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新生牛雄性生殖干细胞的分离纯化与培养 被引量:4
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作者 郑鹏 于磊 +2 位作者 田亚光 黄贺 张贵学 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期32-38,F0002,共8页
为建立新生牛雄性生殖干细胞的体外增殖与分化体系,将新生牛睾丸消化成单细胞悬液,分别进行差速贴壁、不连续密度梯度Percoll分选雄性生殖干细胞和支持细胞,对分选生殖干细胞进行体外培养。结果表明,差速贴壁法能有效分选雄性生殖干细... 为建立新生牛雄性生殖干细胞的体外增殖与分化体系,将新生牛睾丸消化成单细胞悬液,分别进行差速贴壁、不连续密度梯度Percoll分选雄性生殖干细胞和支持细胞,对分选生殖干细胞进行体外培养。结果表明,差速贴壁法能有效分选雄性生殖干细胞与支持细胞,2%血清浓度的培养液即可用于雄性生殖干细胞的体外培养,添加100 ng·mL-1的GDNF能显著促进雄性生殖干细胞的增殖,增殖形成的雄性生殖干细胞集落具有一定多能性。 展开更多
关键词 新生牛 雄性生殖干细胞 分离纯化 体外培养
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MiR-34c在奶山羊雄性生殖干细胞增殖分化中的作用 被引量:3
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作者 刘超 武思宇 华进联 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期569-577,共9页
microRNA(miRNA)在奶山羊雄性生殖细胞和精子发生过程有重要的调控功能。为研究miR-34c对雄性生殖干细胞增殖与分化中的作用,本文利用视黄酸效应基因8(Stra8)在雄性生殖细胞中随年龄增长,以其表达量上调的表达特征为指针,使用实时定量PC... microRNA(miRNA)在奶山羊雄性生殖细胞和精子发生过程有重要的调控功能。为研究miR-34c对雄性生殖干细胞增殖与分化中的作用,本文利用视黄酸效应基因8(Stra8)在雄性生殖细胞中随年龄增长,以其表达量上调的表达特征为指针,使用实时定量PCR技术筛选分析miRNAs。结果发现,miR-34c与Stra8的表达规律基本一致。在无精症奶山羊的睾丸组织中,发现miR-34c在无精症奶山羊睾丸组织中表达缺失。利用miR-34c模拟物及抑制剂转染奶山羊雄性生殖干细胞,体外转染miR-34c模拟物及其抑制剂,发现miR-34c能够下调Rarg、Stra8与c-Myc基因的表达,减缓奶山羊雄性生殖干细胞的增殖。结果提示,miR-34c可能具有调控奶山羊雄性生殖干细胞的减数分裂的作用,同时抑制其增殖。 展开更多
关键词 视黄酸效应基因8(Stra8) MIRNA miRNA前体与成熟体miR-34c 雄性生殖干细胞 奶山羊
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成年昆明小鼠雄性生殖干细胞的分离培养及其多能性研究 被引量:4
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作者 潘少辉 胡玥 +5 位作者 张姗姗 王静 李飞飞 高志敏 杨春荣 华进联 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第6期23-30,共8页
【目的】从成年昆明小鼠睾丸组织中分离具有多能性的雄性生殖干细胞(Male germline stem cells,mGSCs)。【方法】采用机械法和2步酶消化法分离出成年昆明小鼠的精原细胞,经差速贴壁后,培养在小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)饲养层上,2周后得到... 【目的】从成年昆明小鼠睾丸组织中分离具有多能性的雄性生殖干细胞(Male germline stem cells,mGSCs)。【方法】采用机械法和2步酶消化法分离出成年昆明小鼠的精原细胞,经差速贴壁后,培养在小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)饲养层上,2周后得到类胚胎干细胞(ESCs)样mGSCs。对得到的mGSCs进行碱性磷酸酶(AP)染色、免疫荧光染色、RT-PCR、体内分化等检测。【结果】mGSCs具有类似ESCs的形态和多能性,AP染色呈阳性,免疫荧光Oct4、Vasa染色呈阳性,RT-PCR检测其表达Oct4、Nanog、Sox2等多能性基因和Vasa、C-kit等生殖细胞的标记基因,在免疫缺陷鼠体内能形成畸胎瘤,组织学检测其可形成包括3个胚层在内的多种类型细胞。【结论】从成年昆明小鼠睾丸分离的精原细胞,在体外培养去分化形成了具有类ESCs生物学特性的mGSCs,mGSCs既具有多能性,也具有生殖细胞的基本生物学特性。 展开更多
