(IA),并对二者进行... 目的为最终揭示大鼠背根神经节神经元上天然瞬时外向钾通道的结构与功能调节提供依据。方法采用双极电压钳技术记录非洲爪蟾卵母细胞上表达的Kv4.2电流,用全细胞膜片钳技术记录大鼠背根神经节神经元上瞬间外向钾电流(IA),并对二者进行动力学特征的比较。结果背根神经节神经元上IA和Kv4.2通道电流①均具有明显的A型电流特征;②半数最大激活电位分别为(-29.5±3.1)mV和(-3.9±1.0)mV;③半数最大失活电位分别为(-78.5±3.4)mV和(-48.5±0.6)mV;④失活后再激活恢复时间常数(τ)分别为(32.0±4.8)ms和(71.4±13.2)ms。结论Kv4.2通道电流可能是背根神经节神经元上IA电流的主要成分,但不是唯一成分。 展开更多

关键词 非洲爪蟾卵母细胞 钾通道 Kv4.2钾通道 背根神经节 神经元

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受体在非洲爪蟾卵母细胞上表达方法的优化 被引量：6

4

作者 房立丛 沈立姿 +5 位作者 于津鹏 朱晓鹏 胡远艳 张本 罗素兰 长孙东亭 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期167-171,共5页

通过改变非洲爪蟾卵母细胞的消化时间、消化次数、消化用酶量等,优化乙酰胆碱受体的表达条件。结果显示,采用两步消化法,在经过0.5 mg/mL的胶原酶消化50-70 min之后得到的非洲爪蟾卵母细胞的状态较好,利于受体的表达;同时优化了受体在... 通过改变非洲爪蟾卵母细胞的消化时间、消化次数、消化用酶量等,优化乙酰胆碱受体的表达条件。结果显示,采用两步消化法,在经过0.5 mg/mL的胶原酶消化50-70 min之后得到的非洲爪蟾卵母细胞的状态较好,利于受体的表达;同时优化了受体在非洲爪蟾卵母细胞上的表达条件。试验所获得的优化表达条件对建立非洲爪蟾卵母细胞受体表达体系具有重要意义。 展开更多

关键词 非洲爪蟾卵母细胞 乙酰胆碱受体 表达 优化

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α6/α3β4乙酰胆碱受体在非洲爪蟾卵母细胞中的表达 被引量：1

5

作者 熊洋 朱晓鹏 +2 位作者 吴勇 长孙东亭 罗素兰 《热带生物学报》 2020年第4期391-398,共8页

α6/α3β4烟碱型乙酰胆碱受体(α6β4*nAChRs,*代表其他亚基)主要分布于大脑海马区、外周神经节和人源肾上腺嗜铬细胞等,与神经性疼痛和炎症反应、情绪等生理疾病密切相关。本研究拟对大鼠α6/α3β4 nAChR在非洲爪蟾(Xenopus laevis)... α6/α3β4烟碱型乙酰胆碱受体(α6β4*nAChRs,*代表其他亚基)主要分布于大脑海马区、外周神经节和人源肾上腺嗜铬细胞等,与神经性疼痛和炎症反应、情绪等生理疾病密切相关。本研究拟对大鼠α6/α3β4 nAChR在非洲爪蟾(Xenopus laevis)卵母细胞膜上进行重组表达,并利用双电极电压钳电生理学技术检测该重组受体的功能。在不同浓度的激动剂乙酰胆碱的刺激下,比较了α6/α3和β4亚基的不同配比形成的受体通道开放而产生的电流大小,并用其拮抗剂α−芋螺毒素TxID验证了该受体的敏感性。结果表明,亚基不同配比的α6/α3β4 nAChR均可在非洲爪蟾卵母细胞膜上成功表达,并具有较好的配体门控敏感性。 展开更多

关键词 α6/α3β4烟碱型乙酰胆碱受体 非洲爪蟾卵母细胞 双电极电压钳 重组表达

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双(7)-他克林对非洲爪蟾卵母细胞表达的Kv4．2和Kv1．2编码钾通道的作用

6

作者 余雯静 聂辉 +2 位作者 袁春华 李享元 李之望 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期145-148,共4页

