燕窝唾液酸糖蛋白间接竞争酶联免疫检测方法的建立

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作者 何金麟 王仍瑞 +4 位作者 张世伟 冯荣虎 范群艳 柳训才 徐敦明 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第23期7630-7636,共7页

目的建立间接竞争酶联免疫(indirect competitive enzyme linked immunesorbent assay,IC-ELISA)检测燕窝中唾液酸糖蛋白的分析方法。方法以唾液酸糖蛋白为抗原,制备单克隆抗体,对IC-ELISA步骤中相关参数进行优化,确定最佳反应条件。结... 目的建立间接竞争酶联免疫(indirect competitive enzyme linked immunesorbent assay,IC-ELISA)检测燕窝中唾液酸糖蛋白的分析方法。方法以唾液酸糖蛋白为抗原,制备单克隆抗体,对IC-ELISA步骤中相关参数进行优化,确定最佳反应条件。结果最佳包被抗原为1:2000,抗体稀释倍数为1:5000;封闭液浓度为1%牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA),封闭时间为150 min;竞争时间30 min;酶标二抗浓度稀释倍数为1:1000,孵育时间30 min;显色时间为10 min。建立的IC-ELISA检测方法半抑制浓度(50%inhibition concentration,IC_(50))为8.61μg/mL,线性范围为2.23~33.25μg/mL,回收率为82.7%~92.0%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSDs)为1.7%~8.9%。结论该方法灵敏度较高、特异性强,可以有效地鉴别假冒伪劣燕窝产品,具有较好的实际应用价值。 展开更多

关键词 燕窝 唾液酸糖蛋白 间接竞争酶联免疫分析法

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基于异源包被的地索奈德间接竞争酶联免疫检测方法 被引量：2

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作者 谭攀 张世伟 《中国食品工业》 2022年第17期96-99,104,共5页

为监控保健食品和化妆品中地索奈德的滥用情况,本研究建立了地索奈德间接竞争酶联免疫分析方法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)。将地索奈德(Desonide,DES)半抗原通过活泼酯法与钥孔戚血蓝蛋白(keyh... 为监控保健食品和化妆品中地索奈德的滥用情况,本研究建立了地索奈德间接竞争酶联免疫分析方法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)。将地索奈德(Desonide,DES)半抗原通过活泼酯法与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联,获得地索奈德完整抗原DES-KLH;通过免疫小鼠和细胞融合获得抗地索奈德单克隆抗体。将地索奈德半抗原通过活泼酯法分别与牛血清白蛋白(bovine serumalbumin,BSA)偶联作为包被原,建立地索奈德同源及异源的间接竞争酶联免疫分析方法。在同源包被情况下,地索奈德灵敏度为7.9ng/m L,而DEX异源包下灵敏度为0.72ng/m L。对增强骨密度类保健食品、面霜、精华、眼霜、爽肤水的添加回收率在82%—105%之间。该方法能有效应用于食品和化妆品中地索奈德的快速筛查。 展开更多

关键词 糖皮质激素 地索奈德 异源包被 间接竞争酶联免疫法(ic-ELISA)

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间接竞争酶联免疫吸附法检测保健食品中糖皮质激素类药物

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作者 吴钰瑶 盘焯晖 +5 位作者 林浩标 陈凤燕 刘昀昀 段利瑾 梁岳 刘凤银 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第16期45-54,共10页

