非同位素mRNA差异显示方法的建立及应用 被引量：6

1

作者 苏青 罗敏 +3 位作者 刘红标 陆志强 陈源 陈家伦 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2000年第5期405-407,共3页

目的建立非同位素mRNA差异显示技术 ,并用以分析鼠脑甲状腺激素的反应基因。　方法用 9-1 0bp的随机但序列确定的引物扩增甲减和正常大鼠脑cDNA ,用PAGE分析PCR产物 ,EB染色 ,切取差异条带 ,再扩增、测序并作同源性分析。　结果得到两个... 目的建立非同位素mRNA差异显示技术 ,并用以分析鼠脑甲状腺激素的反应基因。　方法用 9-1 0bp的随机但序列确定的引物扩增甲减和正常大鼠脑cDNA ,用PAGE分析PCR产物 ,EB染色 ,切取差异条带 ,再扩增、测序并作同源性分析。　结果得到两个 (2 2 6、2 79bp)受甲状腺激素上调、一个 (2 78bp)受甲状腺激素下调的片段 ,前二者与任何已知基因的同源性都低于 80 % ,提示为两个尚未报道的新基因 ,后者即大鼠G蛋白Go的α亚单位基因。　结论非同位素mRNA差异显示技术是一种快速、简便。 展开更多

关键词 差异显示 聚合酶链反应 甲状腺激素 非同位素

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非同位素PCR－SSCP方法的初步临床应用 被引量：2

2

作者 毛新 黄明生 +3 位作者 牟庶华 杨光华 曾仲 赵坡 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期4-7,共4页

单链构象多态性检测法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）是近年发展起来的一项检测人类基因组突变的新技术。然而，在该技术中需要使用放射性同位素标记的核苷酸或引物，从而限制了其广泛临床研究及诊断方面的应用。本文报告一种改进的ＰＣＲ－ＳＳ... 单链构象多态性检测法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）是近年发展起来的一项检测人类基因组突变的新技术。然而，在该技术中需要使用放射性同位素标记的核苷酸或引物，从而限制了其广泛临床研究及诊断方面的应用。本文报告一种改进的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法，该方法不用同位素标记引物，而直接在溴乙啶染色的聚丙烯酰胺凝胶上显示ＳＳＣＰ。用该方法对５５例平滑肌肉瘤ｐ５３基因第７外显子突变的检测表明，３８％的瘤组织ＤＮＡ存在异常的ＳＳＣＰ。其中１０例有ＨａｅⅢ和ＭｓｐＩ酶切位点的突变（１８％），１９例有突变型ｐ５３蛋白的过度表达（９例同时有异常ＳＳＣＰ改变）。而ｐ５３质粒ＤＮＡ，平滑肌瘤及Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病患者基因组ＤＮＡ无ｐ５３基因第７外显子扩增片段的异常ＳＳＣＰ改变。同时，还使用该方法对临床诊断的２０例Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病患者和８例健康对照进行了β－淀粉样蛋白前体基因第１６和１７外显子的扩增及分析，均未发现有异常ＳＳＣＰ改变及ＥｃｏＲＩ，ＢｃｌＩ酶切位点的突变。本研究结果提示，该非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法可靠、敏感、简便、快速，具有潜在的推广价值。 展开更多

关键词 非同位素 PCR-SSCP 临床应用 实验室诊断

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非同位素反向Northern筛选法 被引量：4

3

作者 张宇伟 来茂德 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期353-355,共3页

此文介绍了一种非同位素简单快速的反向Northern筛选方法。采用非同位素法标记探针,操作简便,不涉及污染环境。在杂交过程中采用三次校正,结果可靠,重复性好。该方法能有效地,高通量地验证差异表达基因。

关键词 非同位素 反向 NORTHERN 抑制性差减杂交(SSH)

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非同位素标记pAW101探针作人流胚胎组织的亲权鉴定 被引量：1

