雪花莲外源凝集素基因在水稻保持系上的转化 被引量：4

1

作者 牛芝霞 朱祯 +5 位作者 李艳萍 吴茜 邹美智 牛景 孙海波 周维 《天津农业科学》 CAS 2003年第2期1-4,共4页

通过把雪花莲外源凝集素基因(GNA)与潮霉素抗性基因(Hyg)构建到同一表达载体上,利用基因枪转化方法,把雪花莲外源凝集素基因导入粳稻保持系中,通过PCR方法和潮霉素抗性筛选,检测该基因的导入情况,发现部分克隆植株只具有单一潮霉素抗性... 通过把雪花莲外源凝集素基因(GNA)与潮霉素抗性基因(Hyg)构建到同一表达载体上,利用基因枪转化方法,把雪花莲外源凝集素基因导入粳稻保持系中,通过PCR方法和潮霉素抗性筛选,检测该基因的导入情况,发现部分克隆植株只具有单一潮霉素抗性,需要结合抗虫性测定来确定GNA基因的导入及表达。 展开更多

关键词 雪花莲外源凝集素基因 水稻 保持系 遗传转化 潮霉素抗性基因 基因枪 PCR方法 基因表达

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雪花莲外源凝集素基因的克隆及其多态性分析 被引量：7

2

作者 朱玉 朱祯 徐鸿林 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第9期36-41,共6页

从雪花莲（Ｇａｌａｎｔｈｕｓｎｉｖａｉｌｓ） 叶片中分离出了长度为４８４ｂｐ 的雪花莲外源凝集素ｃＤＮＡ，包含了完整的雪花莲外源凝集素编码序列。通过限制性酶切图谱及ＤＮＡ序列分析， 从中筛选出５ 种核苷酸且氨基酸序列均有... 从雪花莲（Ｇａｌａｎｔｈｕｓｎｉｖａｉｌｓ） 叶片中分离出了长度为４８４ｂｐ 的雪花莲外源凝集素ｃＤＮＡ，包含了完整的雪花莲外源凝集素编码序列。通过限制性酶切图谱及ＤＮＡ序列分析， 从中筛选出５ 种核苷酸且氨基酸序列均有差别的外源凝集素基因ＧＮＡ１１、ＧＮＡ１２、ＧＮＡ１３、ＧＮＡ１４和ＧＮＡ１５。将这５ 个克隆与６个已报道的序列进行比较， 发现其中ＧＮＡ１４ 与ＧＮＡ１５同源性最高，它们之间核苷酸序列及推导出的氨基酸序列的同源性分别为９８０％ 和９６２％ ， ＬＥＣＧＮＡ１ 与ＧＮＡ１１ 同源性最低， 它们之间核苷酸序列及推导出的氨基酸序列的同源性分别为７７３％ 和６５０％ 。 展开更多

关键词 雪花莲 外源凝集素 多基因家族 RT-PCR DNA序列

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农杆菌介导的雪花莲凝集素基因转入玉米骨干自交系 被引量：13

3

作者 权瑞党 尚梅 +1 位作者 王兆玉 张举仁 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第5期761-767,共7页

以农杆菌AGL0介导,将雪花莲凝集素基因转入玉米骨干自交系齐319和掖515胚性愈伤组织细胞,从筛选后的抗性愈伤组织获得再生植株.农杆菌浓度和共培养时间均能显著影响侵染后玉米愈伤组织的抗性频率.在农杆菌浓度OD6000.2～0.3,共培养时间3... 以农杆菌AGL0介导,将雪花莲凝集素基因转入玉米骨干自交系齐319和掖515胚性愈伤组织细胞,从筛选后的抗性愈伤组织获得再生植株.农杆菌浓度和共培养时间均能显著影响侵染后玉米愈伤组织的抗性频率.在农杆菌浓度OD6000.2～0.3,共培养时间3d时,侵染后玉米愈伤组织的抗性频率最高,平均约4%.对再生植株及其子代基因组DNA的PCR及Southern杂交分析表明雪花莲凝集素基因已经整合到玉米基因组中,并遗传给后代.在蚜虫人工接种试验中,转基因植株上蚜虫的繁殖力为非转基因对照植株上的50%,这表明转基因植株抗蚜性显著增强. 展开更多