目的建立间接竞争酶联免疫吸附(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)法用于保健食品中糖皮质激素类药物多残留检测。方法将可的松、地塞米松分别与丁二酸酐衍生制备免疫半抗原,倍他米松衍生制备包被半抗... 目的建立间接竞争酶联免疫吸附(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)法用于保健食品中糖皮质激素类药物多残留检测。方法将可的松、地塞米松分别与丁二酸酐衍生制备免疫半抗原,倍他米松衍生制备包被半抗原,采用活泼酯法与载体蛋白偶联制备人工抗原,采用紫外(ultraviolet,UV)吸收光谱鉴定及基质辅助激光解析串联飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption-tandem time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)测定人工抗原的偶联比。通过动物免疫,制备针对糖皮质激素类药物的兔多克隆抗体,建立保健食品中糖皮质激素类药物多残留检测ic-ELISA法。结果地塞米松丁二酸酐衍生物为免疫半抗原,倍他米松丁二酸酐衍生物为包被半抗原。通过优化实验条件,确定了最佳的包被原质量浓度为1.25μg/m L,以及最佳的抗体稀释倍数为9000倍。在此条件下,本研究建立的ic-ELISA法对11种糖皮质激素类药物的半抑制质量浓度为0.68~40.17 ng/m L,展现了良好的检测灵敏度。使用甲醇超声提取,样品提取液通过标准稀释液稀释500倍消除基质效应,11种目标分析物在4种剂型保健食品中的添加回收率为81.2%~118.7%,变异系数低于14.00%。结论本研究成功制备糖皮质激素类药物的广谱性多克隆抗体,并建立了保健食品中糖皮质激素类药物多残留检测ic-ELISA法,可用于保健食品中糖皮质激素类药物的快速筛查。 展开更多

关键词 糖皮质激素类药物 广谱性抗体 间接竞争酶联免疫吸附法 保健食品

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沙拉沙星间接竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立

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作者 李思 蒋蔚 +5 位作者 程婷婷 卢春慧 辛思培 曹敬政 王权 孙卫东 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第5期1772-1783,共12页

为建立动物源性食品中沙拉沙星(SAR)残留的快速检测方法,本试验通过对盐酸沙拉沙星进行分子改造和偶联蛋白合成完全免疫原,免疫小鼠制备SAR单克隆抗体。通过棋盘法确定最佳包被原浓度及一抗稀释度,优化确定最佳反应条件,从而建立间接竞... 为建立动物源性食品中沙拉沙星(SAR)残留的快速检测方法,本试验通过对盐酸沙拉沙星进行分子改造和偶联蛋白合成完全免疫原,免疫小鼠制备SAR单克隆抗体。通过棋盘法确定最佳包被原浓度及一抗稀释度,优化确定最佳反应条件,从而建立间接竞争化学发光酶联免疫(ic-CLEIA)检测方法,并通过灵敏度、精密度、交叉反应率、添加回收试验对该方法进行评价。紫外扫描结果显示,完全免疫原偶联成功;制备的SAR单克隆抗体效价达1∶4×106;包被原浓度为0.25μg/mL,抗体稀释比为1∶750000,4℃包被过夜,5%脱脂乳封闭,竞争孵育1 h,酶标二抗稀释比为1∶10000,孵育1 h为ic-CLEIA最佳反应条件;建立的ic-CLEIA方法标准曲线呈线性,线性范围为0.0625~10 ng/mL,R2=0.995,灵敏度IC50为1.45 ng/mL;其平均批内和批间变异系数均<10%;除与二氟沙星的交叉反应率达到98.08%以外,与其他氟喹诺酮类药物的交叉反应率均<8%,与其他非氟喹诺酮类药物均无交叉反应;SAR标准溶液的最低检测限(LOD)为0.32 ng/mL,SAR在鸡肉样品中的LOD为0.46μg/kg;添加回收率在88.3%~106.7%范围内,其变异系数≤12.2%。结果表明,本研究建立的ic-CLEIA方法检测速度快、灵敏度高,适用于动物源性食品中SAR残留的大量检测,为SAR残留检测提供了新的方法。 展开更多

关键词 沙拉沙星 单克隆抗体 间接竞争化学发光酶联免疫 残留检测

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食品中黄曲霉毒素M_(1)的间接竞争酶联免疫法的建立 被引量：1

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作者 侯悦 陈瑞鹏 +3 位作者 芦然 高志贤 周焕英 杨仕平 《食品研究与开发》 CAS 2024年第3期181-186,共6页