4

作者 杨英浩 刘超 +3 位作者 罗超权 伍新尧 罗健扬 刘煦文 《中山医科大学学报》 CSCD 1992年第4期49-52,共4页

DNA限制性片段长度多态性(RFLPs)技术的经典方法是用酚抽提DNA,同位素标记探针。本文研究选用N_aCI盐析分离DNA的技术,结合地高辛配基标记pAW101探针方法,作了11例无争议的胚胎组织的亲权鉴定,同时测定4种同Ⅰ酶型,在不违反孟德尔遗规... DNA限制性片段长度多态性(RFLPs)技术的经典方法是用酚抽提DNA,同位素标记探针。本文研究选用N_aCI盐析分离DNA的技术,结合地高辛配基标记pAW101探针方法,作了11例无争议的胚胎组织的亲权鉴定,同时测定4种同Ⅰ酶型,在不违反孟德尔遗规律的前提下,按Essen-Moller公式计算父权概率(均>99.73％),达到确定亲生关系的标准。本方法简单、易于掌握,结果稳定可靠,适宜于一般实验室开展工作。 展开更多

关键词 非同位素标记 亲权鉴定 人流胚胎

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电子显微镜水平非同位素原位杂交技术的现状与问题

5

作者 易静 《电子显微学报》 CAS CSCD 1996年第2期307-313,共7页

本文介绍原位杂交(非同位素方法)这一由分子生物学与组织学技术结合而成的新技术在电子显微镜水平的发展历史、目前的研究状况和存在的问题。本文结合作者应用电镜原位杂交技术探测肾脏内胶原mRNA分子的工作,报道了自己对包埋后电镜原... 本文介绍原位杂交(非同位素方法)这一由分子生物学与组织学技术结合而成的新技术在电子显微镜水平的发展历史、目前的研究状况和存在的问题。本文结合作者应用电镜原位杂交技术探测肾脏内胶原mRNA分子的工作,报道了自己对包埋后电镜原位杂交技术的改良所作的探索,并阐述了对这一技术的灵敏度、"嗓音"干扰和分辨率等所存在问题的见解。 展开更多

关键词 原位杂交 电子显微镜 非同位素 包埋后

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SMT非同位素标记探针的制备

6

作者 魏平华 王建忠 +4 位作者 邱伦和 彭国良 陈清轩 曹颉 宋德秀 《畜牧兽医科技》 1992年第2期19-20,共2页

本试验以一种核苷酸类似物Digoxigenin-11-dUTP(地高辛与dUTP的联接结构,地高辛只天然存在于毛地黄中,是理想的半抗原),用随机引物法掺入绵羊MT启动子(SMT),检测目的基因时再加入抗体一酶连接物(Anti-digoxigeninalkalinephosphatase)... 本试验以一种核苷酸类似物Digoxigenin-11-dUTP(地高辛与dUTP的联接结构,地高辛只天然存在于毛地黄中,是理想的半抗原),用随机引物法掺入绵羊MT启动子(SMT),检测目的基因时再加入抗体一酶连接物(Anti-digoxigeninalkalinephosphatase)与地高辛发生免疫反应。 展开更多

关键词 SMT 非同位素 标记 探针

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氧的非质量同位素分馏及其地学应用 被引量：4

7

作者 熊志方 胡超涌 +2 位作者 黄俊华 谢树成 甘义群 《地质科技情报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期51-58,共8页

