【目的】比较Q-Sepharose Fast Flow和DE-52 2种阴离子交换柱对1株脂环酸芽孢杆菌Alicycloba-cillus contaminans发酵产生的α-葡萄糖苷酶的分离纯化效果,为α-葡萄糖苷酶的规模化生产提供技术支持。【方法】采用硫酸铵分级沉淀法对发...【目的】比较Q-Sepharose Fast Flow和DE-52 2种阴离子交换柱对1株脂环酸芽孢杆菌Alicycloba-cillus contaminans发酵产生的α-葡萄糖苷酶的分离纯化效果,为α-葡萄糖苷酶的规模化生产提供技术支持。【方法】采用硫酸铵分级沉淀法对发酵液中的蛋白质进行沉淀,以分离纯化后的蛋白质含量和酶活为指标,对2种阴离子交换柱的分离纯化效果进行评价。【结果】经过Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱分离得到的α-葡萄糖苷酶有1个酶活吸收峰,最大酶活为6.99×103 U,在这个吸收峰内蛋白质的含量稳定在26.25μg/mL左右;经过DE-52阴离子交换层析柱分离,α-葡萄糖苷酶的酶活范围较大,最大酶活为5.56×103 U,在酶活吸收峰内,蛋白质含量为21.25～232.5μg/mL,变化范围较大。【结论】Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱对α-葡萄糖苷酶的分离效果优于DE-52层析柱。展开更多
目的建立高纯度、高活性的虎血清IgG纯化方法。方法用饱和硫酸铵沉淀虎血清得到IgG粗品;结合Hitrap Protein A亲和层析预装柱及阴离子交换层析法对粗品IgG进一步分离纯化,采用PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法鉴定IgG纯度和免疫活性。...目的建立高纯度、高活性的虎血清IgG纯化方法。方法用饱和硫酸铵沉淀虎血清得到IgG粗品;结合Hitrap Protein A亲和层析预装柱及阴离子交换层析法对粗品IgG进一步分离纯化,采用PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法鉴定IgG纯度和免疫活性。结果80 mL虎血清亲和纯化得到84 mg IgG,阴离子交换层析纯化得到30 mg虎的IgG纯品。结论建立了简便快速、纯度高、活性好的虎血清IgG的分离纯化方法,为虎血清IgG二级抗体的制备提供了高纯度、活性好的一级抗体免疫原。展开更多
以巴西坚果仁为原料,通过粉碎、脱脂、浸提、阴离子交换层析纯化过敏原蛋白Ber e 1;利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、液相色谱-串联质谱联用、Western blot等方法对其进行鉴定,并通过圆二光谱仪和紫外分光光度计表征其二、三级...以巴西坚果仁为原料,通过粉碎、脱脂、浸提、阴离子交换层析纯化过敏原蛋白Ber e 1;利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、液相色谱-串联质谱联用、Western blot等方法对其进行鉴定,并通过圆二光谱仪和紫外分光光度计表征其二、三级结构。结果表明:纯化获得的巴西坚果过敏原Ber e 1,单轮制备量可达20 mg以上,且纯度大于95%,其蛋白质高级结构未被破坏,能够被巴西坚果过敏患者的血清准确识别。该纯化技术路线简单、对设备要求低且高效,为巴西坚果过敏原Ber e 1的相关研究奠定了一定的基础。展开更多
文摘【目的】比较Q-Sepharose Fast Flow和DE-52 2种阴离子交换柱对1株脂环酸芽孢杆菌Alicycloba-cillus contaminans发酵产生的α-葡萄糖苷酶的分离纯化效果,为α-葡萄糖苷酶的规模化生产提供技术支持。【方法】采用硫酸铵分级沉淀法对发酵液中的蛋白质进行沉淀,以分离纯化后的蛋白质含量和酶活为指标,对2种阴离子交换柱的分离纯化效果进行评价。【结果】经过Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱分离得到的α-葡萄糖苷酶有1个酶活吸收峰,最大酶活为6.99×103 U,在这个吸收峰内蛋白质的含量稳定在26.25μg/mL左右;经过DE-52阴离子交换层析柱分离,α-葡萄糖苷酶的酶活范围较大,最大酶活为5.56×103 U,在酶活吸收峰内,蛋白质含量为21.25～232.5μg/mL,变化范围较大。【结论】Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱对α-葡萄糖苷酶的分离效果优于DE-52层析柱。
文摘以巴西坚果仁为原料,通过粉碎、脱脂、浸提、阴离子交换层析纯化过敏原蛋白Ber e 1;利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、液相色谱-串联质谱联用、Western blot等方法对其进行鉴定,并通过圆二光谱仪和紫外分光光度计表征其二、三级结构。结果表明:纯化获得的巴西坚果过敏原Ber e 1,单轮制备量可达20 mg以上,且纯度大于95%,其蛋白质高级结构未被破坏,能够被巴西坚果过敏患者的血清准确识别。该纯化技术路线简单、对设备要求低且高效,为巴西坚果过敏原Ber e 1的相关研究奠定了一定的基础。