关键词 农杆菌 玉米 胚性愈伤组织 转化 雪花莲凝集素

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雪花莲凝集素基因转化新疆甜瓜抗蚜虫的研究 被引量：6

4

作者 钟俐 李群 李冠 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期556-560,共5页

采用农杆菌介导法对新疆甜瓜进行了遗传转化研究,对影响转化频率的不同因素,即:抗生素浓度、预培养有无及感染时菌液的不同处理、外植体与农杆菌的感染时间和共培养时间等进行了研究,通过农杆菌介导法将雪花莲凝集素基因导入四日龄甜瓜... 采用农杆菌介导法对新疆甜瓜进行了遗传转化研究,对影响转化频率的不同因素,即:抗生素浓度、预培养有无及感染时菌液的不同处理、外植体与农杆菌的感染时间和共培养时间等进行了研究,通过农杆菌介导法将雪花莲凝集素基因导入四日龄甜瓜子叶外植体,获得了卡那霉素的抗性植株。移栽成活并生长良好。卡那霉素抗性鉴定及转化株总DNA的PCR分析表明,GNA基因已整合到甜瓜的基因组中。初步抗蚜虫实验证明,转基因甜瓜有一定的抗棉蚜幼虫效果。 展开更多

关键词 甜瓜 雪花莲凝集素基因 农杆菌介导法

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雪花莲凝集素基因(GNA)植物表达载体的构建及其对烟草的遗传转化 被引量：3

5

作者 柴红梅 姚春馨 +1 位作者 张绍松 黄兴奇 《西南农业学报》 CSCD 2004年第B05期66-68,共3页

将雪花莲凝集素基因(GNA)取代GUS基因正向插入到Ti质粒载体pBI121的35S启动子之下,构建成植物表达载体pBI121/GNA,并将其导入农杆菌LBA4404中。通过该农杆菌介导转化烟草红花大金元,得到卡那霉素抗性植株159株,PCR检测表明其中102株为... 将雪花莲凝集素基因(GNA)取代GUS基因正向插入到Ti质粒载体pBI121的35S启动子之下,构建成植物表达载体pBI121/GNA,并将其导入农杆菌LBA4404中。通过该农杆菌介导转化烟草红花大金元,得到卡那霉素抗性植株159株,PCR检测表明其中102株为阳性。对8株PCR阳性植株进行了抗蚜虫生物活性检测,抑制蚜虫密度为25％-90％。 展开更多

关键词 雪花莲凝集素 基因 GNA 植物 表达载体 蚜虫 生物活性 烟草

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雪花莲凝集素在转基因蔬菜中的抗虫性

6

作者 孙志宏 邓振山 李延清 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第6期1141-1142,共2页

综述了雪花莲凝集素的结构、特性、杀虫机理以及在转基因蔬菜中抗虫性和应用前景。

关键词 雪花莲凝集素 转基因植物 蔬菜 抗虫性 应用前景

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国槐转雪花莲凝集素基因及抗蚜性 被引量：7

7

作者 张晓英 甘敬 +2 位作者 尹伟伦 朱祯 王华芳 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第2期51-55,F0003,共6页

通过农杆菌介导法将雪花莲外源凝集素基因(gna)导入国槐叶片,获得转基因再生植株,经卡那霉素抗性筛选,PCR和Southern blot检测证实,gna基因已经整合进入国槐基因组中。凝血活性检测表明,大部分转基因植株表现出一定的凝血活性,对照未转... 通过农杆菌介导法将雪花莲外源凝集素基因(gna)导入国槐叶片,获得转基因再生植株,经卡那霉素抗性筛选,PCR和Southern blot检测证实,gna基因已经整合进入国槐基因组中。凝血活性检测表明,大部分转基因植株表现出一定的凝血活性,对照未转化植株的凝血活性很低。室内离体叶片虫试试验进一步证明,转基因植株较非转基因植株有一定的抗蚜虫能力。 展开更多