关键词 成年昆明小鼠 精原细胞 雄性生殖干细胞 多能性
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PLZF与哺乳动物雄性生殖干细胞的发育分化 被引量:3
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作者 宋文聪 华进联 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期825-832,共8页
早幼粒细胞白血病锌指蛋白(promyelocytic leukemia zinc finger,PLZF),也被称为ZBTB16(zinc finger and BTB domain containing 16,ZBTB16)或锌指蛋白145(zinc finger protein 145,ZFP145),是我国学者发现与人类疾病相关的蛋白质.人类P... 早幼粒细胞白血病锌指蛋白(promyelocytic leukemia zinc finger,PLZF),也被称为ZBTB16(zinc finger and BTB domain containing 16,ZBTB16)或锌指蛋白145(zinc finger protein 145,ZFP145),是我国学者发现与人类疾病相关的蛋白质.人类PLZF的是由673个氨基酸残基组成的转录抑制因子,属于蛋白质超家族.该超家族以N端的BTB/POZ(bric-à-brac,tramtrack,brad complex(BTB)/poxvirus zinc finger(POZ)domain)结构为特征.PLZF蛋白的BTB/POZ结构与个体发育、胚胎发生、染色体的重构等事件相关.近年发现,PLZF在哺乳动物雄性生殖干细胞(male germline stem cells,mGSCs)发育分化过程中也发挥重要作用.探讨PLZF的生物学功能和作用机制,将有助于理解其在mGSCs发育过程中的重要作用.本文就PLZF在维持mGSCs自我更新和在发育分化调控中的作用给予综述. 展开更多
关键词 早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF) 雄性生殖干细胞 自我更新 发育 分化 哺乳动物
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猪雄性生殖干细胞的分离纯化
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作者 何莹 安俊辉 +1 位作者 郑以 曾文先 《家畜生态学报》 北大核心 2012年第4期1-4,共4页
为了建立猪雄性生殖干细胞的分离纯化方法,以1~2周龄长白猪睾丸组织为材料,采用差异贴壁法和曲细精管培养法对猪雄性生殖干细胞进行分离纯化。结果表明:双酶消化-差异贴壁法和曲细精管培养法均能获得高活力的猪雄性生殖干细胞,但后者... 为了建立猪雄性生殖干细胞的分离纯化方法,以1~2周龄长白猪睾丸组织为材料,采用差异贴壁法和曲细精管培养法对猪雄性生殖干细胞进行分离纯化。结果表明:双酶消化-差异贴壁法和曲细精管培养法均能获得高活力的猪雄性生殖干细胞,但后者的富集效果较好,可以达到40.7%,前者的富集效果为36.9%。差异贴壁法和曲细精管培养法具有操作简单、回收细胞纯度高等优点,可应用于猪雄性生殖干细胞的分离纯化。 展开更多
关键词 雄性生殖干细胞 纯化
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新生牛雄性生殖细胞源类ES的培养及检测
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作者 董武子 沈文正 +1 位作者 华进联 窦忠英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期144-148,共5页
采用贴壁速率差法分离纯化的新生牛雄性生殖干细胞(Male germ stem cell,mGSCs)和支持细胞(Calf sertoli cell,CSCs);CSCs饲养层细胞一般维持时间不超过8d;新生牛雄性生殖干细胞在CSCs饲养层上1代培养至5~6d可形成类ES细胞集... 采用贴壁速率差法分离纯化的新生牛雄性生殖干细胞(Male germ stem cell,mGSCs)和支持细胞(Calf sertoli cell,CSCs);CSCs饲养层细胞一般维持时间不超过8d;新生牛雄性生殖干细胞在CSCs饲养层上1代培养至5~6d可形成类ES细胞集落,采用机械离散集落传代法有利于集落形成或存在,传代培养至少在前2代细胞集落存在;部分典型细胞集落的中心细胞AKP强阳性,周边细胞AKP弱阳性或阴性;免疫组化检测显示,细胞集落SSEA1强阳性、SSEA3弱阳性和Oct-4呈现阳性染色。表明mGSCs具有ES细胞的某些细胞特性。 展开更多
关键词 新生牛雄性生殖干细胞 新生牛支持细胞 类ES细胞
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