目的用非洲爪蟾卵母细胞表达之Kv4.2和Kv1.2编码的快和慢钾通道,检验双(7)-他克林对此两种通道是否有抑制作用。方法应用爪蟾卵母细胞注射mRNA进行表达,电压钳记录Kv4.2和Kv1.2钾电流(IK)。结果双(7)-他克林抑制IK(Kv4.2)和IK(Kv1.2)的I... 目的用非洲爪蟾卵母细胞表达之Kv4.2和Kv1.2编码的快和慢钾通道,检验双(7)-他克林对此两种通道是否有抑制作用。方法应用爪蟾卵母细胞注射mRNA进行表达,电压钳记录Kv4.2和Kv1.2钾电流(IK)。结果双(7)-他克林抑制IK(Kv4.2)和IK(Kv1.2)的IC50值分别为(0.23±0.05)μmol/L和(0.24±0.06)μmol/L。结论此种抑制效应可能与在双(7)-他克林作用下表达的Kv4.2和Kv1.2钾通道激活曲线向超极化电压方向偏移有关。 展开更多

关键词 双(7)-他克林 非洲爪蟾卵母细胞 钾通道 抑制效应

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α6/α3β2β3乙酰胆碱受体在非洲爪蟾卵母细胞中的表达及其条件优化

7

作者 施西子 毛楷林 +2 位作者 朱晓鹏 长孙东亭 罗素兰 《华南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2020年第3期70-77,共8页

为建立有效的α6/α3β2β3 nAChRs(α6/α3β2β3,或简写为α6β2*,*代表其他亚基)体外重组表达实验模型,利用非洲爪蟾卵母细胞表达体系,采用显微注射RNA的方法,利用双电极电压钳技术检测电流,对α6/α3β2β3 nAChRs亚型进行体外重组... 为建立有效的α6/α3β2β3 nAChRs(α6/α3β2β3,或简写为α6β2*,*代表其他亚基)体外重组表达实验模型,利用非洲爪蟾卵母细胞表达体系,采用显微注射RNA的方法,利用双电极电压钳技术检测电流,对α6/α3β2β3 nAChRs亚型进行体外重组表达研究,并对其表达条件进行优化,获得了α6/α3β2β3 nAChRs优化的重组表达体系.烟碱型乙酰胆碱受体(nAChRs)是一类重要的配体门控离子通道,其亚型众多且结构相似,但各亚型的生理学和药理学功能截然不同.天然的α6β2*nAChRs很难体外表达,体外表达模型的表达电流非常小.因此,本实验拟研究优化该亚型的表达,进行优化后的体外表达模型,产生的激发电流显著提高,为以该亚型为靶点的新药筛选提供实验模型和基础. 展开更多

关键词 α6/α3β2β3乙酰胆碱受体 非洲爪蟾卵母细胞 双电极电压钳 表达优化

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非洲爪蟾卵非细胞翻译体系的建立及应用

8

作者 田辉凯 姚小皓 +2 位作者 马兵 张红梅 李学军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期768-771,共4页

目的　当前人类基因组研究的重心正在由“结构”向“功能”转移。而基因功能的研究离不开基因的表达 ,这就迫切需要一种操作简便 ,适用范围广的表达工具来表达有功能的蛋白质。方法　非洲爪蟾注射HCG催卵 ,2 %半胱氨酸去胶膜 ,高速离心... 目的　当前人类基因组研究的重心正在由“结构”向“功能”转移。而基因功能的研究离不开基因的表达 ,这就迫切需要一种操作简便 ,适用范围广的表达工具来表达有功能的蛋白质。方法　非洲爪蟾注射HCG催卵 ,2 %半胱氨酸去胶膜 ,高速离心制备卵提取物 ,即为非洲爪蟾卵非细胞翻译体系。通过亚克隆技术将TFAR1 9基因克隆到体外转录质粒中 ,通过酶切线性化模板 ,体外转录 ,加帽合成cRNA ,将其加入到制备的蛙卵提取物中进行体外翻译。结果　用Westernblot鉴定 ,获得了高效翻译 ,并且加入亚精胺和ATP再生系统可以提高翻译的效率。 展开更多

关键词 非细胞翻译体系 细胞凋亡 TFAR19 非洲爪蟾卵母细胞

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Kir2.1/Kir2.3嵌合体的构建与表达 被引量：1

9

作者 赵志英 朱宏谦 +2 位作者 张璇 刘丽 张国红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期733-736,共4页