氧的非质量同位素分馏(mass-independe nitsotop feractionation)为全球变化研究提供了新方法。在介绍非质量同位素分馏的基础上,评述了氧同位素异常[Δ(17O)]的表示方法以及氧的非质量同位素分馏的产生机制,重点综述了氧的非质量同位... 氧的非质量同位素分馏(mass-independe nitsotop feractionation)为全球变化研究提供了新方法。在介绍非质量同位素分馏的基础上,评述了氧同位素异常[Δ(17O)]的表示方法以及氧的非质量同位素分馏的产生机制,重点综述了氧的非质量同位素分馏在地球科学中的应用。基于Δ(17O)评估的生物圈生产力是全球总的生物生产力,打破了以往只能孤立地评估陆地或海洋生物生产力的瓶颈,奠定了在更广时空尺度上评估生物生产力的基础;Δ(17O)能量化形成气溶胶硫酸盐和硝酸盐的气相与液相氧化反应路径的相对比例,为研究气溶胶和气候的互馈作用提供了新途径;冰芯中S同位素和Δ(17O)的联合运用,不仅解决了冰芯中硫酸盐、硝酸盐的来源和运移问题,而且还为其形成的氧化过程提供了细节信息;而干旱区硫酸盐、硝酸盐矿物中Δ(17O)的发现在解决一些长期有争议的沉积物成因和来源问题中起关键作用。氧的非质量同位素分馏还将在(古)大气臭氧活性、火山喷发柱化学和O、S、N生物地球化学循环等研究中发挥更大作用。 展开更多

关键词 氧 非质量同位素分馏 氧向位素异常[△(^17O)] 全球变化 硫酸盐和硝酸盐

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非质量同位素分馏效应及其应用 被引量：1

8

作者 李延河 丁悌平 《地质论评》 CAS CSCD 北大核心 2002年第S1期289-293,共5页

物理、化学和生物作用引起的热力学和动力学同位素分馏几乎均为与质量有关的分馏。与质量有关的同位素分馏遵守质量分馏方程,分馏系数lnα与同位素的相对质量差(m~*—m)/(m~*·m)成正比。非质量同位素分馏效应最早是由Clayton(1973)... 物理、化学和生物作用引起的热力学和动力学同位素分馏几乎均为与质量有关的分馏。与质量有关的同位素分馏遵守质量分馏方程,分馏系数lnα与同位素的相对质量差(m~*—m)/(m~*·m)成正比。非质量同位素分馏效应最早是由Clayton(1973)在Allende碳质球粒陨石的富钙—铝包体(CAIs)中观测到的,δ^(17)O≈δ^(18)O;与地球物质中与质量有关的氧同位素分馏形成鲜明对照(δ^(17)O=0.52δ^(18)O)。后来Thiemens(1983)在分子氧(O_2)形成臭氧(O_3)的光化学反应实验中观测到了与CAIs中相似的氧同位素非质量分馏效应。现在非质量同位素分馏效应已被用于示踪一些元素浓度,甚至单个同位素比值测量无法揭示的特殊的作用过程。 展开更多

关键词 非质量同位素分馏效应 光化学反应

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汞同位素地球化学概述 被引量：30

9

作者 冯新斌 尹润生 +2 位作者 俞奔 杜布云 陈玖斌 《地学前缘》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第5期124-135,共12页

汞同位素是一个新兴的地球化学示踪手段。过去十多年来,随着质谱技术的飞跃发展,汞同位素地球化学研究取得了引人注目的进展,主要体现在如下两个方面。(1)实验及理论地球化学研究表明,汞生物地球化学循环的一系列过程都能导致显著的汞... 汞同位素是一个新兴的地球化学示踪手段。过去十多年来,随着质谱技术的飞跃发展,汞同位素地球化学研究取得了引人注目的进展,主要体现在如下两个方面。(1)实验及理论地球化学研究表明,汞生物地球化学循环的一系列过程都能导致显著的汞同位素质量分馏。此外,汞还是自然界少数存在同位素非质量分馏的金属元素之一。汞同位素非质量分馏对识别某些特殊地球化学过程(如光还原作用、挥发作用等)具有重要指示意义。(2)自然样品的汞同位素测试表明,自然界汞同位素组成(δ202 Hg和Δ199 Hg)变化可达>10‰。目前,汞同位素地球化学已被应用于汞污染源示踪、汞生物地球化学过程判别等领域,并有望在不久的将来在汞的大气化学、生物地球化学等领域得到更为广泛的应用。 展开更多

关键词 汞 汞同位素 同位素质量分馏 同位素非质量分馏 地球化学示踪

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提高非放射性标记核酸分子杂交敏感性的研讨

10

作者 王伯云 彭玮丹 +1 位作者 吴人亮 李玉松 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1994年第4期32-33,共2页

