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油菜防卫素和草酸氧化酶基因的克隆与诱导表达水平研究 被引量:11
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作者 刘胜毅 B.D.L.Fitt +3 位作者 刘仁虎 N.Evans 董彩华 黄永菊 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期43-49,共7页
基于拟南芥、甘蓝及油菜等的植物防卫素(PDF)相关基因序列和已克隆的油菜草酸氧化酶(OXO)基因序列设计PCR引物,对甘蓝型油菜基因组DNA进行扩增,获得了序列大小分别为470bp和629bp的PDF1.2和OXO。生物信息学分析表明,该PDF1.2和GenBank... 基于拟南芥、甘蓝及油菜等的植物防卫素(PDF)相关基因序列和已克隆的油菜草酸氧化酶(OXO)基因序列设计PCR引物,对甘蓝型油菜基因组DNA进行扩增,获得了序列大小分别为470bp和629bp的PDF1.2和OXO。生物信息学分析表明,该PDF1.2和GenBank中的相关基因同源性在42%~71%,OXO和GenBank中的相关基因同源性在70%以上。在油菜苗期,油菜黑胫病病原接种后基因PDF1.2表达量增加3倍以上,基因OXO也有不同程度的增强表达;诱导剂acibenzolar-s-methyl诱导基因OXO增强表达,但不能诱导PDF1.2增强表达。诱导的系统表达(非处理叶)高于局部表达(处理叶)。这是首次报道油菜PDF1.2克隆和诱导表达结果。 展开更多
关键词 油菜 防卫素基因 草酸氧化酶基因 克隆 真菌侵染 基因表达水平
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GST-MtDef4融合蛋白的原核表达及体外抑菌活性的检测 被引量:1
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作者 景晓辉 吴伦英 +2 位作者 沈雁 赵辉 吴琳 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期718-723,共6页
为研究苜蓿(Medicago truncatula)防卫素基因MtDef4的抑菌功能,以含有该基因片段的质粒pAND-MtDef4为模板,扩增出相应的目的基因,测序正确后将MtDef4基因片段连接到带有GST标签的原核表达载体pGEX6P-1中,转化大肠杆菌TransB(DE3),经IPT... 为研究苜蓿(Medicago truncatula)防卫素基因MtDef4的抑菌功能,以含有该基因片段的质粒pAND-MtDef4为模板,扩增出相应的目的基因,测序正确后将MtDef4基因片段连接到带有GST标签的原核表达载体pGEX6P-1中,转化大肠杆菌TransB(DE3),经IPTG诱导,Glutathione Sepharose 4B亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳及Western blot确定融合蛋白的表达。体外抑菌试验表明,MtDef4能够抑制病原真菌Corynespora cassiicola而非Collectotrichum gloeosporioides的生长。本研究结果可为进一步培育转基因橡胶抗病品种奠定基础。 展开更多
关键词 苜蓿防卫素基因 原核表达 抗真菌活性 多主棒孢菌 胶孢炭疽菌
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西瓜ClPDF2.1蛋白的原核表达及其对香蕉枯萎病菌的抑制活性测定
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作者 张继友 景晓辉 +1 位作者 吴伦英 刘国道 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期1161-1165,共5页
尖孢镰刀菌古巴专化型侵染香蕉引起的香蕉枯萎病严重危害中国香蕉产业。植物防卫素是一类小的富含半胱氨酸的抗真菌蛋白。本研究旨在了解西瓜(Citrullus lanatus)防卫素蛋白Cl PDF2.1对香蕉枯萎病菌的抑制活性。提取西瓜RNA后反转录为c ... 尖孢镰刀菌古巴专化型侵染香蕉引起的香蕉枯萎病严重危害中国香蕉产业。植物防卫素是一类小的富含半胱氨酸的抗真菌蛋白。本研究旨在了解西瓜(Citrullus lanatus)防卫素蛋白Cl PDF2.1对香蕉枯萎病菌的抑制活性。提取西瓜RNA后反转录为c DNA,以西瓜c DNA为模板,克隆Cl PDF2.1基因,将测序正确的Cl PDF2.1连接到载体p GEX-6P-1,随后转化Trans BL21(DE3)p Lys S,IPTG诱导GST-Cl PDF2.1融合蛋白表达16 h后,经SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定GST-Cl PDF2.1融合蛋白的表达,进行GST-Cl PDF2.1融合蛋白体外抑制香蕉枯萎病菌生长的功能初探。本研究为进一步培育转基因香蕉抗病品种奠定基础。 展开更多
关键词 西瓜防卫素基因Cl PDF2.1 原核表达 抗真菌活性 香蕉枯萎病菌
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