关键词 国槐 雪花莲凝集素 槐蚜 根癌土壤农杆菌 基因转化 虫口密度

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转雪花莲凝集素酶基因枸杞对蚜虫的抑制作用 被引量：2

8

作者 罗青 巫鹏举 +3 位作者 李晓莺 贝盏临 曲玲 曹有龙 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期65-67,共3页

利用农杆菌介导法将雪花莲外源凝集素酶基因导入枸杞叶片,获得了完整的转基因植株。对36个经PCR检测为阳性的转基因株系进行了两年抗蚜虫筛选试验,结果表明:蚜口密度抑制率在13.19%-95.4%,平均蚜口密度抑制率为78.59%。

关键词 枸杞 雪花莲外源凝集素酶基因 转化 蚜虫 抑制

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雪花莲凝集素抗虫作用研究进展 被引量：9

9

作者 张忠 叶恭银 胡萃 《中国生物防治》 CSCD 北大核心 2003年第4期197-201,共5页

本文就雪花莲凝集素的杀虫机理、杀虫活性、及其对天敌昆虫影响的研究进展做了着重介绍,并讨论了转雪花莲凝集素基因植物应用可能存在的问题及前景。

关键词 雪花莲凝集素 杀虫活性 转基因作物 安全性

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植物凝集素在作物转基因中的利用现状 被引量：5

10

作者 马员春 马维亮 +1 位作者 宋晓华 林志珊 《宁夏农林科技》 2010年第3期60-62,共3页

简述了几种代表性植物凝集素在作物转基因中的研究利用现状,提出了进一步研究的方向。

关键词 植物凝集素 转基因 雪花莲凝集素 半夏凝集素

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转基因抗虫棉凝集素的检测

11

作者 周晓静 白素芬 +1 位作者 李欣 闫凤鸣 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第9期91-94,共4页

为探讨外源杀虫基因导入对棉花重要防御物质凝集素的影响,同时建立棉花凝集素的灵敏检测方法,采用血凝法检测转基因(Bt、CpTI和外源凝集素基因)棉花中凝集素的变化,并经胰蛋白酶处理鸡血红细胞、不同温度处理和比色法测定棉花的凝集素... 为探讨外源杀虫基因导入对棉花重要防御物质凝集素的影响,同时建立棉花凝集素的灵敏检测方法,采用血凝法检测转基因(Bt、CpTI和外源凝集素基因)棉花中凝集素的变化,并经胰蛋白酶处理鸡血红细胞、不同温度处理和比色法测定棉花的凝集素活性。结果表明,棉花叶片中凝集素水平随棉花生长而发生变化,不同外源基因的导入使棉花凝集活性升高或降低。采用经胰蛋白酶修饰后的鸡血红细胞检测,棉花凝集活性明显提高,最高是未经处理检测的64倍。棉花凝集素具有一定的抗热性,在45℃以下很稳定,但随温度的升高和处理时间的延长活性下降。血凝反应和比色法均能直观、定量地反映棉株中凝集素活性,但后者精度更高。以上研究结果表明,外源杀虫基因的导入引起棉花凝集素水平发生改变,比色法可以作为检测棉株中自身和外源凝集素基因表达后凝集活性的重要手段。 展开更多

关键词 棉花 凝集素 外源杀虫基因 转基因棉

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转抗虫基因优良籼型恢复系的获得及其外源基因的遗传稳定性研究 被引量：22

12

作者 马炳田 李平 +1 位作者 朱祯 周开达 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期211-215,共5页