该文建立一种间接竞争酶联免疫法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)快速测定食品中黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))的分析方法。AFM_(1)标准品用甲醇稀释,AFM_(1)标准品与AFM_(1)全抗原竞... 该文建立一种间接竞争酶联免疫法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)快速测定食品中黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))的分析方法。AFM_(1)标准品用甲醇稀释,AFM_(1)标准品与AFM_(1)全抗原竞争结合AFM_(1)单克隆抗体,利用3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine,TMB)单组分显色液显色后,酶标仪测定吸光度。在优化好的条件下,浓度范围为9.743~2.605×10^(3)pg/mL时具有良好的线性关系,相关系数(determination coefficient,R^(2))为0.9927,检出限IC_(10)为3.84 pg/mL,加标回收率为88.43%~105.75%。该方法适用性好、操作简单、灵敏度高,满足食品中AFM_(1)分析检测的需求。 展开更多

关键词 间接竞争酶联免疫法 黄曲霉毒素M_(1) 快速检测 食品 试剂盒

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雌二醇间接竞争酶联免疫吸附方法的建立 被引量：7

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作者 刘珒 雷红涛 +5 位作者 孙远明 李振峰 杨金易 沈玉栋 王弘 曾道平 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第8期146-150,共5页

建立食品中雌二醇免疫分析方法。将雌二醇进行结构改造合成半抗原并经过核磁氢谱和红外光谱验证,再采用活泼酯法与载体BSA和OVA偶联制备人工抗原,免疫兔子制备多克隆抗体,经过反应条件优化建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法。结果表明:I... 建立食品中雌二醇免疫分析方法。将雌二醇进行结构改造合成半抗原并经过核磁氢谱和红外光谱验证,再采用活泼酯法与载体BSA和OVA偶联制备人工抗原,免疫兔子制备多克隆抗体,经过反应条件优化建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法。结果表明:IC50为3.9ng/mL,检测限为0.3ng/mL,交叉反应率均小于1.21%。检测方法具有高灵敏度和特异性,可应用于食品中雌二醇检测试剂盒的研制。 展开更多

关键词 雌二醇 抗体 间接竞争酶联免疫检测

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基于免疫磁珠净化间接竞争酶联免疫吸附试验检测氟喹诺酮类药物 被引量：3

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作者 黄婧洁 李苗 +4 位作者 陈莹娴 钟雅兰 张婷婷 姜廷超男 李建成 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期766-778,共13页

本研究旨在建立一种基于免疫磁珠进行分离、富集和净化前处理,检测鸡肉、鸡肝和鱼肉中氟喹诺酮类药物残留的间接竞争酶免疫吸附试验(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)的研究方法。通过对合成免疫磁珠... 本研究旨在建立一种基于免疫磁珠进行分离、富集和净化前处理,检测鸡肉、鸡肝和鱼肉中氟喹诺酮类药物残留的间接竞争酶免疫吸附试验(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)的研究方法。通过对合成免疫磁珠及免疫磁珠净化过程中单克隆抗体添加量、偶联时间、缓冲液pH、抗原添加量、抗原捕获时间、温度及包被条件等进行优化,初步建立了基于免疫磁珠净化的icELISA检测方法。结果显示:1)在1 mg的磁珠中,沙拉沙星(sarafloxacin,SAR)单克隆抗体最佳偶联量为15μg,偶联时间60 min,pH为4.4;2)最佳抗原添加量为1 ng·mL^(-1),捕获时间40 min,缓冲液为0.01 mol·L^(-1)PBS,IC50为0.73 ng·mL^(-1),线性范围为1.0~3.2 ng·mL^(-1);3)氟喹诺酮类药物在鸡肉、鸡肝、鱼肉的检测限均不超过1.33、2.17、2.31μg·kg^(-1),回收率为76.83%~98.70%,批内变异系数批间变异系数均不超过15%,经验证,鸡肉样本检测结果与高效液相色谱法(HPLC)结果一致。结果表明,与传统仪器检测方法相比,该方法提高了检测氟喹诺酮类药物的简便性、选择性以及检测效率,为氟喹诺酮类药物的残留检测提供了新思路。 展开更多

关键词 免疫磁珠富集 氟喹诺酮类药物 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫吸附试验(icELISA)

