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用甲基化修饰法抑制钝顶螺旋藻遗传转化中限制性内切酶对外源质粒的降解
1
作者
王迪
卢永忠
+2 位作者
张学成
茅云翔
隋正红
《海洋科学》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第3期1-4,8,共5页
胞内限制性内切酶降解外源DNA,是钝顶螺旋藻/节旋藻(Spirulina/Arthrospira platensis)遗传转化的难点之一。通过用EDTA螯合Mg2+抑制限制性内切酶活性的方法,对外源质粒进行了甲基化修饰。结果表明,修饰后的外源质粒可抵抗限制性内切酶3...
胞内限制性内切酶降解外源DNA,是钝顶螺旋藻/节旋藻(Spirulina/Arthrospira platensis)遗传转化的难点之一。通过用EDTA螯合Mg2+抑制限制性内切酶活性的方法,对外源质粒进行了甲基化修饰。结果表明,修饰后的外源质粒可抵抗限制性内切酶3h的降解,有利于钝顶螺旋藻的遗传转化。
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关键词
钝顶螺旋藻(Spirulina/Arthrospira
platensis)
限制修饰系统
甲基化酶
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职称材料
一种高效的葡萄球菌基因敲除方法的建立与应用
被引量：
1
2
作者
朱涛
段芹
+1 位作者
李朝品
瞿涤
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第12期1098-1102,共5页
目的建立一种高效构建葡萄球菌基因敲除突变株的方法。方法通过融合PCR将vraSR操纵子上、下游同源片段连接起来;通过基于位点特异性重组的Gateway克隆技术将融合PCR产物连接入温度敏感型穿梭质粒pKOR1,转化修饰缺陷型大肠杆菌DC10B,获...
目的建立一种高效构建葡萄球菌基因敲除突变株的方法。方法通过融合PCR将vraSR操纵子上、下游同源片段连接起来;通过基于位点特异性重组的Gateway克隆技术将融合PCR产物连接入温度敏感型穿梭质粒pKOR1,转化修饰缺陷型大肠杆菌DC10B,获得同源重组质粒pKOR1-vraSR;电转化表皮葡萄球菌RP62A株;在高温和氯霉素双重选择压力下,质粒通过第1次同源重组整合到表皮葡萄球菌染色体上;转移到无抗生素的培养基中继续培养,发生第2次同源重组;将菌液涂布于含1μg/mL脱水四环素的培养基上进行反向筛选,那些未发生重组的整合菌株因表达必需基因secY的反义RNA而无法生存,最后,挑取菌落通过PCR进行鉴定。结果成功构建了难以转化的表皮葡萄球菌RP62A株的vraSR基因敲除突变株。结论利用大肠杆菌DC10B和穿梭质粒pKOR1对葡萄球菌进行基因敲除的方法简便高效,适用的范围更广泛。
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关键词
基因敲除
葡萄球菌
反向选择
限制修饰系统
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职称材料
CglI基因在大肠杆菌中的功能活性分析
被引量：
1
3
作者
李铁民
胡永飞
+4 位作者
冯倩妮
李玉
董占双
刘忠顺
罗恩杰
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2006年第2期41-44,共4页
通过PCR技术从谷氨酸棒杆菌基因组中扩增CglI基因,克隆到载体pMD18-T Simple后测序。将CglI基因亚克隆到表达载体pJL23,构建重组质粒pJL23-CglI,转化大肠杆菌HB101菌株,通过PCR反应筛选鉴定阳性克隆。通过噬菌体感染实验,初步分析了Cgl...