用基因枪法将雪花莲外源凝集素基因 (gna )转移到优良籼型杂交稻恢复系蜀恢 5 2 7中 ,通过 PCR、PCR- South-ern blotting和 Southern blotting等分子方法检测证明 ,外源基因已稳定遗传到转基因第三代 (T2 )。转基因第一代植株 (T0 )在... 用基因枪法将雪花莲外源凝集素基因 (gna )转移到优良籼型杂交稻恢复系蜀恢 5 2 7中 ,通过 PCR、PCR- South-ern blotting和 Southern blotting等分子方法检测证明 ,外源基因已稳定遗传到转基因第三代 (T2 )。转基因第一代植株 (T0 )在株高和结实率上与相应的组培、种子实生苗植株相比 ,发生明显的不可遗传的变异。随着繁殖代数的增加 ,转基因植株恢复到与对照植株一致。还讨论了 DNA微量提取法在转基因后代筛选中的运用。 展开更多

关键词 转抗虫基因优良籼型恢复系 外源基因 遗传稳定性 转基因水稻 雪花莲外源凝集素基因 DNA微量提取法

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粳稻抗虫转基因保持系的研究

13

作者 李艳萍 牛芝霞 +5 位作者 邹美智 孙海波 周维 牛景 朱祯 徐鸿林 《天津农业科学》 CAS 2004年第3期7-11,共5页

利用基因枪转化法,以优质粳稻保持系早花二B为受体,获得了含有GNA和Hyg基因的转基因植株。对T2产生的6个纯合株系进行多代潮霉素筛选、PCR分子检测及稻飞虱接种鉴定,表明标记基因在受体中稳定遗传,并高效表达,且一经纯合不再分离;而目... 利用基因枪转化法,以优质粳稻保持系早花二B为受体,获得了含有GNA和Hyg基因的转基因植株。对T2产生的6个纯合株系进行多代潮霉素筛选、PCR分子检测及稻飞虱接种鉴定,表明标记基因在受体中稳定遗传,并高效表达,且一经纯合不再分离;而目的基因表达效果不一样,只有T-10(克隆号A5-32)表达效果最好,其抗虫性达到中抗(MR)以上水平,比受体抗性(S)明显提高。将转基因保持系与不育系早花二A回交,获得的转基因不育系高抗潮霉素,且抗性也完全纯合,表明转基因保持系的抗性基因已转化到不育系中,并得到高效表达。 展开更多

关键词 粳稻 转基因保持系 雪花莲外源凝集素基因 潮霉素抗性基因 抗虫性

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转Bt+GNA双价基因抗虫棉花的抗虫性表现特征 被引量：12

14

作者 刘志 郭旺珍 +2 位作者 朱协飞 朱祯 张天真 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第1期37-41,共5页

采用昆虫生物测定的方法研究了转Bt +GNA双价基因抗虫棉花纯合株系TBG对棉铃虫和蚜虫的抗性表现特征。TBG植株在苗期、蕾期、开花期和结铃期的主茎叶都对棉铃虫幼虫具有很高的抗性 ,抗性水平与转Bt基因抗虫棉品系山西 94 2 4一致 ,但... 采用昆虫生物测定的方法研究了转Bt +GNA双价基因抗虫棉花纯合株系TBG对棉铃虫和蚜虫的抗性表现特征。TBG植株在苗期、蕾期、开花期和结铃期的主茎叶都对棉铃虫幼虫具有很高的抗性 ,抗性水平与转Bt基因抗虫棉品系山西 94 2 4一致 ,但对棉铃虫的抗性表现为生育前期高而后期低的特点。TBG植株在初花期的上部、中部和下部果枝叶对棉铃虫初孵幼虫的抗性均高于结铃期相对应部位叶片的抗性。TBG植株在苗期能抑制蚜口密度为 5 0 31% ,蕾期的抑制率为 4 6 61% ,在不同生育时期都表现出对棉蚜群体明显的抑制效果。 展开更多

