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干扰CDH1基因对雨蛙素诱导的急性胰腺炎细胞模型凋亡和自噬的影响 被引量：1
1
作者 史洋洋 吴雪生 《肝胆外科杂志》 2021年第5期385-389,共5页
目的探讨干扰上皮钙粘素(CDH1)基因对雨蛙素(Caerulein)诱导的大鼠急性胰腺腺泡细胞AR42J凋亡和自噬的影响及可能的机制.方法体外培养大鼠急性胰腺腺泡细胞AR42J,将CDH1特异性siRNA转染至AR42J细胞,成功干扰CDH1表达后以雨蛙素干预构建... 目的探讨干扰上皮钙粘素(CDH1)基因对雨蛙素(Caerulein)诱导的大鼠急性胰腺腺泡细胞AR42J凋亡和自噬的影响及可能的机制.方法体外培养大鼠急性胰腺腺泡细胞AR42J,将CDH1特异性siRNA转染至AR42J细胞,成功干扰CDH1表达后以雨蛙素干预构建急性胰腺炎细胞模型,实验分为空白对照(Mock)组、雨蛙素(Cae)组、雨蛙素+转染对照(Cae+si-NC)组和雨蛙素+转染(Cae+si-CDH1)组,实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测CDH1的表达变化,噻唑蓝(MTT)分析细胞增殖能力,酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎性介质肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot分析凋亡相关蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),自噬标记物Beclin-1、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ以及β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin和其下游靶分子c-Myc和cyc-lin D1的表达.结果与Mock组相比,Cae组细胞增殖能力降低,细胞凋亡率升高,细胞中CDH1、Bax、Beclin-1、LC3-Ⅱ、TNF-α和IL-1β、β-catenin、c-Myc和cyclin D1的表达上调,LC3-Ⅰ和Bcl-2的表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);与Cae组相比,Cae+si-CDH1组干扰CDH1能够逆转以上各指标,差异有统计学意义(P<0.05).结论干扰CDH1基因可减轻雨蛙素诱导的AR42J细胞凋亡和自噬,其作用机制可能与阻断β-catenin信号通路的激活有关. 展开更多
关键词 CDH1基因 雨蛙素 急性胰腺炎 凋亡 自噬
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青蒿素对急性胰腺炎腺泡细胞炎症、迁移、侵袭和上皮间质转化的作用机制研究
2
作者 寨旭 裴红红 +1 位作者 刘俊 丁新爱 《长春中医药大学学报》 2023年第11期1216-1220,共5页
目的探究青蒿素对雨蛙素诱导的鼠胰腺腺泡(AR42J)细胞炎症反应、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响及对蛋白酪氨酸激酶2/信号转导与激活因子3(JAK2/STAT3)通路的调控作用。方法体外培养AR42J细胞,将细胞分为对照组(不做干预)、雨蛙素... 目的探究青蒿素对雨蛙素诱导的鼠胰腺腺泡(AR42J)细胞炎症反应、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响及对蛋白酪氨酸激酶2/信号转导与激活因子3(JAK2/STAT3)通路的调控作用。方法体外培养AR42J细胞,将细胞分为对照组(不做干预)、雨蛙素组(100.0 nmol·L^(-1)雨蛙素)和实验组(100.0 nmol·L^(-1)雨蛙素+12.5μmol·L^(-1)、25.0μmol·L^(-1)、50.0μmol·L^(-1)、100.0μmol·L^(-1)青蒿素),干预24 h和48 h后采用细胞计数试剂盒(CCK)-8检测细胞活力以筛选青蒿素最适作用浓度和最佳作用时间;随后将细胞分为对照组、雨蛙素组、青蒿素组(100.0 nmol·L^(-1)雨蛙素+50.0μmol·L^(-1)青蒿素)、AG490组(100.0 nmol·L^(-1)雨蛙素+50.0μmol·L^(-1)JAK2/STAT3通路抑制剂AG490)、抑制剂组(100.0 nmol·L^(-1)雨蛙素+50.0μmol·L^(-1)青蒿素+50.0μmol·L^(-1)AG490)和激动剂组(100.0μmol·L^(-1)雨蛙素+50.0μmol·L^(-1)青蒿素+50.0μmol·L^(-1)JAK2/STAT3通路激动剂colivelin),干预24 h。