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DNAJB11促进卵巢颗粒细胞中FOXL2诱导的雌激素合成
被引量:
1
1
作者
毛岩
闫蔷
+3 位作者
张春雪
甄鑫
曹瑞兵
颜桂军
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2017年第10期1013-1021,共9页
目的转录因子FOXL2是颗粒细胞雌激素合成与颗粒细胞功能维持的关键调控分子,但目前尚不清楚FOXL2蛋白的表达及功能调控机制。文章旨在鉴定调控FOXL2蛋白功能的新分子。方法通过分离小鼠卵巢组织进行免疫组化染色检测DNAJB11的表达定位情...
目的转录因子FOXL2是颗粒细胞雌激素合成与颗粒细胞功能维持的关键调控分子,但目前尚不清楚FOXL2蛋白的表达及功能调控机制。文章旨在鉴定调控FOXL2蛋白功能的新分子。方法通过分离小鼠卵巢组织进行免疫组化染色检测DNAJB11的表达定位情况,含有全长DNAJB11基因c DNA序列(Ad-DNAJB11-Flag和Ad-Flag-DNAJB11)的腺病毒载体按Ad Max系统(Microbix)方法进行病毒颗粒的包装。按NE-PERTMNuclear and Cytoplasmic抽提试剂盒所述方法进行细胞核质蛋白的分离。KGN细胞感染不同浓度腺病毒(Ad-DNAJB11和Ad-Lac Z),测量波长450 nm的吸光度值,进行细胞增殖检测。采用Access Immunoassay System 2化学发光自动检测系统(Beckman Coulter)检测细胞培养上清中雌二醇的浓度。采用PCR方法扩增含有人FOXL2和人DNAJB 11基因的全长c DNA序列,并分别亚克隆至p CS2-6XMT载体(Myc-FOXL2)和p FLAG-CMV2载体(Flag-DNAJB11)中。采用Lipofectamine 2000转染试剂将Myc-FOXL2和Flag-DNAJB11表达质粒瞬时转染至细胞HEK-293细胞中。收集HEK-293细胞或FSH处理的KGN细胞的裂解液,进行FOXL2和DNAJB11的免疫共沉淀实验。通过细胞免疫荧光染色和荧光素酶报告基因等实验检测内质网Hsp40/Dna J家族成员DNAJB11调控颗粒细胞的雌激素水平。结果 Western blot表明DNAJB11蛋白在人卵癌颗粒细胞KGN、小鼠原代卵巢颗粒细胞m GC以及小鼠卵巢中高表达,免疫组化染色结果亦证实DNAJB11蛋白表达于小鼠卵巢的卵母细胞质中,并在窦前卵泡、排卵前卵泡的颗粒细胞中持续表达。免疫荧光染色和Western blot分析亦表明外源性激素FSH可以诱导KGN细胞中内源性DNAJB11蛋白从内质网转移到细胞核中。腺病毒介导的DNAJB11-Flag过表达定位于细胞内质网中,但当Flag标签阻断DNAJB11信号肽功能时,外源FlagDNAJB11过表达则定位于颗粒细胞的细胞核,内质网中DNAJB11-Flag蛋白高表达以浓度依赖的方式减少KGN细胞中雌二醇的合成,与Ad-Lac Z(MOI=50)比较,Ad-DNAJB11-Flag(MOI=50)减少,KGN细胞中雌二醇的合成[(10 749.0±801.7)pg/m L vs(7 903.0±409.5)pg/m L,P<0.01],而细胞核中高表达Flag-DNAJB11后则刺激KGN细胞中雌二醇的生成,与Ad-Lac Z(MOI=50)比较,Ad-DNAJB11-Flag(MOI=50)刺激雌二醇的生成[(10 749.0±801.7)pg/m L vs(14 217.0±1218.0)pg/m L,P<0.01]。免疫共沉淀实验表明当Myc-tagged FOXL2与Flag-tagged DNAJB11分别共转染HEK293细胞,FOXL2与DNAJB11可以相互免疫共沉淀对方,荧光素酶报告基因实验进一步表明细胞核中表达的DNAJB11显著增强FOXL2介导的Cyp19A1启动子活性和Cyp19A1蛋白表达。结论 DNAJB11是转录因子FOXL2新的结合分子并调控FOXL2蛋白的稳定性与转录活性。
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关键词
DNAJB11
转录因子FOXL2
卵巢颗粒细胞
雌激素合成
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职称材料
草甘膦对青鳉鱼卵黄蛋白原的诱导及其潜在分子机理
被引量:
5
2
作者
夏爽
赵砚彬
+1 位作者
杨鸣琦
胡建英
《中国环境科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2013年第9期1656-1663,共8页
为了研究草甘膦潜在的雌激素效应,将1~3d的雌雄青鳉幼鱼暴露于不同浓度(0.2,2,20,200,2000μg/L)的草甘膦5周,发现雌雄鱼肝脏卵黄蛋白原(VTG I)基因表达分别在0.2,2,20μg/L浓度(雌鱼)和2,20,200μg/L浓度(雄鱼)下受到显著诱导,但在高...