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基于异源包被的曲安奈德竞争酶联免疫检测方法 被引量：4

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作者 王英姿 闫剑勇 张世伟 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第8期263-267,共5页

为监控曲安奈德的滥用情况,本研究建立了曲安奈德竞争酶联免疫检测方法。将曲安奈德(Triamcinolone acetonide,TCA)半抗原通过活泼酯法与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联获得曲安奈德完整抗原TCA-KLH;通过免疫小鼠... 为监控曲安奈德的滥用情况,本研究建立了曲安奈德竞争酶联免疫检测方法。将曲安奈德(Triamcinolone acetonide,TCA)半抗原通过活泼酯法与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联获得曲安奈德完整抗原TCA-KLH;通过免疫小鼠、细胞融合及筛选获得一株能够稳定分泌抗曲安奈德的单克隆抗体细胞株,制备并纯化了腹水抗体。将TCA和地塞米松(Dexamethasone,DEX)半抗原通过活泼酯法分别与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)偶联作为包被原,建立曲安奈德同源及异源的间接竞争酶联免疫分析方法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)。在同源包被情况下,曲安奈德灵敏度为5.4 ng/mL,而DEX异源包下灵敏度为0.53 ng/mL。未观察该方法到对哈西奈德、布地奈德、安西奈德以外的其他糖皮质激素的交叉反应。在添加回收实验中,使用20%甲醇水溶液提取动物组织的添加回收率在75%~95%之间。该方法能有效应用于动物组织中曲安奈德的快速筛查。 展开更多

关键词 糖皮质激素 曲安奈德 异源包被 间接竞争酶联免疫法(ic-ELISA)

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牛奶中替米考星间接竞争酶联免疫吸附检测法的建立 被引量：9

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作者 韩青 王静 +1 位作者 徐豪 杨娟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第10期2625-2630,共6页

本研究通过棋盘法优化替米考星抗体、包被原浓度,并考察了最佳包被条件,最佳反应温度、时间和酶标二抗最佳反应时间等,建立了替米考星残留的间接竞争酶联免疫吸附试验（ELISA）并应用到牛奶样本的检测。建立的间接竞争ELISA方法半数抑... 本研究通过棋盘法优化替米考星抗体、包被原浓度,并考察了最佳包被条件,最佳反应温度、时间和酶标二抗最佳反应时间等,建立了替米考星残留的间接竞争酶联免疫吸附试验（ELISA）并应用到牛奶样本的检测。建立的间接竞争ELISA方法半数抑制浓度（IC50）为2.1ng/mL,牛奶中替米考星的最低检测限（LOD）为2μg/L。在5、10和20μg/L添加浓度下,回收率为79.2%-90.1%,变异系数不高于9.0%。与其他常见的大环内酯类药物无交叉反应。本研究建立的替米考星间接竞争ELISA方法灵敏度达到了残留限量标准要求,为开发可用于牛奶中替米考星的快速检测试剂盒奠定基础。 展开更多

关键词 间接竞争酶联免疫吸附试验 替米考星 牛奶 残留

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莫米松糠酸酯高特异性抗体制备及酶联免疫分析方法

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作者 谢桂勉 黄莹星 +1 位作者 林俊虹 张世伟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期126-131,共6页

莫米松糠酸酯(mometasone furoate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate,MDF),合成了免疫... 莫米松糠酸酯(mometasone furoate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate,MDF),合成了免疫半抗原和包被半抗原。免疫半抗原以活泼脂法连接钥孔血蓝蛋白获得全抗原,通过免疫小鼠、细胞融合及筛选获得能够稳定分泌抗MF单克隆抗体的细胞株,制备并纯化了抗体。该抗体的主要识别区域为MF的五元环区域,因此不和常见的64种糖皮质激素发生交叉反应。建立了基于异源包被的MF间接竞争酶联免疫检测法,其半抑制浓度(IC_(50))为1.2 ng/mL,对肌肉和肝脏的最低检出限分别为0.52μg/kg和0.59μg/kg。灵敏度相比于同源包被提升了20倍。使用60%甲醇水溶液提取动物组织的添加回收率为70%~82%。该方法能有效应用于动物组织中MF的快速筛查。 展开更多

