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间接竞争酶联免疫分析方法检测青霉素G 被引量:2
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作者 王玉珍 田茂忠 +2 位作者 张小玲 温雅琼 王珠倩 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期657-661,共5页
本研究介绍了青霉素G残留的危害,并建立了间接竞争酶联免疫分析方法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测牛奶类样品中青霉素G的残留量。首先制备出青霉素G的单克隆抗体,在最优实验条件下,青霉素G浓度范围在1~1000 ng·mL... 本研究介绍了青霉素G残留的危害,并建立了间接竞争酶联免疫分析方法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测牛奶类样品中青霉素G的残留量。首先制备出青霉素G的单克隆抗体,在最优实验条件下,青霉素G浓度范围在1~1000 ng·mL^(-1)内,所建立方法的灵敏度(IC_(50))为17.33 ng·mL^(-1),检出限为0.75 ng·mL^(-1)。该抗体与苄星青霉素交叉反应率为30.09%,而与氨苄青霉素、羧苄青霉素、阿莫西林、先锋霉素、头孢噻肟钠均无交叉反应。牛奶类样品中青霉素G的加标回收率为81.70%~99.08%,相对标准偏差为1.82%~11.41%。以上结果表明,本研究建立的间接竞争酶联免疫吸附分析方法有较高的灵敏度和较强的特异性,可以用于青霉素G的检测。 展开更多
关键词 青霉素G 单克隆抗体 免疫吸附分析方法(ELISA) 样品
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猪伪狂犬病病毒gB抗体竞争酶联免疫检测方法的建立
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作者 刘梅芬 马震原 +9 位作者 王淑娟 闫若潜 班付国 赵雪丽 谢彩华 王东方 柴茂 刘影 杨海波 王翠 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期141-147,共7页
为建立猪伪狂犬病病毒gB抗体竞争酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的gB蛋白为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗gB蛋白单克隆抗体为酶标抗体,经各反应条件的优化,成功建立了PRV gB抗体的竞争酶联免疫检测方法,并对该方法的... 为建立猪伪狂犬病病毒gB抗体竞争酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的gB蛋白为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗gB蛋白单克隆抗体为酶标抗体,经各反应条件的优化,成功建立了PRV gB抗体的竞争酶联免疫检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了评估。PRV gB抗体竞争酶联免疫检测方法经优化后的最佳条件为:gB蛋白的最佳包被浓度为0.25μg/mL、包被量100μL/孔,酶标抗体的最佳稀释浓度为1∶1000,样品检测时间为30 min(抗原抗体反应)+15 min(底物显色);敏感性结果显示,PRV gB标准阳性血清(Z89)经1∶512稀释后经检测仍为阳性;特异性结果显示,猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、大肠杆菌抗体阳性血清的检测结果均为阴性;批内、批间重复试验结果显示,批内、批间变异系数分别为0.24%~9.45%、0.58%~11.61%,均小于12%。通过对采集的184份临床血清检测结果进行比较,该方法与商品化试剂盒的阳性符合率为96.23%,阴性符合率为96.95%,总符合率96.74%。本研究在国内首次建立PRV gB竞争酶联免疫检测方法,为PRV gB抗体快速检测提供了可靠的技术手段。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 gB蛋白 竞争免疫
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纳米抗体多聚化测略提升间接竞争性酶联免疫吸附实验检测黄曲霉毒素M_(1)的灵敏度 被引量:2
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作者 刘颖达 刘海媛 +5 位作者 苏娜 李庆辉 刘佳 TUYATSETSEG Jambel 伊丽 吉日木图 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第18期291-299,共9页
酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容... 酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容易变性,贮存期短,易受到检测环境中其他物质干扰而造成假阳性或假阴性等。该实验使用实验室前期获得的抗黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))纳米抗体(nanobody-M4,Nb-M4)与C4结合蛋白(recombinant C4 binding protein alpha,C4BPa)C端片段融合形成自组装七聚体融合蛋白(Nb-M4-C4 bpα),并基于该七聚体开发应用于乳制品中AFM_(1)的间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)。在最佳实验参数下,AFM_(1)的IC_(50)为0.038 ng/mL,检测限为0.009 ng/mL,较单体Nb-M4的提高了8.63倍和5.56倍。与AFM_(1)类似物和其他常见真菌毒素的交叉反应可忽略不计,且在加标乳样中获得了良好的回收率和可重复性。此外,将所开发的方法应用于实际样品中AFM_(1)的分析,结果与HPLC的结果具有很好的相关性(R^(2)=0.995)。该研究表明,自组装的七聚化纳米抗体是改善亲和力和信号放大的有效策略,今后可用于灵敏、选择性和快速检测食品中的霉菌毒素和其他小分子污染物。 展开更多
关键词 竞争免疫吸附实验 纳米抗体 多聚化 灵敏度增强方法
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以牛β-酪蛋白为标志物的骆驼乳掺伪酶联免疫检测方法
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作者 冯荣虎 贺颖 +4 位作者 郭继平 周迎春 吴会玲 赖心田 张世伟 《农产品加工》 2025年第14期67-70,78,共5页
骆驼乳作为一种常见的特种乳品价格远高于其他乳品而口感却较难区分,因此掺伪现象屡见不鲜。为监控市售骆驼乳的掺伪情况,建立了一种对骆驼乳掺伪其他乳蛋白(绵羊、山羊、牛、水牛、牦牛、驴和马)的特异性酶联免疫分析方法。牛β-酪蛋... 骆驼乳作为一种常见的特种乳品价格远高于其他乳品而口感却较难区分,因此掺伪现象屡见不鲜。为监控市售骆驼乳的掺伪情况,建立了一种对骆驼乳掺伪其他乳蛋白(绵羊、山羊、牛、水牛、牦牛、驴和马)的特异性酶联免疫分析方法。牛β-酪蛋白占牛总蛋白的比率较为稳定,是一种对骆驼乳进行掺伪定量的良好靶标。以牛β-酪蛋白作为免疫原,制备了区分骆驼乳和其他常见乳源的单克隆抗体,并建立了乳蛋白的竞争免疫检测方法。使用牛乳总蛋白作为标准品的IC50为2.9μg/mL,骆驼乳和骆驼乳粉中牛乳蛋白的检出限分别为2.4 mg/kg和2.6 mg/kg。方法的添加回收率和相对标准偏差分别为96%~109%和8.0%~9.0%,表现出良好的准确性和稳定性。 展开更多
关键词 掺伪 单克隆抗体 免疫分析 牛β-酪蛋白
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基于衍生化3-氨基-2-恶唑烷酮的夹心酶联免疫分析 被引量:2
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作者 张世伟 吴会玲 +6 位作者 周迎春 王炳志 杨星星 杜业刚 汤璐 冯荣虎 郭继平 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第6期271-276,共6页
建立一种3-氨基-2-恶唑烷酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)夹心免疫检测方法。通过1,6-己二醇连接2-硝基-4-羧基苯甲醛和生物素合成针对AOZ的新型衍生试剂。在样品前处理时加入衍生试剂可对AOZ进行衍生,衍生产率为89%。在酶标板上包被抗... 建立一种3-氨基-2-恶唑烷酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)夹心免疫检测方法。通过1,6-己二醇连接2-硝基-4-羧基苯甲醛和生物素合成针对AOZ的新型衍生试剂。在样品前处理时加入衍生试剂可对AOZ进行衍生,衍生产率为89%。在酶标板上包被抗AOZ单克隆抗体并以辣根过氧化物酶标记的亲和素或抗生物素抗体作为第二结合物可实现AOZ的夹心酶联免疫吸附检测(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)。从实际应用的角度,得到双抗夹心和抗体-亲和素夹心模式下两个表位的极限距离,分别为12Å和13Å,理想距离分别为16Å和17Å。在双抗夹心和抗体-亲和素夹心模式下的检出限分别达到1.8 pg/mL和0.8 pg/mL(以AOZ质量浓度计),相对于竞争ELISA,其灵敏度最高提高了25倍。平均回收率为73%~85%,平均相对标准偏差为9.0%。 展开更多
关键词 3-氨基-2-恶唑烷酮 夹心免疫分析 表位间隔距离 辣根过氧化物标记亲和素
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莫米松糠酸酯高特异性抗体制备及酶联免疫分析方法 被引量:1