为了研究草甘膦潜在的雌激素效应,将1~3d的雌雄青鳉幼鱼暴露于不同浓度(0.2,2,20,200,2000μg/L)的草甘膦5周,发现雌雄鱼肝脏卵黄蛋白原(VTG I)基因表达分别在0.2,2,20μg/L浓度(雌鱼)和2,20,200μg/L浓度(雄鱼)下受到显著诱导,但在高浓度下(雌鱼,200μg/L和2000μg/L;雄鱼,2000μg/L)恢复到正常水平.草甘膦诱导雌激素效应的机理存在雌雄差异:雌鱼中雌激素效应主要由于草甘膦诱导了脑部FSH和性腺CYP19A基因,从而增加了雌激素合成能力.雄鱼中主要由于草甘膦抑制肝脏中雌激素代谢酶(CYP1A、CYP1B和CYP3A)而显示雌激素效应.
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关键词
草甘膦
雌激素
效应
卵黄蛋白原
雌激素合成
和代谢
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职称材料
泌乳素作用的新发现
被引量:
11
3
作者
刘孟元
周肃
《生理科学进展》
CAS
CSCD
北大核心
1990年第1期36-40,共5页
近年来发现,泌乳素的作用十分广泛,它对细胞的生长调节、机体的内分泌代谢、免疫机能以及行为等都有重要的作用。泌乳素与肿瘤的关系亦已引起学者的高度重视。
关键词
大鼠
内分泌代谢
亦已
合成
雌激素
垂体瘤患者
细胞生长
肝细胞
肾上腺髓质
DHEA
高胰岛素血症
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职称材料
生防群英赞
4
作者
余国振
《河北农业》
1996年第6期19-20,共2页
生防群英赞邮编:056700白僵菌《本草》记载早,杀虫显奇能,菌丝儿直往虫内攻。懒洋洋、吐又泄、僵而硬,柳絮般白毛长一层。土法可培养,病虫放也行。自发感染省人工,温暖潮湿效更中。切记分敌我,远离蚕与蜂。多角体病毒核型...
生防群英赞邮编:056700白僵菌《本草》记载早,杀虫显奇能,菌丝儿直往虫内攻。懒洋洋、吐又泄、僵而硬,柳絮般白毛长一层。土法可培养,病虫放也行。自发感染省人工,温暖潮湿效更中。切记分敌我,远离蚕与蜂。多角体病毒核型质型,包含体常为多角形,病毒粒子能...
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关键词
苏云金杆菌
多角体病毒
性外
激素
白僵菌
合成
雌激素
树木害虫
倒悬挂
林区环境
邯郸市
包含体
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职称材料
肉牛快速生长良法
5
《中国农村科技》
1994年第1期43-43,共1页
在肉牛的饲养过程中,除了喂给优质的饲草和营养价格高的精饲料外,还可采用雌激素促其快长,即对阉牛用合成雌激素——乙烯雌酚进行处理。使用方法;每日喂给乙烯雌酚10毫克,或屠宰前100天左右在其耳部埋藏50~70毫克。这样处理的肉牛。
关键词
阉牛
乙烯雌酚
合成
雌激素
脑垂体前叶
活重
促性腺
激素
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职称材料
肉牛快速育肥法
6
《山东农机化》
1994年第11期29-29,共1页
在肉牛饲养过程中,除了喂优质的饲草和营养价值高的精饲料外,可采用肉牛快速育肥法:即对阉牛用合成雌激素(乙烯雌酚)进行处理。使用方法是,每日喂乙烯雌酚10毫克,或屠宰前100天左右。
关键词
肉牛快速育肥
肉牛饲养
阉牛
乙烯雌酚
营养价值
合成
雌激素
腺
激素
领外
骨格
垂体前叶
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职称材料
题名
DNAJB11促进卵巢颗粒细胞中FOXL2诱导的雌激素合成
被引量:
1
1
作者
毛岩
闫蔷
张春雪
甄鑫
曹瑞兵
颜桂军
机构
南京农业大学动物医学院
南京大学附属鼓楼医院生殖中心
出处
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2017年第10期1013-1021,共9页
基金
国家自然科学基金(81370683,81571402)
江苏省“十三五科教强卫工程”医学重点人才项目(ZDRCA2016070)
文摘