关键词 糖皮质激素 莫米松糠酸酯 单克隆抗体 异源包被 间接竞争酶联免疫检测法(ic-ELISA)

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生物素间接竞争酶联免疫方法的建立 被引量：1

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作者 葛文亮 胥传来 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1045-1050,共6页

利用不同方法合成的生物素免疫原免疫小鼠,利用所得到的单克隆抗体建立针对生物素的间接竞争酶联吸附测定方法。所建立的间接竞争酶联吸附测定方法对生物素具有良好的特异性与较高的灵敏度,其对生物素半抑制率质量浓度为2.01 ng/m L,最... 利用不同方法合成的生物素免疫原免疫小鼠,利用所得到的单克隆抗体建立针对生物素的间接竞争酶联吸附测定方法。所建立的间接竞争酶联吸附测定方法对生物素具有良好的特异性与较高的灵敏度,其对生物素半抑制率质量浓度为2.01 ng/m L,最低检测限为0.32 ng/m L,并且对液态奶、奶粉等样品中的生物素含量具有准确的检出性。与国标相比,所建立的间接竞争酶联吸附测定方法具有结果稳定,操作方便和高灵敏度高特异性等优点,对实际样品的检测具有重要意义。 展开更多

关键词 乳制品 生物素 间接竞争酶联吸附测定法

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基于酶联免疫分析方法检测畜禽饲料中恩拉霉素

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作者 蔡永辉 王康 +1 位作者 陈敏 王冰清 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期571-576,共6页

本文建立了一种应用于检测畜禽饲料中恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法。采用羰基二咪唑法将生物活性高的恩拉霉素A组分合成的半抗原偶联卵清蛋白,构建检测原;同时将杂交瘤细胞株2H1F91免疫BALB/c小鼠,制备特异性识别恩拉霉素的单克隆... 本文建立了一种应用于检测畜禽饲料中恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法。采用羰基二咪唑法将生物活性高的恩拉霉素A组分合成的半抗原偶联卵清蛋白,构建检测原;同时将杂交瘤细胞株2H1F91免疫BALB/c小鼠,制备特异性识别恩拉霉素的单克隆抗体。在此基础上,构建了恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法的标准曲线,该曲线IC_(50)为91.61ng/mL,线性范围为25.73~471.39ng/mL,检出限为13.11ng/mL。猪饲料样品的添加回收率为91.60%~95.75%,鸡饲料的添加回收率为89.33%~94.80%,并且二者的变异系数均低于12%,这表明建立的方法结果可靠,适用于畜禽饲料中恩拉霉素含量的快速检测。 展开更多

关键词 恩拉霉素 单克隆抗体 间接竞争性酶联免疫吸附分析 猪饲料 鸡饲料

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集成化酶联免疫微流控平台检测红酒中的赭曲霉毒素A

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作者 刘军 曾施宇 +3 位作者 朱浩宇 谭港 江卓奥 尹彬沣 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第17期222-231,共10页

目的基于微流控芯片在自动化、检测成本上的优势,建立高效的间接竞争酶联免疫吸附法检测红酒中的赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的方法。方法设计按压阀控制的微流控芯片,将含有OTA的样本以及其余4种免疫检测试剂注射进入芯片中。通过... 目的基于微流控芯片在自动化、检测成本上的优势,建立高效的间接竞争酶联免疫吸附法检测红酒中的赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的方法。方法设计按压阀控制的微流控芯片,将含有OTA的样本以及其余4种免疫检测试剂注射进入芯片中。通过负压泵驱动这些试剂分别流经包被有OTA的硅膜夹层进行检测。确定抗原和抗体的工作浓度,绘制拟合标准曲线,计算检出限,分析真实样本的加标回收率。结果抗原为鸡蛋卵白蛋白(ovalbumin,OVA)偶联的OTA,孵育质量浓度为5.0μg/mL,捕获抗体为鼠抗OTA抗体,工作质量浓度为5.0μg/mL,检测抗体为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的羊抗小鼠免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG),稀释倍数为1:1000,OTA的线性范围为1~32 ng/mL,检出限为0.632 ng/mL,干红葡萄酒中的回收率为94.48%~105.76%;相对标准偏差为6.54%~11.18%。结论建立的方法检测成本低,灵敏度高,准确性好,可用于红酒中OTA的定量检测,为检测食品中的生物标志物提供参考。 展开更多

