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青蟹双顺反子病毒-1原位杂交检测方法的建立与应用 被引量:1
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作者 崔亚婷 倪军 +4 位作者 马红玲 许海东 冯娟 申亚阳 郭志勋 《广东农业科学》 CAS 2015年第11期130-134,F0003,共6页
根据青蟹双顺反子病毒-1(mud crab dicistrovirus-1,MCDV-1)基因的保守序列设计1对引物,从感染MCDV-1的青蟹鳃组织中提取RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到1 314 bp的c DNA片段。纯化后的PCR产物用地高辛(DIG)标记制备核酸探针,此探针与青... 根据青蟹双顺反子病毒-1(mud crab dicistrovirus-1,MCDV-1)基因的保守序列设计1对引物,从感染MCDV-1的青蟹鳃组织中提取RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到1 314 bp的c DNA片段。纯化后的PCR产物用地高辛(DIG)标记制备核酸探针,此探针与青蟹呼肠孤病毒(MCRV)、鲍肌肉萎缩症病毒(Ab SV)、类疱疹病毒(Ab HV)、白斑综合症病毒(WSSV)、虎纹蛙病毒(TFV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)等水生动物常见病毒均无交叉反应,可以特异性的检测出MCDV-1,检出MCDV-1的灵敏度为8.58×107 copies/μL。采用原位杂交检测方法检测拟穴青蟹组织中MCDV-1的组织分布,结果表明,拟穴青蟹中MCDV-1 RNA的阳性信号主要分布于肝胰腺、神经节、肠道和食管。 展开更多
关键词 拟穴青蟹 青蟹双顺反子病毒-1 地高辛核酸探针 原位杂交
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广东沿海地区拟穴青蟹呼肠孤病毒和双顺反子病毒-1的分子流行病学调查 被引量:4
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作者 申亚阳 杨铿 +3 位作者 马红玲 冯娟 苏友禄 郭志勋 《生态科学》 CSCD 2017年第1期17-24,共8页
运用双重巢式PCR方法于2014年10月和11月份对广东省阳江市、台山市、中山市、惠州市(大亚湾地区、惠东地区)、汕尾市(东涌地区、红海湾地区)等主要拟穴青蟹(Scylla paramamosain)养殖地区的青蟹呼肠孤病毒(mud crab reovirus,MCRV)和青... 运用双重巢式PCR方法于2014年10月和11月份对广东省阳江市、台山市、中山市、惠州市(大亚湾地区、惠东地区)、汕尾市(东涌地区、红海湾地区)等主要拟穴青蟹(Scylla paramamosain)养殖地区的青蟹呼肠孤病毒(mud crab reovirus,MCRV)和青蟹双顺反子病毒-1(mud crab discistrovirus-1,MCDV-1)流行情况进行检测调查和序列分析。结果表明在调查的地区中,60%—100%的拟穴青蟹至少携带一种病毒。10月份阳江地区、台山地区、中山地区、汕尾东涌和汕尾红海湾地区拟穴青蟹MCRV携带率分别为71.42%、68.97%、70%、72.41%和64%,MCDV-1携带率分别为61.29%、24.14%、63.33%、13.79%和12%;各地区两种病毒双重感染率均在50%以下。11月份阳江地区、台山地区、中山地区、惠州大亚湾地区和惠州惠东地区拟穴青蟹MCRV携带率分别为50%、95.65%、100%、93.1%和82.76%,MCDV-1携带率分别为10%、100%、93.1%、37.93%和27.59%,台山和中山地区地区两种病毒双重感染率均在90%以上,惠州、汕尾地区以单独感染为主。五个地区获得的27株MCRV序列中,各个地区内获得的核酸序列同源性均在99.2%—100%之间,MCRV序列遗传进化基本无地域差异;获得35株MCDV-1序列中,各个地区内获得的核酸序列同源性均在91.4%—100%之间,MCDV-1序列遗传进化出现一定的地域差异。 展开更多
关键词 拟穴青蟹 青蟹呼肠孤病毒 青蟹顺反子病毒 分子流行病学 调查
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“青蟹双顺反子病毒检测用引物组、检测方法和快速诊断试剂盒”获国家发明专利授权