目的转录因子FOXL2是颗粒细胞雌激素合成与颗粒细胞功能维持的关键调控分子,但目前尚不清楚FOXL2蛋白的表达及功能调控机制。文章旨在鉴定调控FOXL2蛋白功能的新分子。方法通过分离小鼠卵巢组织进行免疫组化染色检测DNAJB11的表达定位情况,含有全长DNAJB11基因c DNA序列(Ad-DNAJB11-Flag和Ad-Flag-DNAJB11)的腺病毒载体按Ad Max系统(Microbix)方法进行病毒颗粒的包装。按NE-PERTMNuclear and Cytoplasmic抽提试剂盒所述方法进行细胞核质蛋白的分离。KGN细胞感染不同浓度腺病毒(Ad-DNAJB11和Ad-Lac Z),测量波长450 nm的吸光度值,进行细胞增殖检测。采用Access Immunoassay System 2化学发光自动检测系统(Beckman Coulter)检测细胞培养上清中雌二醇的浓度。采用PCR方法扩增含有人FOXL2和人DNAJB 11基因的全长c DNA序列,并分别亚克隆至p CS2-6XMT载体(Myc-FOXL2)和p FLAG-CMV2载体(Flag-DNAJB11)中。采用Lipofectamine 2000转染试剂将Myc-FOXL2和Flag-DNAJB11表达质粒瞬时转染至细胞HEK-293细胞中。收集HEK-293细胞或FSH处理的KGN细胞的裂解液,进行FOXL2和DNAJB11的免疫共沉淀实验。通过细胞免疫荧光染色和荧光素酶报告基因等实验检测内质网Hsp40/Dna J家族成员DNAJB11调控颗粒细胞的雌激素水平。结果 Western blot表明DNAJB11蛋白在人卵癌颗粒细胞KGN、小鼠原代卵巢颗粒细胞m GC以及小鼠卵巢中高表达,免疫组化染色结果亦证实DNAJB11蛋白表达于小鼠卵巢的卵母细胞质中,并在窦前卵泡、排卵前卵泡的颗粒细胞中持续表达。免疫荧光染色和Western blot分析亦表明外源性激素FSH可以诱导KGN细胞中内源性DNAJB11蛋白从内质网转移到细胞核中。腺病毒介导的DNAJB11-Flag过表达定位于细胞内质网中,但当Flag标签阻断DNAJB11信号肽功能时,外源FlagDNAJB11过表达则定位于颗粒细胞的细胞核,内质网中DNAJB11-Flag蛋白高表达以浓度依赖的方式减少KGN细胞中雌二醇的合成,与Ad-Lac Z(MOI=50)比较,Ad-DNAJB11-Flag(MOI=50)减少,KGN细胞中雌二醇的合成[(10 749.0±801.7)pg/m L vs(7 903.0±409.5)pg/m L,P<0.01],而细胞核中高表达Flag-DNAJB11后则刺激KGN细胞中雌二醇的生成,与Ad-Lac Z(MOI=50)比较,Ad-DNAJB11-Flag(MOI=50)刺激雌二醇的生成[(10 749.0±801.7)pg/m L vs(14 217.0±1218.0)pg/m L,P<0.01]。免疫共沉淀实验表明当Myc-tagged FOXL2与Flag-tagged DNAJB11分别共转染HEK293细胞,FOXL2与DNAJB11可以相互免疫共沉淀对方,荧光素酶报告基因实验进一步表明细胞核中表达的DNAJB11显著增强FOXL2介导的Cyp19A1启动子活性和Cyp19A1蛋白表达。结论 DNAJB11是转录因子FOXL2新的结合分子并调控FOXL2蛋白的稳定性与转录活性。
关键词
DNAJB11
转录因子FOXL2
卵巢颗粒细胞
雌激素合成
Keywords
Granulosa cells
Estrogen synthesis
分类号
R714.15 [医药卫生—妇产科学]
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职称材料
题名
草甘膦对青鳉鱼卵黄蛋白原的诱导及其潜在分子机理
被引量:
5
2
作者
夏爽
赵砚彬
杨鸣琦
胡建英
机构
西北农林科技大学动物医学院
北京大学城市与环境学院
出处
《中国环境科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2013年第9期1656-1663,共8页
基金
国家自然科学基金资助项目(41171385
20977002)
文摘
为了研究草甘膦潜在的雌激素效应,将1~3d的雌雄青鳉幼鱼暴露于不同浓度(0.2,2,20,200,2000μg/L)的草甘膦5周,发现雌雄鱼肝脏卵黄蛋白原(VTG I)基因表达分别在0.2,2,20μg/L浓度(雌鱼)和2,20,200μg/L浓度(雄鱼)下受到显著诱导,但在高浓度下(雌鱼,200μg/L和2000μg/L;雄鱼,2000μg/L)恢复到正常水平.草甘膦诱导雌激素效应的机理存在雌雄差异:雌鱼中雌激素效应主要由于草甘膦诱导了脑部FSH和性腺CYP19A基因,从而增加了雌激素合成能力.雄鱼中主要由于草甘膦抑制肝脏中雌激素代谢酶(CYP1A、CYP1B和CYP3A)而显示雌激素效应.
