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隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因的原核表达及抗血清的制备
被引量：
2
1
作者
于慧珠
岳城
+2 位作者
陈兆国
米荣升
夏延富
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期622-626,共5页
为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检...
为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检测目的蛋白,westernblot分析该重组蛋白的免疫活性。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录中的序列比较,同源性为90.5%,氨基酸序列同源性为87.57%。重组质粒转化菌在IPTG诱导下以包涵体形式高效表达,表达的融合蛋白大小约为46ku,westernblot分析显示,纯化复性后的重组蛋白可被辣根过氧化物酶标记的抗谷胱甘肽巯基转移酶(GST)单克隆抗体、隐孢子虫兔基因型感染兔血清特异性识别。ELISA检测结果表明,该蛋白3次免疫无特征病原体新西兰白兔后,兔血清特异性抗体达到较高水平,表明表达的重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。
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关键词
隐孢子虫鼠基因型
卵囊壁蛋白
CP41
克隆
原核表达
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职称材料
隐孢子虫P23基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
被引量：
1
2
作者
张国恩
米荣升
+6 位作者
苏庆美
黄燕
周鹏
胡义彬
秦培兰
呼高伟
陈兆国
《中国动物传染病学报》
CAS
2011年第2期43-50,共8页
将隐孢子虫鼠基因型(Cryptosporidium mouse genotype)P23基因亚克隆到pGEX-4T-1载体中,并用大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌诱导表达。以纯化的rP23为诊断抗原,建立隐孢子虫间接ELISA检测方法,观察其敏感性、特异性和重复性,并对临床血清样...
将隐孢子虫鼠基因型(Cryptosporidium mouse genotype)P23基因亚克隆到pGEX-4T-1载体中,并用大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌诱导表达。以纯化的rP23为诊断抗原,建立隐孢子虫间接ELISA检测方法,观察其敏感性、特异性和重复性,并对临床血清样品进行检测。结果隐孢子虫鼠基因型P23基因在大肠杆菌中获得了高效表达,Western blot检测显示rP23能被隐孢子虫感染兔血清识别。以纯化rP23为诊断抗原,成功地建立了检测兔隐孢子虫病的间接ELISA技术。对23份临床血清检测结果显示,该方法检出率高于Sheather's蔗糖漂浮法、套式PCR法。本研究结果为研制兔隐孢子虫病诊断试剂盒打下了基础。
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关键词
隐孢子虫鼠基因型
P23
基因
原核表达
间接ELISA
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职称材料
题名
隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因的原核表达及抗血清的制备
被引量：
2
1
作者
于慧珠
岳城
陈兆国
米荣升
夏延富
机构
中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心
新疆农业大学动物医学院
湖南农业大学动物医学院
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期622-626,共5页
基金
国家高技术研究发展计划(2006AA10A207)
国家“十一五”科技支撑计划(2007BAD40B05)
上海市科技兴农重点攻关项目[沪农科攻字(2005)第3-4号]
文摘
为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA作为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD18-T载体并进行序列测定,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞进行诱导,表达产物SDS-PAGE检测目的蛋白,westernblot分析该重组蛋白的免疫活性。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录中的序列比较,同源性为90.5%,氨基酸序列同源性为87.57%。重组质粒转化菌在IPTG诱导下以包涵体形式高效表达,表达的融合蛋白大小约为46ku,westernblot分析显示,纯化复性后的重组蛋白可被辣根过氧化物酶标记的抗谷胱甘肽巯基转移酶(GST)单克隆抗体、隐孢子虫兔基因型感染兔血清特异性识别。ELISA检测结果表明,该蛋白3次免疫无特征病原体新西兰白兔后,兔血清特异性抗体达到较高水平,表明表达的重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。
关键词
隐孢子虫鼠基因型
卵囊壁蛋白
CP41
克隆
原核表达
Keywords
Cryptosporidium mouse genotype
oocyst wall protein
CP41
cloning
prokaryotic expression
分类号
S852.72 [农业科学—基础兽医学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
隐孢子虫P23基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
被引量：
1
2
作者
张国恩
米荣升
苏庆美
黄燕
周鹏
胡义彬
秦培兰
呼高伟
陈兆国
机构
中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
2011年第2期43-50,共8页
基金
国家"十一五"高技术研究发展计划(863)项目(2006AA10A207)
国家"十一五"科技支撑计划项目(2007BAD40B05)
+1 种基金
上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字[2005]第3-4号)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(2010JB12)
文摘
将隐孢子虫鼠基因型(Cryptosporidium mouse genotype)P23基因亚克隆到pGEX-4T-1载体中,并用大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌诱导表达。以纯化的rP23为诊断抗原,建立隐孢子虫间接ELISA检测方法,观察其敏感性、特异性和重复性,并对临床血清样品进行检测。结果隐孢子虫鼠基因型P23基因在大肠杆菌中获得了高效表达,Western blot检测显示rP23能被隐孢子虫感染兔血清识别。以纯化rP23为诊断抗原,成功地建立了检测兔隐孢子虫病的间接ELISA技术。对23份临床血清检测结果显示,该方法检出率高于Sheather's蔗糖漂浮法、套式PCR法。本研究结果为研制兔隐孢子虫病诊断试剂盒打下了基础。
关键词
隐孢子虫鼠基因型
P23
基因
原核表达
间接ELISA
Keywords
Cryptosporidium mouse genotype
P23 gene
prokaryotic expression
indirect ELISA
分类号
S852.723 [农业科学—基础兽医学]
Q7 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因的原核表达及抗血清的制备
于慧珠
岳城
陈兆国
米荣升
夏延富
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
隐孢子虫P23基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
张国恩
米荣升
苏庆美
黄燕
周鹏
胡义彬
秦培兰
呼高伟
陈兆国
《中国动物传染病学报》
CAS
2011
1
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