关键词 转Bt+GNA双价基因抗虫棉花 棉铃虫 蚜虫 抗虫性 雪花链凝集素

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多重PCR方法对大豆转基因食品的定性检测 被引量：17

15

作者 张平平 刘宪华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第11期227-230,共4页

为了同时检测转基因食品中所含的多个目标基因序列,本文采用多重PCR分析技术对转基因大豆食品进行了检测。为了排除扩增结果的假阴性,大豆外源凝集素基因和肌动蛋白基因被作为内部对照以评价所有PCR反应的效率。当转基因大豆含量仅为0.... 为了同时检测转基因食品中所含的多个目标基因序列,本文采用多重PCR分析技术对转基因大豆食品进行了检测。为了排除扩增结果的假阴性,大豆外源凝集素基因和肌动蛋白基因被作为内部对照以评价所有PCR反应的效率。当转基因大豆含量仅为0.15%时,仍然可以对转基因食品进行可靠的鉴定,从而表明该方法的高度敏感性。该文所述的多重PCR系统是一种简单、准确并且敏感的检测方法,只需要进行一个反应就可以检测多个目标基因序列,因而可以用来对转基因原材料及加工成品进行高精度、高灵敏的检测。 展开更多

关键词 多重PCR分析 目标基因 假阴性 定性检测 对照 外源凝集素 同时检测 转基因大豆 转基因食品 加工

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浅析抗虫基因种类及抗虫原理 被引量：5

16

作者 袁胜亮 李明 +3 位作者 周国娜 姜文虎 高宝嘉 赵永强 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第31期9963-9964,共2页

概述了目前植物抗虫基因工程中应用较广的Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、外源凝集素基因、淀粉酶抑制剂基因和动物源抗虫基因及抗虫原理,分析了抗虫基因植物面临的问题,提出了延缓害虫对转基因植物抗性的解决建议。

关键词 BT毒蛋白基因 蛋白酶抑制剂基因 外源凝集素基因 淀粉酶抑制剂基因 动物源抗虫基因

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抗蚜虫转基因枸杞的初步研究 被引量：23

17

作者 罗青 曲玲 +1 位作者 曹有龙 许兴 《宁夏农林科技》 2001年第1期1-3,共3页

选用对蚜虫具有明显抗性的基因———雪花莲外源凝集素酶基因 ,用宁杞 1号的幼叶、幼茎、幼根与携带质粒的农杆菌共培养后 ,将其转移到含有 6-BA0 .5mg/L +NAA 1mg/L +60mg/L卡那霉素的MS培养基中诱导愈伤组织 ,10～ 15d后将诱导产生的... 选用对蚜虫具有明显抗性的基因———雪花莲外源凝集素酶基因 ,用宁杞 1号的幼叶、幼茎、幼根与携带质粒的农杆菌共培养后 ,将其转移到含有 6-BA0 .5mg/L +NAA 1mg/L +60mg/L卡那霉素的MS培养基中诱导愈伤组织 ,10～ 15d后将诱导产生的愈伤组织转移到含有 6-BA0 .5mg/L十NAA0 .0 1mg/L +60mg/L卡那霉素的MS分化培养基中 ,培养 2 0～ 30d ,在侵染外植体的愈伤组织上出现小芽 ,当芽长到 1.5～ 2cm时将其切下转入 6-BA0 .0 1mg/L +NAA0 .2mg/L +30mg/L卡那霉素的MS生根培养基中进一步筛选并使转化体生根 ,获得完整的抗蚜虫转基因枸杞。将获得的完整植株进行PCR分析检测 ,发现雪花莲外源凝集素酶基因已经整合到枸杞植株染色体上 ,片段大约在 50 0Pb ,其转化率为 65.1%。 展开更多

关键词 枸杞 遗传转化 雪花莲外源凝集素酶基因 蚜虫 抗性基因 药用植物

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将GNA基因导入宁夏枸杞及其表达的研究 被引量：2

18

作者 曲玲 曹有龙 +3 位作者 侯玉霞 吴家和 罗青 田颖川 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2007年第3期88-91,共4页