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《水产养殖》 CAS 2014年第7期47-47,共1页
由中国水产科学研究院南海水产研究所郭志勋、张迪、冯娟等发明的"青蟹双顺反子病毒检测用引物组、检测方法和快速诊断试剂盒"获国家发明专利授权,专利号为:ZL201210223292.6。该发明公开了一种青蟹双顺反子病毒检测用引物组、检测... 由中国水产科学研究院南海水产研究所郭志勋、张迪、冯娟等发明的"青蟹双顺反子病毒检测用引物组、检测方法和快速诊断试剂盒"获国家发明专利授权,专利号为:ZL201210223292.6。该发明公开了一种青蟹双顺反子病毒检测用引物组、检测方法和快速诊断试剂盒,该引物组由如下四条引物组成:外引物F3、外引物B3、内引物FIP和内引物BIP。该发明涉及的引物组、检测方法和试剂盒均可高效高特异性地检测青蟹双顺反子病毒,引物组特异性强。检测方法检测成本低、耗时短、产率高,特异性高,且阴阳性结果显色差异显著,验证率高,更加明显可靠。 展开更多
关键词 快速诊断试剂盒 病毒检测 顺反子 专利授权 引物 发明 青蟹 中国水产科学研究院
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猴T淋巴细胞趋向性病毒1型双抗原夹心ELISA检测试剂盒的研制 被引量:4
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作者 季芳 刘晓明 饶军华 《中国比较医学杂志》 CAS 2008年第3期64-67,共4页
目的研制灵敏度和特异性高的检测实验猴血清中T淋巴细胞趋向性病毒-1型(STLV-1型)抗体的双抗原夹心ELISA(dsELISA)检测试剂盒。方法采用经原核表达系统表达并纯化的人T淋巴细胞白血病病毒-1型(HTLV-1型)的Env蛋白作为包被用抗原,建立了... 目的研制灵敏度和特异性高的检测实验猴血清中T淋巴细胞趋向性病毒-1型(STLV-1型)抗体的双抗原夹心ELISA(dsELISA)检测试剂盒。方法采用经原核表达系统表达并纯化的人T淋巴细胞白血病病毒-1型(HTLV-1型)的Env蛋白作为包被用抗原,建立了检测STLV-1的dsELISA诊断方法。通过优化反应条件和筛选试剂,确定了dsELISA诊断试剂盒的相关条件,并经敏感性、特异性和重复性试验考查该试剂盒质量。结果试剂盒特异性好,批内重复试验变异系数(CV)<7%,批间重复试验CV<10%。对200份猴血清进行随机检测,与国际公认的诊断试剂盒(美国BioReliance公司)的符合率为97%。结论本试剂盒可初步应用于临床上实验猴STLV-1型抗体的检测。 展开更多
关键词 猴T淋巴细胞趋向性病毒-1型 抗原夹心法 试剂盒
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广东省阳江地区野生拟穴青蟹2种病毒感染情况调查 被引量:5
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作者 张迪 苏友禄 +3 位作者 冯娟 马红玲 付腾 郭志勋 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期137-141,共5页
青蟹双顺反子病毒-1(mudcrabdicistrovirus-1,MCDV-1)和青蟹呼肠孤病毒(mudcrabreovirus,MCRV)是对养殖拟穴青蟹有较强致病性的2种病原,可导致高死亡率。文章采用双重巢式PCR检测法对2012年阳江地区5月-10月捕捞的野生拟穴青蟹(... 青蟹双顺反子病毒-1(mudcrabdicistrovirus-1,MCDV-1)和青蟹呼肠孤病毒(mudcrabreovirus,MCRV)是对养殖拟穴青蟹有较强致病性的2种病原,可导致高死亡率。文章采用双重巢式PCR检测法对2012年阳江地区5月-10月捕捞的野生拟穴青蟹(Scyllaparamamosain)病毒感染情况进行调查。结果显示,阳江地区2012年5月~10月的野生青蟹群体一直保持较高的病毒携带率(44.83%-100%),其中MCDV-1检出率最高的月份为6月、8月和9月,MCRV检出率最高的月份为5月-6月和8月~9月;以单独感染类型为主的月份为5月、7月和10月(〉44.83%),以双阳性感染类型为主的月份为6月、8月和9月(〉82.76%)。由此可见,2种病毒的流行月份为5月~6月和8月~9月;在流行月份期间2种病毒常常协同感染野生拟穴青蟹。 展开更多
关键词 拟穴青蟹 青蟹双顺反子病毒-1 青蟹呼肠孤病毒 调查
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