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限制性差异显示RT-PCR技术对大鼠脑缺血相关基因表达的研究 被引量:2
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作者 臧林泉 邱鹏新 颜光美 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期232-234,共3页
目的研究大鼠急性局灶性脑缺血时缺血与非缺血组织中基因表达的差异,以及差异表达基因随时间变化的规律,为临床寻找新的防治脑缺血的靶点奠定基础。方法采用线栓法制备大鼠不同时间脑缺血动物模型,采用限制性差异显示RTPCR技术(restrict... 目的研究大鼠急性局灶性脑缺血时缺血与非缺血组织中基因表达的差异,以及差异表达基因随时间变化的规律,为临床寻找新的防治脑缺血的靶点奠定基础。方法采用线栓法制备大鼠不同时间脑缺血动物模型,采用限制性差异显示RTPCR技术(restrictiondisplayRTPCR,RDRTPCR),研究在大鼠局灶性脑缺血过程中差异基因的表达。结果在缺血后各时间点分别出现上调的EST片段有32条、下调的有13条。其中7条在缺血0.5、1.0、4.0小时均出现变化,分别系同一对引物所扩增且分子量相同,其在脑缺血中的表达具有一定的规律性。结论利用RDRTPCR技术成功获取了大鼠脑缺血过程中差异表达的基因,并揭示了部分基因在脑缺血过程中呈现的规律性变化,为进一步筛选、鉴定与克隆表达这些与脑缺血密切相关的基因,阐明脑缺血发病机制奠定基础。 展开更多
关键词 局灶性脑缺血 限制性差异显示rt—pcr 大鼠
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应用限制性显示技术筛选K562细胞脱核前后差异表达基因 被引量:2
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作者 危敏 马文丽 +3 位作者 宋艳斌 毛向明 李凌 郑文岭 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期162-165,共4页
目的应用限制性显示(RD)PCR技术筛选细胞松弛素B(Cytochalasin B,CB)诱导K562细胞脱核前后的差异基因,探讨CB诱导细胞脱核的分子机制。方法用CB(终浓度为10 μg/ml)处理K562细胞24 h,分别提取对照组和处理组细胞总RNA,将两组等量的细胞... 目的应用限制性显示(RD)PCR技术筛选细胞松弛素B(Cytochalasin B,CB)诱导K562细胞脱核前后的差异基因,探讨CB诱导细胞脱核的分子机制。方法用CB(终浓度为10 μg/ml)处理K562细胞24 h,分别提取对照组和处理组细胞总RNA,将两组等量的细胞总RNA纯化为mRNA,反转录为cDNA,利用RD-PCR技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、筛选CB处理前后差异表达的基因。对筛选出的差异表达基因进行克隆、测序,在GenBank检索进行序列同源性分析。结果筛选及克隆了7个差异表达基因,其中水通道蛋白1(AQP1)基因经反转录PCR验证在CB诱导脱核的 K562细胞中表达上调。结论 AQP 1基因在CB诱导K562细胞脱核过程中特异性高表达,提示其可能与细胞脱核及增殖抑制密切相关。 展开更多
关键词 限制性显示pcr K562细胞 细胞松弛素B 水通道蛋白1 差异表达
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安吉白茶正常与白化叶片基因表达差异的初步研究 被引量:18
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作者 王新超 赵丽萍 +2 位作者 姚明哲 陈亮 杨亚军 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期50-55,共6页
用mRNA差别显示技术(DDRT-PCR)研究了茶树温敏突变体——安吉白茶正常叶片和白化叶片的基因表达差异。从58个差异表达的片段中通过半定量RT-PCR鉴定出12个阳性片段,其中5个片段在正常叶片中特异表达,4个在白化叶片中特异表达,1个在绿色... 用mRNA差别显示技术(DDRT-PCR)研究了茶树温敏突变体——安吉白茶正常叶片和白化叶片的基因表达差异。从58个差异表达的片段中通过半定量RT-PCR鉴定出12个阳性片段,其中5个片段在正常叶片中特异表达,4个在白化叶片中特异表达,1个在绿色叶片中上调表达,2个在白化叶片中上调表达。通过与GenBank BLASTX比对分析,5个基因片段比对出相似序列,分别为拟南芥的血红素结合蛋白家族中心区域基因、甜菜的甲硫氨酸合酶基因、苜蓿的一个逆转座子基因、人类20号染色体上的一段3-磷酸甘油醛脱氢酶假基因和玫瑰的ACC合成酶基因,其余7个片段未比对上同源序列,可能为新基因。 展开更多
关键词 安吉白茶 白化 基因表达差异 MRNA差别显示 rt—pcr
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TNF-α致脂肪细胞胰岛素抵抗相关基因的克隆和鉴定
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作者 童国玉 李果 +2 位作者 李纪平 刘嫕 张宏利 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第12期997-1000,共4页
目的分离和克隆肿瘤坏死因子α(TNF α)致 3T3 L1脂肪细胞胰岛素抵抗 (IR)的相关基因。方法分化成熟的 3T3 L1脂肪细胞用TNF α处理 4 8h后抽提总RNA ,采用mRNA差异显示技术分离和克隆TNF α引起脂肪细胞IR的基因 ,再通过半定量RT PCR... 目的分离和克隆肿瘤坏死因子α(TNF α)致 3T3 L1脂肪细胞胰岛素抵抗 (IR)的相关基因。方法分化成熟的 3T3 L1脂肪细胞用TNF α处理 4 8h后抽提总RNA ,采用mRNA差异显示技术分离和克隆TNF α引起脂肪细胞IR的基因 ,再通过半定量RT PCR证实。结果经mRNA差异显示技术分离和克隆到 10个已知基因的cDNA ,3个已知表达序列标签 (ESTs)片段和1个新的EST片段。半定量RT PCR证实TNF α上调 3T3 L1脂肪细胞Synip基因和血浆淀粉样蛋白A3(SAA3)基因的表达。结论Synip基因和SAA3基因的表达升高可能与TNF α致 3T3 L1脂肪细胞IR和相关的心血管并发症有关。 展开更多
关键词 TNF—α 3T3-L1脂肪细胞 胰岛素抵抗 相关基因 克隆和鉴定 P基因 IR MRNA差异显示技术 表达序列标签 rt—pcr
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