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集胞蓝细菌PCC 6803中CcmK2蛋白多克隆抗体的制备与检测
1
作者
李盼
支瑶
+1 位作者
汪方奎
陈雯莉
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期12-16,共5页
CcmK2蛋白是集胞蓝细菌PCC 6803羧酶体外壳蛋白的主要组分,在羧酶体的组装与功能行使方面扮演重要角色。为解析其功能,本研究构建了原核表达载体pET28a-CcmK2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达带有6个组氨酸标签的CcmK2重组蛋白。通过...
CcmK2蛋白是集胞蓝细菌PCC 6803羧酶体外壳蛋白的主要组分,在羧酶体的组装与功能行使方面扮演重要角色。为解析其功能,本研究构建了原核表达载体pET28a-CcmK2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达带有6个组氨酸标签的CcmK2重组蛋白。通过金属亲和层析技术,将CcmK2重组蛋白纯化后免疫家兔,制备抗CcmK2多克隆抗体。基于Dot blot分析的结果显示:该多克隆抗体能够有效检测蓝细菌CcmK2蛋白;进一步的抗体特异性分析显示,CcmK2多克隆抗体与其他羧酶体外壳蛋白存在微弱的抗原抗体反应;最后,通过Western blot分析证实该多克隆抗体能够特异而灵敏地检测集胞蓝细菌PCC 6803中CcmK2的丰度。
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关键词
集胞蓝细菌pcc
6803
羧酶体
WESTERN
BLOT
二氧化碳浓缩机制
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职称材料
氯霉素对集胞蓝细菌PCC 6803细胞中羧酶体数目及其相关蛋白丰度的影响
2
作者
李松柏
支瑶
+2 位作者
李盼
汪方奎
陈雯莉
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期7-11,共5页
羧酶体是由致密的外壳蛋白包裹着核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/氧化酶和碳酸苷酶形成的细胞内蛋白质小体,是蓝细菌二氧化碳固定的场所。为解析羧酶体在不同培养条件下的功能,本研究构建了原核表达载体pET28a-CcmK2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中...
羧酶体是由致密的外壳蛋白包裹着核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/氧化酶和碳酸苷酶形成的细胞内蛋白质小体,是蓝细菌二氧化碳固定的场所。为解析羧酶体在不同培养条件下的功能,本研究构建了原核表达载体pET28a-CcmK2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达带有组氨酸标签的CcmK2重组蛋白,制备了其多克隆抗体,探讨了不同质量浓度氯霉素对细胞内羧酶体数目和羧酶体相关蛋白丰度的影响。首先,确定了不同质量浓度的氯霉素对集胞蓝细菌PCC 6803生长的影响,发现5.0μg/mL氯霉素能够完全抑制菌株的生长,但是可以维持菌株存活。随后,探讨了集胞蓝细菌在葡萄糖异养和光合自养转换过程中,氯霉素对细胞内羧酶体数目及羧酶体相关蛋白的影响。结果显示:氯霉素的加入抑制了细胞内羧酶体数目对环境碳源的响应;同时,Western blot检测发现5.0μg/mL氯霉素能够抑制细胞内新的羧酶体外壳蛋白CcmK2的合成。这些结果表明,氯霉素可能通过抑制羧酶体外壳蛋白的合成来干扰细胞内羧酶体的形成,细胞内羧酶体对环境碳源的响应存在复杂的调控机制。
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集胞蓝细菌pcc
6803
羧酶体
氯霉素
二氧化碳浓缩机制
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职称材料
题名
集胞蓝细菌PCC 6803中CcmK2蛋白多克隆抗体的制备与检测
1
作者
李盼
支瑶
汪方奎
陈雯莉
机构
华中农业大学农业微生物学国家重点实验室
出处
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期12-16,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31570048)
中央高校基本科研业务费专项(2014PY003)
文摘
CcmK2蛋白是集胞蓝细菌PCC 6803羧酶体外壳蛋白的主要组分,在羧酶体的组装与功能行使方面扮演重要角色。为解析其功能,本研究构建了原核表达载体pET28a-CcmK2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达带有6个组氨酸标签的CcmK2重组蛋白。通过金属亲和层析技术,将CcmK2重组蛋白纯化后免疫家兔,制备抗CcmK2多克隆抗体。基于Dot blot分析的结果显示:该多克隆抗体能够有效检测蓝细菌CcmK2蛋白;进一步的抗体特异性分析显示,CcmK2多克隆抗体与其他羧酶体外壳蛋白存在微弱的抗原抗体反应;最后,通过Western blot分析证实该多克隆抗体能够特异而灵敏地检测集胞蓝细菌PCC 6803中CcmK2的丰度。
关键词
集胞蓝细菌pcc
6803
羧酶体
WESTERN
BLOT
二氧化碳浓缩机制
Keywords
Synechocystis sp.
pcc
6803
carboxysome
Western blot
CO2 concentrating mecha-nism
分类号
Q93-33 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
氯霉素对集胞蓝细菌PCC 6803细胞中羧酶体数目及其相关蛋白丰度的影响
2
作者
李松柏
支瑶
李盼
汪方奎
陈雯莉
机构
华中农业大学农业微生物学国家重点实验室
出处
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期7-11,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31570048)
中央高校基本科研业务费专项(2014PY003)
文摘
羧酶体是由致密的外壳蛋白包裹着核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/氧化酶和碳酸苷酶形成的细胞内蛋白质小体,是蓝细菌二氧化碳固定的场所。为解析羧酶体在不同培养条件下的功能,本研究构建了原核表达载体pET28a-CcmK2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达带有组氨酸标签的CcmK2重组蛋白,制备了其多克隆抗体,探讨了不同质量浓度氯霉素对细胞内羧酶体数目和羧酶体相关蛋白丰度的影响。首先,确定了不同质量浓度的氯霉素对集胞蓝细菌PCC 6803生长的影响,发现5.0μg/mL氯霉素能够完全抑制菌株的生长,但是可以维持菌株存活。随后,探讨了集胞蓝细菌在葡萄糖异养和光合自养转换过程中,氯霉素对细胞内羧酶体数目及羧酶体相关蛋白的影响。结果显示:氯霉素的加入抑制了细胞内羧酶体数目对环境碳源的响应;同时,Western blot检测发现5.0μg/mL氯霉素能够抑制细胞内新的羧酶体外壳蛋白CcmK2的合成。这些结果表明,氯霉素可能通过抑制羧酶体外壳蛋白的合成来干扰细胞内羧酶体的形成,细胞内羧酶体对环境碳源的响应存在复杂的调控机制。
关键词
集胞蓝细菌pcc
6803
羧酶体
氯霉素
二氧化碳浓缩机制
Keywords
Synechocystis sp,
pcc
6803
carboxysome
chloramphenicol
CO2 concentrating mecha-nism
分类号
Q93-33 [生物学—微生物学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
集胞蓝细菌PCC 6803中CcmK2蛋白多克隆抗体的制备与检测
李盼
支瑶
汪方奎
陈雯莉
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
0
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职称材料
2
氯霉素对集胞蓝细菌PCC 6803细胞中羧酶体数目及其相关蛋白丰度的影响
李松柏
支瑶
李盼
汪方奎
陈雯莉
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
0
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