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作者 谢桂勉 黄莹星 +1 位作者 林俊虹 张世伟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期126-131,共6页
莫米松糠酸酯(mometasone furoate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate,MDF),合成了免疫... 莫米松糠酸酯(mometasone furoate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate,MDF),合成了免疫半抗原和包被半抗原。免疫半抗原以活泼脂法连接钥孔血蓝蛋白获得全抗原,通过免疫小鼠、细胞融合及筛选获得能够稳定分泌抗MF单克隆抗体的细胞株,制备并纯化了抗体。该抗体的主要识别区域为MF的五元环区域,因此不和常见的64种糖皮质激素发生交叉反应。建立了基于异源包被的MF间接竞争酶联免疫检测法,其半抑制浓度(IC_(50))为1.2 ng/mL,对肌肉和肝脏的最低检出限分别为0.52μg/kg和0.59μg/kg。灵敏度相比于同源包被提升了20倍。使用60%甲醇水溶液提取动物组织的添加回收率为70%~82%。该方法能有效应用于动物组织中MF的快速筛查。 展开更多
关键词 糖皮质激素 莫米松糠酸酯 单克隆抗体 异源包被 间接竞争免疫检测法(ic-ELISA)
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基于特异性对硫磷单克隆抗体的间接竞争酶联免疫吸附分析方法建立 被引量:2
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作者 吕丽兰 张娅 +7 位作者 邹承武 甘志勇 吴静娜 李乾坤 吕玉莲 易国强 温绍聪 何丽珊 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期1193-1200,共8页
【目的】制备特异性识别对硫磷(PA)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA),为实现对硫磷的农残快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酸酯基)苯甲酸为半抗原,分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(... 【目的】制备特异性识别对硫磷(PA)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA),为实现对硫磷的农残快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酸酯基)苯甲酸为半抗原,分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备人工抗原,免疫7周龄Balb/c雌性小鼠,取抗血清效价最高、特异性最优小鼠的脾脏细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,采用间接酶联免疫方法(i-ELISA)及ic-ELISA分别评价融合细胞株的阳性和特异性,通过有限稀释法筛选稳定分泌对硫磷抗体的单克隆细胞株。再通过棋盘格试验筛选出抗原抗体最佳工作浓度组合建立对硫磷ic-ELISA标准曲线,并基于对硫磷单克隆抗体与各结构类似物的交叉反应率,评估ic-ELISA的特异性。采购西红柿样品进行对硫磷的添加回收试验,运用气相色谱法(GC)验证ic-ELISA的准确性。【结果】成功合成对硫磷人工抗原PA-BSA和PA-OVA,经5次免疫后融合小鼠的血清效价为8×103;通过有限稀释法筛选获得灵敏度高、特异性最强的对硫磷单克隆细胞株4F11A10。以2μg/mL包被抗原PA-OVA、0.25μg/mL细胞株4F11A10分泌抗体为最佳抗原抗体工作浓度组合,建立对硫磷ic-ELISA及其标准曲线,其半抑制浓度(IC50)为50 ng/mL,检测范围(IC20~IC80)为2.34~300 ng/mL;所建立的对硫磷ic-ELISA与5种有机磷农药(丙溴磷、杀扑磷、倍硫磷、水胺硫磷和甲拌磷)均无交叉反应。对比ic-ELISA和GC测定西红柿样品中对硫磷的添加回收试验结果,发现ic-ELISA的添加回收率为84.86%~100.27%,GC的添加回收率为97.60%~106.40%,两种方法的检测结果一致性较好。【结论】建立的ic-ELISA可用于快速检测蔬菜、水果等农产品中的对硫磷残留。 展开更多
关键词 对硫磷 间接竞争免疫吸附分析方法(ic-ELISA) 单克隆抗体 气相色谱法(GC)
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吡虫啉单克隆抗体的制备及其间接竞争化学发光酶联免疫分析方法的建立 被引量:2
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作者 谢波 柳心梅 +3 位作者 卢迪莎 程勇健 罗林 肖治理 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1474-1481,共8页
