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慢病毒干扰小鼠附睾特异的meClps基因可降低精子的运动能力
被引量：
3
1
作者
廉滋珍
曹佐武
+6 位作者
陈冉
陈雷
薛樱子
秦俊文
齐绪峰
张春雪
禹艳红
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期1359-1364,共6页
目的筛选能有效干扰小鼠附睾特异的类辅脂酶meClps基因表达的RNA靶点,并通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后分析对精子运动的影响。方法构建真核表达载体pDsRed2.0-C1-meClps中并转染NIH-3T3细胞,用meClps抗血清检测meClps蛋白的表...
目的筛选能有效干扰小鼠附睾特异的类辅脂酶meClps基因表达的RNA靶点,并通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后分析对精子运动的影响。方法构建真核表达载体pDsRed2.0-C1-meClps中并转染NIH-3T3细胞,用meClps抗血清检测meClps蛋白的表达。针对meClps基因的序列设计并合成3对靶向干扰meClps表达的寡核苷酸序列,构建重组慢病毒载体pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251、224和286。将重组慢病毒干扰质粒分别与pDsRed2.0-C1-meClps共转染到NIH-3T3细胞,半定量PCR和Western blotting检测meClps基因在mRNA和蛋白水平的变化。将筛选得到的干扰效果最好的慢病毒载体包装慢病毒,注射到小鼠附睾头部组织后分析对附睾尾部精子运动性能的影响。结果构建了体外表达meClps蛋白的pDsRed2.0-C1-meClps表达载体和靶向meClps基因的慢病毒RNAi载体。靶向meClps的RNA干扰载体对转染pDsRed2.0-C1-meClps后的NIH-3T3细胞中的meClps的mRNA和蛋白表达都有抑制,但以转染pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251对meClps的抑制效果最明显。包装后的慢病毒注射到小鼠附睾头部后附睾尾部组织中的精子运动速率降低(P<0.05)。结论筛选出RNAi-251能有效干扰meClps表达,通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后精子运动性能降低。
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关键词
RNA干扰
附睾特异表达蛋白
meClps
慢病毒
精子运动
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职称材料
题名
慢病毒干扰小鼠附睾特异的meClps基因可降低精子的运动能力
被引量：
3
1
作者
廉滋珍
曹佐武
陈冉
陈雷
薛樱子
秦俊文
齐绪峰
张春雪
禹艳红
机构
暨南大学再生医学教育部重点实验室
暨南大学生命科学技术学院发育与再生生物学系
暨南大学附属第一医院麻醉科
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期1359-1364,共6页
基金
广州市珠江科技新星专项(2013J2200026)
文摘
目的筛选能有效干扰小鼠附睾特异的类辅脂酶meClps基因表达的RNA靶点,并通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后分析对精子运动的影响。方法构建真核表达载体pDsRed2.0-C1-meClps中并转染NIH-3T3细胞,用meClps抗血清检测meClps蛋白的表达。针对meClps基因的序列设计并合成3对靶向干扰meClps表达的寡核苷酸序列,构建重组慢病毒载体pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251、224和286。将重组慢病毒干扰质粒分别与pDsRed2.0-C1-meClps共转染到NIH-3T3细胞,半定量PCR和Western blotting检测meClps基因在mRNA和蛋白水平的变化。将筛选得到的干扰效果最好的慢病毒载体包装慢病毒,注射到小鼠附睾头部组织后分析对附睾尾部精子运动性能的影响。结果构建了体外表达meClps蛋白的pDsRed2.0-C1-meClps表达载体和靶向meClps基因的慢病毒RNAi载体。靶向meClps的RNA干扰载体对转染pDsRed2.0-C1-meClps后的NIH-3T3细胞中的meClps的mRNA和蛋白表达都有抑制,但以转染pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251对meClps的抑制效果最明显。包装后的慢病毒注射到小鼠附睾头部后附睾尾部组织中的精子运动速率降低(P<0.05)。结论筛选出RNAi-251能有效干扰meClps表达,通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后精子运动性能降低。
关键词
RNA干扰
附睾特异表达蛋白
meClps
慢病毒
精子运动
Keywords
RNA interference
epididymis-specific protein
mouse epididymis-specific colipase-like gene
lentivirus
sperm mobility
分类号
R698 [医药卫生—泌尿科学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
慢病毒干扰小鼠附睾特异的meClps基因可降低精子的运动能力
廉滋珍
曹佐武
陈冉
陈雷
薛樱子
秦俊文
齐绪峰
张春雪
禹艳红
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
3
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