关键词 微流控芯片 间接竞争酶联免疫吸附法 赭曲霉毒素A 干红葡萄酒

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间接竞争酶联免疫分析法测定葛根中葛根素的含量 被引量：4

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作者 单文超 冯会宾 +5 位作者 赵琰 曾文浩 贺娜娜 赵妍 孙晔 屈会化 《环球中医药》 CAS 2015年第9期1089-1092,共4页

目的利用间接竞争酶联免疫分析法（indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA）测定葛根中葛根素的含量。方法利用抗葛根素单克隆抗体,通过线性关系、精密度、回收率的考察,建立葛根素的ic-ELISA分析方法。结... 目的利用间接竞争酶联免疫分析法（indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA）测定葛根中葛根素的含量。方法利用抗葛根素单克隆抗体,通过线性关系、精密度、回收率的考察,建立葛根素的ic-ELISA分析方法。结果该方法的线性范围为15.6～500ng/m L,孔间差和板间差均不大于3.5%,平均回收率为101.8%,并且该法检测结果与高效液相色谱法检测结果一致。结论本实验为葛根质量控制以及含葛根药材的中药复方中葛根素的含量测定提供了一种新技术方法。 展开更多

关键词 间接竞争酶联免疫分析法 葛根素 葛根 含量测定

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基于单克隆抗体的滴滴涕、硫丹和水胺硫磷酶联免疫检测方法研究 被引量：5

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作者 丁园 秦爽 +2 位作者 刘伟美 王鸣华 华修德 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期662-671,共10页

该研究制备了滴滴涕、硫丹和水胺硫磷的单克隆抗体。利用商业化的辣根过氧化物酶标记羊抗鼠抗体作为检测二抗,分别建立了3种农药的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(Indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)。... 该研究制备了滴滴涕、硫丹和水胺硫磷的单克隆抗体。利用商业化的辣根过氧化物酶标记羊抗鼠抗体作为检测二抗,分别建立了3种农药的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(Indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)。在最优条件下,ic-ELISA对滴滴涕、硫丹和水胺硫磷检测的半数抑制浓度和检出限分别为10.72 ng·mL^(-1)和1.85 ng·mL^(-1)、9.69 ng·mL^(-1)和2.19 ng·mL^(-1)及13.26 ng·mL^(-1)和3.04 ng·mL^(-1)。特异性评价结果显示,滴滴涕对o,p-滴滴伊、p,p-滴滴伊和o,p-滴滴涕的交叉反应率(CR)为9.0%~33.4%;硫丹对艾氏剂、氯丹、狄氏剂、β-硫丹和α-硫丹的交叉反应率为17.4%~84.3%;水胺硫磷对其6种结构类似物均无明显交叉反应(CR<0.1%)。所建立的方法对稻田水、土壤、苹果和香蕉样品中滴滴涕、硫丹和水胺硫磷的平均加标回收率和相对标准偏差分别为71.4%~93.3%和3.8%~9.6%、74.0%~97.4%和3.0%~11%及70.8%~97.0%和4.2%~12%。同时,ic-ELISA对滴滴涕、硫丹和水胺硫磷的检测结果与色谱仪器具有较好的一致性。上述结果表明,该研究制备的滴滴涕、硫丹和水胺硫磷的单克隆抗体可用于建立ic-ELISA,且具有较好的灵敏度和准确性。 展开更多

关键词 间接竞争酶联免疫吸附分析 滴滴涕 硫丹 水胺硫磷 农药残留 单克隆抗体

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大型溞胆碱酯酶间接非竞争酶联免疫吸附定量分析法的建立 被引量：2