关键词
草甘膦
雌激素
效应
卵黄蛋白原
雌激素合成
和代谢
Keywords
glyphosate
estrogenic activities
vitellogenin
biosynthesis and metabolism of 17β-E2
分类号
X503.2 [环境科学与工程—环境工程]
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职称材料
题名
泌乳素作用的新发现
被引量:
11
3
作者
刘孟元
周肃
机构
天津医学院病理生理学教研室促激素研究室
出处
《生理科学进展》
CAS
CSCD
北大核心
1990年第1期36-40,共5页
文摘
近年来发现,泌乳素的作用十分广泛,它对细胞的生长调节、机体的内分泌代谢、免疫机能以及行为等都有重要的作用。泌乳素与肿瘤的关系亦已引起学者的高度重视。
关键词
大鼠
内分泌代谢
亦已
合成
雌激素
垂体瘤患者
细胞生长
肝细胞
肾上腺髓质
DHEA
高胰岛素血症
分类号
Q4 [生物学—生理学]
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职称材料
题名
生防群英赞
4
作者
余国振
机构
邯郸市农校
出处
《河北农业》
1996年第6期19-20,共2页
文摘
生防群英赞邮编:056700白僵菌《本草》记载早,杀虫显奇能,菌丝儿直往虫内攻。懒洋洋、吐又泄、僵而硬,柳絮般白毛长一层。土法可培养,病虫放也行。自发感染省人工,温暖潮湿效更中。切记分敌我,远离蚕与蜂。多角体病毒核型质型,包含体常为多角形,病毒粒子能...
关键词
苏云金杆菌
多角体病毒
性外
激素
白僵菌
合成
雌激素
树木害虫
倒悬挂
林区环境
邯郸市
包含体
分类号
S47 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
肉牛快速生长良法
5
出处
《中国农村科技》
1994年第1期43-43,共1页
文摘
在肉牛的饲养过程中,除了喂给优质的饲草和营养价格高的精饲料外,还可采用雌激素促其快长,即对阉牛用合成雌激素——乙烯雌酚进行处理。使用方法;每日喂给乙烯雌酚10毫克,或屠宰前100天左右在其耳部埋藏50~70毫克。这样处理的肉牛。
关键词
阉牛
乙烯雌酚
合成
雌激素
脑垂体前叶
活重
促性腺
激素
分类号
S823 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
肉牛快速育肥法
6
出处
《山东农机化》
1994年第11期29-29,共1页
文摘
在肉牛饲养过程中,除了喂优质的饲草和营养价值高的精饲料外,可采用肉牛快速育肥法:即对阉牛用合成雌激素(乙烯雌酚)进行处理。使用方法是,每日喂乙烯雌酚10毫克,或屠宰前100天左右。
关键词
肉牛快速育肥
肉牛饲养
阉牛
乙烯雌酚
营养价值
合成
雌激素
腺
激素
领外
骨格
垂体前叶
分类号
S823.6 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
DNAJB11促进卵巢颗粒细胞中FOXL2诱导的雌激素合成
毛岩
闫蔷
张春雪
甄鑫
曹瑞兵
颜桂军
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2017
1
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职称材料
2
草甘膦对青鳉鱼卵黄蛋白原的诱导及其潜在分子机理
夏爽
赵砚彬
杨鸣琦
胡建英
《中国环境科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2013
5
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职称材料
3
泌乳素作用的新发现
刘孟元
周肃
《生理科学进展》
CAS
CSCD
北大核心
1990
11
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职称材料
4
生防群英赞
余国振
《河北农业》
1996
0
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职称材料
5
肉牛快速生长良法
《中国农村科技》
1994
0
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职称材料
6
肉牛快速育肥法
《山东农机化》
1994
0
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职称材料
已选择
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