通过PCR技术从谷氨酸棒杆菌基因组中扩增CglI基因,克隆到载体pMD18-T Simple后测序。将CglI基因亚克隆到表达载体pJL23,构建重组质粒pJL23-CglI,转化大肠杆菌HB101菌株,通过PCR反应筛选鉴定阳性克隆。通过噬菌体感染实验,初步分析了CglI基因在大肠杆菌中的功能活性。
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关键词
限制修饰系统
CglI基因
谷氨酸棒杆菌
大肠杆菌
噬菌体
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职称材料
题名
用甲基化修饰法抑制钝顶螺旋藻遗传转化中限制性内切酶对外源质粒的降解
1
作者
王迪
卢永忠
张学成
茅云翔
隋正红
机构
中国海洋大学海洋生命学院
出处
《海洋科学》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第3期1-4,8,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30471317)
文摘
胞内限制性内切酶降解外源DNA,是钝顶螺旋藻/节旋藻(Spirulina/Arthrospira platensis)遗传转化的难点之一。通过用EDTA螯合Mg2+抑制限制性内切酶活性的方法,对外源质粒进行了甲基化修饰。结果表明,修饰后的外源质粒可抵抗限制性内切酶3h的降解,有利于钝顶螺旋藻的遗传转化。
关键词
钝顶螺旋藻(Spirulina/Arthrospira
platensis)
限制修饰系统
甲基化酶
Keywords
Spirulina/Arthrospira platensis
restriction-modification systems
methylase
分类号
Q291 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
一种高效的葡萄球菌基因敲除方法的建立与应用
被引量：
1
2
作者
朱涛
段芹
李朝品
瞿涤
机构
皖南医学院医学寄生虫学教研室
皖南医学院口腔医学院
复旦大学教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第12期1098-1102,共5页
基金
教育部医学分子病毒学重点实验室开放课题(No.201406)
安徽省重点实验室自助研究课题(No.LAB201408)
+1 种基金
安徽省教育厅自然科学研究重点项目(No.KJ2015A218)
省级大学生创新创业训练计划(No.AH201310368111)~~
文摘
目的建立一种高效构建葡萄球菌基因敲除突变株的方法。方法通过融合PCR将vraSR操纵子上、下游同源片段连接起来;通过基于位点特异性重组的Gateway克隆技术将融合PCR产物连接入温度敏感型穿梭质粒pKOR1,转化修饰缺陷型大肠杆菌DC10B,获得同源重组质粒pKOR1-vraSR;电转化表皮葡萄球菌RP62A株;在高温和氯霉素双重选择压力下,质粒通过第1次同源重组整合到表皮葡萄球菌染色体上;转移到无抗生素的培养基中继续培养,发生第2次同源重组;将菌液涂布于含1μg/mL脱水四环素的培养基上进行反向筛选,那些未发生重组的整合菌株因表达必需基因secY的反义RNA而无法生存,最后,挑取菌落通过PCR进行鉴定。结果成功构建了难以转化的表皮葡萄球菌RP62A株的vraSR基因敲除突变株。结论利用大肠杆菌DC10B和穿梭质粒pKOR1对葡萄球菌进行基因敲除的方法简便高效,适用的范围更广泛。
关键词
基因敲除
葡萄球菌
反向选择
限制修饰系统
Keywords
gene knockout
Staphylococci
counter selection
restriction modification system
分类号
R378.11 [医药卫生—病原生物学]
在线阅读
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职称材料
题名
CglI基因在大肠杆菌中的功能活性分析
被引量：
1
3
作者
李铁民
胡永飞
冯倩妮
李玉
董占双
刘忠顺
罗恩杰
机构
中国医科大学病原生物学教研室
辽宁大学生命科学系微生物学教研室
出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2006年第2期41-44,共4页
基金
辽宁省教育厅自然科学基金(20021031)
辽宁省科技厅计划项目(2004205004)
文摘
通过PCR技术从谷氨酸棒杆菌基因组中扩增CglI基因,克隆到载体pMD18-T Simple后测序。将CglI基因亚克隆到表达载体pJL23,构建重组质粒pJL23-CglI,转化大肠杆菌HB101菌株,通过PCR反应筛选鉴定阳性克隆。通过噬菌体感染实验,初步分析了CglI基因在大肠杆菌中的功能活性。
关键词
限制修饰系统
CglI基因
谷氨酸棒杆菌
大肠杆菌
噬菌体
Keywords
restriction modification system
CglI gene
Corynebacterium glutamieum
E. coil
bacteriophage
分类号
R378.21 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
用甲基化修饰法抑制钝顶螺旋藻遗传转化中限制性内切酶对外源质粒的降解
王迪
卢永忠
张学成
茅云翔
隋正红
《海洋科学》
CAS
CSCD
北大核心
2007
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
一种高效的葡萄球菌基因敲除方法的建立与应用
朱涛
段芹
李朝品
瞿涤
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
CglI基因在大肠杆菌中的功能活性分析
李铁民
胡永飞
冯倩妮
李玉
董占双
刘忠顺
罗恩杰
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2006
1
在线阅读
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职称材料
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