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作者 刘洪翠 杨艳霞 李少南 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期347-354,共8页

用达到电泳纯的大型溞(Daphnia magna)胆碱酯酶(cholinesterase,ChE)免疫BALB/c小鼠,得到效价达1∶8 000的鼠抗大型溞ChE多克隆抗血清;通过优化抗原抗体反应条件,建立定量分析大型溞ChE含量的间接非竞争酶联免疫吸附法(indirect and non... 用达到电泳纯的大型溞(Daphnia magna)胆碱酯酶(cholinesterase,ChE)免疫BALB/c小鼠,得到效价达1∶8 000的鼠抗大型溞ChE多克隆抗血清;通过优化抗原抗体反应条件,建立定量分析大型溞ChE含量的间接非竞争酶联免疫吸附法(indirect and non-competitive enzyme-linked immunosorbentassay)。结果表明:此方法检测灵敏度为24ng.mL-1;经免疫交叉反应鉴定,所获抗血清与5、10μg.mL-1标准蛋白质和其他生物如花翅摇蚊、尖额溞、斑马鱼(脑、脑除外的整体)、家蚕、意大利蜜蜂、赤子爱胜蚯蚓、非洲爪蟾(蝌蚪)等来源的ChE交叉反应率分别为:<0.25%、<0.25%、2.13%、10.19%、3.88%、3.56%、2.81%、3.93%、5.00%和2.75%,具较高的特异性。说明用本试验得到的抗血清建立的间接非竞争酶联免疫吸附法可用于大型溞体内ChE含量的测定,以利于在农药暴露环境下大型溞体内ChE活性的精确检测。 展开更多

关键词 大型溞 间接非竞争酶联免疫吸附法 胆碱酯酶免疫含量

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吡虫啉单克隆抗体的制备及其间接竞争化学发光酶联免疫分析方法的建立 被引量：2

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作者 谢波 柳心梅 +3 位作者 卢迪莎 程勇健 罗林 肖治理 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1474-1481,共8页

以吡虫啉原药和3-巯基丙酸为原料,合成了吡虫啉半抗原,通过活泼酯法将其与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联制备得到完全抗原,经免疫Balb/c雌性小鼠并与骨髓瘤细胞融合获得吡虫啉单克隆抗体,建立了用于吡虫啉检测的间... 以吡虫啉原药和3-巯基丙酸为原料,合成了吡虫啉半抗原,通过活泼酯法将其与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联制备得到完全抗原,经免疫Balb/c雌性小鼠并与骨髓瘤细胞融合获得吡虫啉单克隆抗体,建立了用于吡虫啉检测的间接竞争化学发光酶联免疫分析方法(ic-CLEIA)。优化了方法的包被原稀释倍数、抗体稀释倍数、缓冲液种类、缓冲液的pH值、一抗竞争反应时间、酶标二抗稀释倍数等条件,最适条件为:包被原质量浓度62.50 ng/mL(稀释16000倍),抗体质量浓度103.12 ng/mL(稀释64000倍),缓冲液PBS(pH 7.4),抗原与抗体竞争反应时间30 min,酶标二抗稀释倍数1∶7000。结果表明,在最适条件下该方法的检出限(IC_(10))为0.03 ng/mL,IC_(50)为0.57 ng/mL,线性检测范围(IC_(20)~IC_(80))为0.083~3.99 ng/mL。与氯噻啉的交叉反应率为2.2%,与噻虫胺、呋虫胺、啶虫脒、噻虫啉、噻虫嗪5种吡虫啉结构类似物无明显交叉反应。对黄瓜和苹果样品的加标回收率为82.0%~112%,相对标准偏差小于15%。实际样品检测结果与HPLC仪器方法相关性良好(r^(2)=0.989)。结果表明,所建立的ic-CLEIA方法具有特异性强、灵敏度高的特点,可用于食品中吡虫啉残留的快速检测。 展开更多

关键词 吡虫啉 单克隆抗体 间接竞争化学发光酶联免疫分析

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玉米中伏马毒素B1、B2间接竞争酶联免疫吸附方法的建立 被引量：6