目的构建Kir2.1/Kir2.3通道嵌合体,为进一步研究Kir2.1和Kir2.3通道的调控机制打下基础。方法利用重叠延伸PCR方法构建不同的Kir2.1/Kir2.3嵌合体质粒:N1P3C3,N3P1C1,N3P3C1,N1P1C3,NIP3C1,N3P1C3。将不同的嵌合体质粒分别用NheI线性化... 目的构建Kir2.1/Kir2.3通道嵌合体,为进一步研究Kir2.1和Kir2.3通道的调控机制打下基础。方法利用重叠延伸PCR方法构建不同的Kir2.1/Kir2.3嵌合体质粒:N1P3C3,N3P1C1,N3P3C1,N1P1C3,NIP3C1,N3P1C3。将不同的嵌合体质粒分别用NheI线性化后,转录为cRNA表达于非洲爪蟾卵母细胞,用双电极电压钳记录电流。结果不同的Kir2.1/Kir2.3嵌合体质粒构建成功,在非洲爪蟾卵母细胞上可以记录到电流表达。结论成功构建Kir2.1/Kir2.3嵌合体并完成了嵌合体通道的异源性表达和电压钳记录。 展开更多

关键词 Kir2 3 Kir2 1 钾通道 嵌合体 重叠延伸PCR 双电极电压钳 非洲爪蟾卵母细胞

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表达的辣椒素受体对甲醛刺激的反应

10

作者 余邦兴 陈茂林 +2 位作者 聂辉 李之望 杨旭 《医学研究生学报》 CAS 2004年第6期487-489,共3页

目的 :验证Nielsen假设的正确性。　方法 :体外转录辣椒素受体 (VRI)cDNA ,获得CRmRNA ,注入非洲爪蟾卵母细胞 ,异源性表达VRI。用甲醛刺激异源性表达的VRI。用双电极电压钳记录。　结果 :实验组有 3个细胞对激动剂辣椒素 (capsaicin 10... 目的 :验证Nielsen假设的正确性。　方法 :体外转录辣椒素受体 (VRI)cDNA ,获得CRmRNA ,注入非洲爪蟾卵母细胞 ,异源性表达VRI。用甲醛刺激异源性表达的VRI。用双电极电压钳记录。　结果 :实验组有 3个细胞对激动剂辣椒素 (capsaicin 10 -7mol/L)有反应 ,并且VRI拮抗剂 (capsazepine 10 -5mol/L)能完全阻断此内向电流。　结论 :表达的VRI对甲醛刺激发生反应。验证了Nielsen假设的正确性。 展开更多

关键词 非洲爪蟾卵母细胞 辣椒素受体 甲醛

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果蝇钠通道DmNav22在双氧木脂素A作用机理研究中的应用

11

作者 闫秀芳 郄杏桃 +1 位作者 吴文君 胡兆农 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期635-640,共6页

建立以爪蟾卵母细胞为载体的果蝇钠通道表达系统,研究双氧木脂素A的杀虫分子机理。将果蝇钠通道DmNav22与TipE亚基基因分别进行体外转录,获得DmNav22与TipE亚基基因的cRNA,将DmNav22与TipE的cRNA等质量混合,显微注射至新鲜的非洲爪蟾卵... 建立以爪蟾卵母细胞为载体的果蝇钠通道表达系统,研究双氧木脂素A的杀虫分子机理。将果蝇钠通道DmNav22与TipE亚基基因分别进行体外转录,获得DmNav22与TipE亚基基因的cRNA,将DmNav22与TipE的cRNA等质量混合,显微注射至新鲜的非洲爪蟾卵母细胞,在ND96溶液、18℃培养12~18h后采用双电极电压钳技术记录其电流,测定双氧木脂素A对钠电流的影响。结果表明,注射cRNA的非洲爪蟾卵母细胞,可记录到明显的果蝇钠通道电压门控内向电流,未注射的对照组细胞则未记录到钠电流;双氧木脂素A使钠通道失活电压依赖性向超极化方向移动。说明,果蝇钠通道在非洲爪蟾卵母细胞中成功表达,为进一步研究双氧木脂素A的作用机理奠定基础。 展开更多

关键词 果蝇钠通道 双电极电压钳 非洲爪蟾卵母细胞 双氧木脂素A

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