提高非放射性标记核酸分子杂交敏感性的研讨王伯云，彭玮丹，吴人亮，李玉松（西安第四军医大学病理学教研室，西安７１００３２）非同位素标记核酸探针应用于分子杂交技术，已受到重视，正在生物学和医学领域推广，在临床检测中已用于... 提高非放射性标记核酸分子杂交敏感性的研讨王伯云，彭玮丹，吴人亮，李玉松（西安第四军医大学病理学教研室，西安７１００３２）非同位素标记核酸探针应用于分子杂交技术，已受到重视，正在生物学和医学领域推广，在临床检测中已用于一些疾病的诊断，称多基因诊断。分子... 展开更多

关键词 核酸分子杂交 非放射性标记 非同位素标记 核酸探针 光敏生物素 斑点杂交 地高辛标记 基因诊断 医学领域 玉松

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金刚石中的硫化物包裹体:对地球早期演化及古老地壳物质再循环的示踪 被引量：1

11

作者 丁永康 丘志力 +2 位作者 邓小芹 马瑛 孙媛 《大地构造与成矿学》 北大核心 2025年第1期85-102,共18页

地球早期演化及古老地壳物质再循环是地球科学领域研究的热点和难点问题之一。研究该科学问题的关键在于能否找到直接的物质记录。而形成于新太古代到中生代,主要分布于克拉通岩石圈地幔(可以延伸到过渡带甚至下地幔)的金刚石具有生长... 地球早期演化及古老地壳物质再循环是地球科学领域研究的热点和难点问题之一。研究该科学问题的关键在于能否找到直接的物质记录。而形成于新太古代到中生代,主要分布于克拉通岩石圈地幔(可以延伸到过渡带甚至下地幔)的金刚石具有生长时间跨度长,分布范围广的特点。金刚石及其生长过程中所捕获的地幔矿物成为其最理想的研究载体。其中,金刚石生长过程中捕获的俯冲沉积硫化物和地幔原始硫化物,为与金刚石形成有关的克拉通早期形成与演化过程以及超大陆旋回背景下的俯冲事件提供了来自年代学及同位素地球化学的独特指示。近二十年来的研究表明:①硫化物包裹体主要有地幔原生来源和古老壳源俯冲物质来源两大类;②硫化物包裹体的Re-Os等时线年龄限定了金刚石的形成时代,大量定年工作为早期板块构造的启动时间提供了关键性证据;③硫化物包裹体的非质量分馏S同位素(MIF-S)记录了大氧化事件发生前贫氧大气环境下的壳源沉积硫化物信号,为建立地球早期硫循环模型和板块构造过程提供了重要依据。此外,本文在综合分析国际金刚石硫化物包裹体研究成果的基础上,提出了当前研究仍存在的问题以及对我国金刚石硫化物包裹体研究的思考。 展开更多

关键词 金刚石 硫化物包裹体 RE-OS定年 非质量分馏S同位素 古老地壳物质再循环 板块构造

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Algoma型和Superior型硅铁建造地球化学对比研究 被引量：39

12

作者 李延河 侯可军 +1 位作者 万德芳 张增杰 《岩石学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第11期3513-3519,共7页