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作者 于瑶 李岩松 +5 位作者 卢士英 杨勇 胡盼 任洪林 柳增善 周玉 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第23期193-197,共5页

基于伏马毒素B1(fumonisin B1,FB1)单克隆抗体建立了间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA),用于玉米中伏马毒素的初步筛查。该方法优化了抗原包被浓度和单抗体稀释倍数、抗原包被... 基于伏马毒素B1(fumonisin B1,FB1)单克隆抗体建立了间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA),用于玉米中伏马毒素的初步筛查。该方法优化了抗原包被浓度和单抗体稀释倍数、抗原包被条件、酶标二抗稀释倍数、底物作用时间。结果显示,线性检测范围为1.41~54.2ng/m L,最低检测限为24.5μg/kg,实测玉米样品加标回收率为89.36%~108.54%。交叉反应结果显示,与伏马毒素B2(fumonisin B2,FB2)交叉反应率为129.88%,与其他真菌毒素交叉反应均小于10%,该ic-ELISA方法可对玉米样品中的FB1与FB2总量进行初筛。 展开更多

关键词 玉米 伏马毒素B1 伏马毒素B2 间接竞争酶联免疫吸附法(ic-ELISA)

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基于单克隆抗体的双酚A间接竞争酶联免疫分析法的建立 被引量：5

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作者 张玉超 刘旭东 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2020年第17期172-177,共6页

为建立一种简便、快速、准确的双酚A检测方法,采用活性酯法将双酚酸与牛血清蛋白、卵清蛋白偶联制备人工抗原免疫BALB/c小鼠。选择抗血清效价和灵敏度高的BALB/c小鼠,采用聚乙二醇法制备杂交瘤细胞,获得一株可分泌双酚A单克隆抗体的杂... 为建立一种简便、快速、准确的双酚A检测方法,采用活性酯法将双酚酸与牛血清蛋白、卵清蛋白偶联制备人工抗原免疫BALB/c小鼠。选择抗血清效价和灵敏度高的BALB/c小鼠,采用聚乙二醇法制备杂交瘤细胞,获得一株可分泌双酚A单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过方阵滴定和反应条件优化,建立一种基于单克隆抗体的双酚A间接竞争酶联免疫分析法。该检测方法在0.5 ng/mL^50 ng/mL内有良好的线性关系,最低检测限IC10为0.5 ng/mL,半数抑制率IC50为16.65 ng/mL,水样中加标回收率为89.72%~105.25%。该单克隆抗体效价高、特异性强,该检测方法灵敏度高。 展开更多

关键词 双酚A 人工抗原 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫分析法

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间接竞争ELISA检测杏仁过敏原Amandin

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作者 刘俊伟 吴雨晴 +2 位作者 李明新 陆旸 任光达 《食品研究与开发》 CAS 2024年第4期172-176,共5页

Amandin是引起杏仁过敏的主要过敏原。通过提取、纯化得到Amandin蛋白并制备出抗Amandin抗体。该抗体与花生全蛋白、芝麻全蛋白、核桃JugR1、β-乳球蛋白、酪蛋白、溶菌酶均无交叉反应。通过优化包被原浓度、抗体浓度以及缓冲液pH值等条... Amandin是引起杏仁过敏的主要过敏原。通过提取、纯化得到Amandin蛋白并制备出抗Amandin抗体。该抗体与花生全蛋白、芝麻全蛋白、核桃JugR1、β-乳球蛋白、酪蛋白、溶菌酶均无交叉反应。通过优化包被原浓度、抗体浓度以及缓冲液pH值等条件,建立间接竞争酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测Amandin的方法。该方法的灵敏度为(0.66±0.04)μg/mL,检出限为(0.08±0.04)μg/mL。在饼干、面包、冰淇淋样品中的添加回收试验结果表明,该方法的回收率为68.22%~114.00%。稳定性结果表明Amandin蛋白在37℃条件下可以稳定保存7 d。 展开更多

关键词 杏仁 过敏原 Amandin 间接竞争 酶联免疫吸附测定

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