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增强型ARMS PCR检测脑胶质瘤中IDH1基因突变方法的建立
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作者 曹丹华 高盼惠 +4 位作者 怡然 胡香杰 冯国清 张莉蓉 范天黎 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1061-1061,共1页
目的脑胶质瘤中异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)基因突变状态与患者预后及治疗密切相关,IDH1基因突变90%发生在R132位点。该位点突变较未突变的患者生存期显著提高,并对替莫唑胺的敏感性增强。临床检测IDH1基因突变常采用直接测序法(ARMS PCR),... 目的脑胶质瘤中异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)基因突变状态与患者预后及治疗密切相关,IDH1基因突变90%发生在R132位点。该位点突变较未突变的患者生存期显著提高,并对替莫唑胺的敏感性增强。临床检测IDH1基因突变常采用直接测序法(ARMS PCR),但突变比例低于20%的标本易被忽略。故本课题建立了较ARMS PCR更有效的增强型ARMS PCR检测方法。方法 (1)构建IDH1野生型和R132H位点突变阳性质粒标准品。(2)设计IDH1基因R132H位点突变引物和Taqman探针引物,按突变质粒标准品占野生质粒标准品的比例进行梯度稀释,运用增强型ARMS PCR法检测敏感性;将野生质粒标准品梯度稀释,增强型ARMS PCR法检测非特异性扩增CT值与内参CT值,评价特异性。(3)提取脑胶质瘤石蜡包埋组织DNA,ARMS PCR法和增强型ARMS PCR法检测R132H位点突变情况,比较二者的符合率和Kappa值。结果 (1)成功构建IDH1野生型和R132H位点突变质粒标准品。(2)设计四条增强型ARMS PCR引物:一对特异性突变ARMS引物,非人源接头引物和Taqman探针引物;敏感性检测突变DNA可至0.05%;特异性检测在50 ng相对高质量的野生质粒背景下,检测R132H位突变未见非特异性扩增。(3)两种检测结果符合率为100%,Kappa=1。结论增强型ARMS PCR法检测脑胶质瘤中IDH1基因突变有敏感性高、特异性强、简单快捷的特点,可在临床推广使用。 展开更多
关键词 IDH1 脑胶质瘤 增强型ARMS PCR 非人源接头 TAQMAN探针
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