前寒武纪条带状硅铁建造(BIFs)是世界上最重要的铁矿资源类型和地球早期特有的化学沉积建造类型,广泛分布于太古代-古元古代(3.2～1.8Ga),记录了地球早期岩石圈、水圈、大气圈和生物圈的状态及演化。前人根据BIFs的岩石组合和构造地质... 前寒武纪条带状硅铁建造(BIFs)是世界上最重要的铁矿资源类型和地球早期特有的化学沉积建造类型,广泛分布于太古代-古元古代(3.2～1.8Ga),记录了地球早期岩石圈、水圈、大气圈和生物圈的状态及演化。前人根据BIFs的岩石组合和构造地质环境将其划分为Algoma型和Superior型。本文对比研究了Algoma型和Superior型BIFs的硅、氧、铁和多硫同位素特征。不同时代和不同类型BIFs的硅氧同位素组成非常相似,强烈亏损30Si,δ30SiNBS-28为较大的负值。二者的铁同位素和硫同位素非质量分馏效应明显不同。Algoma型BIF的Δ33S多为负值,而Superior型BIF的Δ33S多为正值;Algoma型BIF富集重铁同位素,δ56FeIRMM-144多为高正值,而Superior型BIF相对富集轻铁同位素,δ56FeIRMM-144多为负值或小正值。研究提出无论是Algoma型,还是Superior型BIFs都是由地球早期的海底火山热液喷气作用形成的,二者属于同一成矿系统,相对而言,Algoma型BIF与火山活动关系更密切,距离同期火山活动中心更近,多形成于深水盆地,环境更加还原。 展开更多

关键词 条带状硅铁建造BIFs 硅铁同位素 硫同位素非质量分馏

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mRNA差异显示技术的研究进展 被引量：7

13

作者 陈永华 严钦泉 +1 位作者 余建蒲 肖国樱 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期9-12,43,共5页

针对mRNA差异显示技术中的假阳性高和放射性污染等缺陷,文章从改进引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定等方面进行了综述。1采用4种兼并或单碱基引物作锚定引物;用特异和长序列(≥20bp)专一性引物作为随机引物,可增加... 针对mRNA差异显示技术中的假阳性高和放射性污染等缺陷,文章从改进引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定等方面进行了综述。1采用4种兼并或单碱基引物作锚定引物;用特异和长序列(≥20bp)专一性引物作为随机引物,可增加特异性;在锚定引物之前加上了一段T7启动子序列,在随机引物前加上一段M13重复序列,可使DDRT—PCR的体系的扩增特异性更一致。2针对放射性同位素检测法的缺点,文章提出并比较了几种常用的非放射性同位素标记方法。3保证起始(模板)mRNA质量和浓度,降低dNTP浓度,选择最适的反转录和PCR退火温度,可优化PCR参数。4用两种不同的反转录酶进行反转录平行实验,很容易区分出RNA制备过程中造成的假阳性,目前假阳性鉴定大多还是以Northern印迹为基础,再作些适当的改进。 展开更多

关键词 MRNA差异显示技术 研究进展 Northern 非放射性同位素 非放射性标记 dNTP浓度 锚定引物 随机引物 放射性污染 启动子序列 假阳性 重复序列 标记方法 退火温度 平行实验 反转录酶 制备过程 R参数 特异性 PCR 单碱基 专一性

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地高辛标记核酸探针的应用

14

作者 刘剑凯 洪敏 +1 位作者 董丽雅 陈文华 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1995年第4期432-433,共2页

本工作中以肿瘤多药耐受基因ＭＤＲ－１的ｃＤＮＡ的限制片段（５Ａ）为模板ＤＮＡ，把模板ＤＮＡ用随机引物法标记上地高辛标记的脱氧尿苷三磷酸ＤＩＧ－ｄＵＴＰ。将此地高辛标记的核酸探针与变性的同源质粒及部分头颈肿瘤组织ＲＮＡ... 本工作中以肿瘤多药耐受基因ＭＤＲ－１的ｃＤＮＡ的限制片段（５Ａ）为模板ＤＮＡ，把模板ＤＮＡ用随机引物法标记上地高辛标记的脱氧尿苷三磷酸ＤＩＧ－ｄＵＴＰ。将此地高辛标记的核酸探针与变性的同源质粒及部分头颈肿瘤组织ＲＮＡ进行点杂交后，用抗地高辛－碱性磷酸酶及其底物进行酶联免疫分析，探讨了应用这种非放射性地高辛标记的ＤＮＡ探针及其检测系统的敏感性以及应用价值。 展开更多

关键词 非同位素标记法 核酸探针 地高辛 肿瘤 基因表达

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