为了解决枸杞蚜虫侵害的难题,以宁夏枸杞主栽品种“宁杞1号”叶片为外植体,通过农杆菌介导的转化方法,将改造后的雪花莲凝集素GNA基因转入枸杞,以抗性愈伤组织诱导率作为转化效率的指标,对影响转化效率的因素进行了研究,初步建立了转化... 为了解决枸杞蚜虫侵害的难题,以宁夏枸杞主栽品种“宁杞1号”叶片为外植体,通过农杆菌介导的转化方法,将改造后的雪花莲凝集素GNA基因转入枸杞,以抗性愈伤组织诱导率作为转化效率的指标,对影响转化效率的因素进行了研究,初步建立了转化频率较高的转化系统。对获得的70个转基因株系进行PCR检测,阳性率为60%。运用Western blot杂交检测了2个转化子叶片和果实中GNA的表达,结果表明,其中一个转化株系在维管组织成分较高的叶片、青果中得到了GNA的表达,而在维管束成分极少的红果中未检测到GNA蛋白的表达。 展开更多

关键词 宁夏枸杞 雪花莲凝集素 CoYMV启动子 农杆菌介导遗传转化 Westernblot杂交

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GNA基因表达载体的构建及遗传转化甘蔗 被引量：4

19

作者 刘晓娜 冯翠莲 张树珍 《热带作物学报》 CSCD 2010年第6期887-893,共7页

利用经人工改造的gna基因分别与Ubi、Rbcs启动子组合,构建抗虫植物表达载体pUNG和pRNG,通过农杆菌介导法导入甘蔗愈伤组织,经PPT筛选和PCR检测,获得Ubi-gna转基因植株124株,Rbcs-gna转基因植株35株。对部分转基因植株进行RT-PCR检测,初... 利用经人工改造的gna基因分别与Ubi、Rbcs启动子组合,构建抗虫植物表达载体pUNG和pRNG,通过农杆菌介导法导入甘蔗愈伤组织,经PPT筛选和PCR检测,获得Ubi-gna转基因植株124株,Rbcs-gna转基因植株35株。对部分转基因植株进行RT-PCR检测,初步证明外源基因已经整合到甘蔗基因组中,并得到有效表达;对RT-PCR阳性植株进行GNA(植物外源凝集素)活性测验,结果表明,甘蔗叶片表达的凝集素可以使健康公鸡的红细胞凝集,初步证明表达的GNA具有正常的生物学活性。 展开更多

关键词 雪花莲凝集素 GNA基因 PCR

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将GNA基因导入宁夏枸杞(Lycium bararum L．)及其表达的研究 被引量：4

20

作者 曲玲 曹有龙 +3 位作者 侯玉霞 吴家和 罗青 田颖川 《陕西农业科学》 2007年第2期62-65,111,共5页

以宁夏枸杞主栽品种“宁杞1号”叶片为外植体,通过农杆菌介导的转化方法,将1个改造后的雪花莲凝集素(GNA)基因转入枸杞,以抗性愈伤组织诱导率作为转化效率的粗略指标,对影响转化效率的因素进行了研究,初步建立了转化频率较高的转化系统... 以宁夏枸杞主栽品种“宁杞1号”叶片为外植体,通过农杆菌介导的转化方法,将1个改造后的雪花莲凝集素(GNA)基因转入枸杞,以抗性愈伤组织诱导率作为转化效率的粗略指标,对影响转化效率的因素进行了研究,初步建立了转化频率较高的转化系统。对获得的70个转基因株系进行PCR检测,阳性率为60％。运用Western blot杂交检测了两个转化子叶片和果实中GNA的表达,结果表明其中一个转化株系在维管组织成分较高的叶片、青果得到了GNA的表达,而在维管束成分极少的红果未检测到GNA蛋白的表达。 展开更多

关键词 宁夏枸杞 雪花莲凝集素 CoYMV启动子 农杆菌转416 WESTERN blot杂交

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