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒检测白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF-α)的分泌水平;Transwell小室法检测细胞的迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹(WB)法检测细胞中EMT及JAK2/STAT3通路相关蛋白表达水平。结果干预24 h和48 h后,青蒿素提升了雨蛙素诱导的AR42J细胞的细胞活力,其中50.0μmol·L^(-1)青蒿素干预24 h的作用效果最好,可用于后续实验;与对照组相比,雨蛙素组IL-1β、TNF-α水平、细胞迁移与侵袭能力、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤连蛋白(FN)、磷酸化(p)-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),而E-钙粘蛋白(E-cadherin)的蛋白表达量显著降低(P<0.05);与雨蛙素组相比,青蒿素组和AG490组细胞中炎症因子IL-1β和TNF-α分泌水平、细胞迁移与侵袭能力、N-cadherin、Vimentin、FN、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而E-cadherin的蛋白表达量显著升高(P<0.05);与青蒿素组相比,抑制剂组中AG490增强了青蒿素对雨蛙素诱导的AR42J细胞的影响(P<0.05),而激动剂组中colivelin逆转了青蒿素对雨蛙素诱导的AR42J细胞的作用(P<0.05)。结论青蒿素减轻雨蛙素诱导的AR42J细胞炎症损伤,抑制雨蛙素诱导的AR42J细胞的迁移和侵袭能力减缓其EMT进程,其作用机制与抑制JAK2/STAT3信号通路激活有关。 展开更多
关键词 急性胰腺炎 鼠胰腺炎腺泡 雨蛙素 青蒿素 蛋白酪氨酸激酶2/信号转导与激活因子3信号通路 迁移 侵袭 上皮间质转化
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基于网络药理学和动物实验探讨健脾舒胰汤改善慢性胰腺炎胰腺纤维化作用机制
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作者 甘可欣 石杰文 +4 位作者 刘伟 陈萌 宛新建 胡永红 李甫 《中国中医药信息杂志》 2025年第5期47-54,共8页
目的基于网络药理学和动物实验验证探讨健脾舒胰汤改善慢性胰腺炎(CP)胰腺纤维化的效应机制。方法通过TCMSP数据库筛选健脾舒胰汤组方药物活性成分和靶点,利用GeneCards数据库获取胰腺纤维化疾病靶点,药物与疾病靶点取交集后构建蛋白相... 目的基于网络药理学和动物实验验证探讨健脾舒胰汤改善慢性胰腺炎(CP)胰腺纤维化的效应机制。方法通过TCMSP数据库筛选健脾舒胰汤组方药物活性成分和靶点,利用GeneCards数据库获取胰腺纤维化疾病靶点,药物与疾病靶点取交集后构建蛋白相互作用网络和药物-成分-靶点网络,获取核心靶基因,对交集靶点进行GO和KEGG通路富集分析。采用雨蛙素诱导CP小鼠模型并予健脾舒胰汤灌胃,HE染色和天狼星红染色分别观察胰腺组织炎症和胶原沉积情况,RT-qPCR检测胰腺组织Acta2、COL1A1、PI3K、Akt1 mRNA表达,免疫组化染色检测胰腺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-1)、p-磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、p-蛋白激酶B(Akt)蛋白表达。结果筛选出健脾舒胰汤活性成分181个,对应靶点284个,药物与疾病交集靶点240个,核心靶基因为PTGS2、HSP90AA1等。KEGG通路富集分析得到193条信号通路,主要涉及脂质与动脉粥样硬化、化学致癌-受体激活通路、PI3K-Akt信号通路等。动物实验结果表明,与正常组比较,模型组小鼠胰腺组织大量炎症细胞浸润和胶原沉积,胰腺组织Acta2、COL1A1、PI3K、Akt1 mRNA表达明显升高(P<0.01),α-SMA、COL-1、p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显升高(P<0.01);健脾舒胰汤可显著降低模型小鼠胰腺组织炎症、胶原沉积,下调胰腺组织Acta2、COL1A1、PI3K、Akt1 mRNA表达(P<0.05),降低α-SMA、COL-1、p-PI3K、p-Akt蛋白表达(P<0.05)。结论健脾舒胰汤可能通过调控PI3K/Akt信号通路,减轻胰腺组织炎症、胶原沉积,降低α-SMA、COL-1水平,发挥对CP胰腺纤维化的治疗作用。 展开更多
关键词 健脾舒胰汤 网络药理学 雨蛙素 胰腺纤维化 PI3K/Akt信号通路
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