以吡虫啉原药和3-巯基丙酸为原料,合成了吡虫啉半抗原,通过活泼酯法将其与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联制备得到完全抗原,经免疫Balb/c雌性小鼠并与骨髓瘤细胞融合获得吡虫啉单克隆抗体,建立了用于吡虫啉检测的间... 以吡虫啉原药和3-巯基丙酸为原料,合成了吡虫啉半抗原,通过活泼酯法将其与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联制备得到完全抗原,经免疫Balb/c雌性小鼠并与骨髓瘤细胞融合获得吡虫啉单克隆抗体,建立了用于吡虫啉检测的间接竞争化学发光酶联免疫分析方法(ic-CLEIA)。优化了方法的包被原稀释倍数、抗体稀释倍数、缓冲液种类、缓冲液的pH值、一抗竞争反应时间、酶标二抗稀释倍数等条件,最适条件为:包被原质量浓度62.50 ng/mL(稀释16000倍),抗体质量浓度103.12 ng/mL(稀释64000倍),缓冲液PBS(pH 7.4),抗原与抗体竞争反应时间30 min,酶标二抗稀释倍数1∶7000。结果表明,在最适条件下该方法的检出限(IC_(10))为0.03 ng/mL,IC_(50)为0.57 ng/mL,线性检测范围(IC_(20)~IC_(80))为0.083~3.99 ng/mL。与氯噻啉的交叉反应率为2.2%,与噻虫胺、呋虫胺、啶虫脒、噻虫啉、噻虫嗪5种吡虫啉结构类似物无明显交叉反应。对黄瓜和苹果样品的加标回收率为82.0%~112%,相对标准偏差小于15%。实际样品检测结果与HPLC仪器方法相关性良好(r^(2)=0.989)。结果表明,所建立的ic-CLEIA方法具有特异性强、灵敏度高的特点,可用于食品中吡虫啉残留的快速检测。 展开更多
关键词 吡虫啉 单克隆抗体 间接竞争化学发光免疫分析
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间接竞争酶联免疫吸附分析法测定土壤和面粉中的异丙隆 被引量:8
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作者 吴春菊 李方实 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期1080-1084,共5页
采用自制的抗异丙隆多克隆抗体建立了测定异丙隆残留的间接竞争酶联免疫分析方法,优化的包被抗原和抗体的浓度分别为0.1和0.016mg·L-1。结果表明,6种常用的与异丙隆结构相似的脲类除草剂的交叉反应都小于0.6%,标准曲线的线性范围为... 采用自制的抗异丙隆多克隆抗体建立了测定异丙隆残留的间接竞争酶联免疫分析方法,优化的包被抗原和抗体的浓度分别为0.1和0.016mg·L-1。结果表明,6种常用的与异丙隆结构相似的脲类除草剂的交叉反应都小于0.6%,标准曲线的线性范围为3.42~121.33ng·mL-1,线性相关系数r2=0.9410,方法的检测限为3.42ng·mL-1。利用建立的间接竞争ELISA方法检测土壤和面粉样品中的异丙隆,测得土壤中异丙隆的加标回收率为100%~108%,变异系数为3%~6%;面粉中异丙隆的加标回收率为81%~84%,变异系数为5%~7%。 展开更多
关键词 免疫吸附分析法(ELISA) 异丙隆 土壤 面粉 测定
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大型溞胆碱酯酶间接非竞争酶联免疫吸附定量分析法的建立 被引量:2
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作者 刘洪翠 杨艳霞 李少南 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期347-354,共8页
用达到电泳纯的大型溞(Daphnia magna)胆碱酯酶(cholinesterase,ChE)免疫BALB/c小鼠,得到效价达1∶8 000的鼠抗大型溞ChE多克隆抗血清;通过优化抗原抗体反应条件,建立定量分析大型溞ChE含量的间接非竞争酶联免疫吸附法(indirect and non... 用达到电泳纯的大型溞(Daphnia magna)胆碱酯酶(cholinesterase,ChE)免疫BALB/c小鼠,得到效价达1∶8 000的鼠抗大型溞ChE多克隆抗血清;通过优化抗原抗体反应条件,建立定量分析大型溞ChE含量的间接非竞争酶联免疫吸附法(indirect and non-competitive enzyme-linked immunosorbentassay)。结果表明:此方法检测灵敏度为24ng.mL-1;经免疫交叉反应鉴定,所获抗血清与5、10μg.mL-1标准蛋白质和其他生物如花翅摇蚊、尖额溞、斑马鱼(脑、脑除外的整体)、家蚕、意大利蜜蜂、赤子爱胜蚯蚓、非洲爪蟾(蝌蚪)等来源的ChE交叉反应率分别为:<0.25%、<0.25%、2.13%、10.19%、3.88%、3.56%、2.81%、3.93%、5.00%和2.75%,具较高的特异性。说明用本试验得到的抗血清建立的间接非竞争酶联免疫吸附法可用于大型溞体内ChE含量的测定,以利于在农药暴露环境下大型溞体内ChE活性的精确检测。 展开更多
关键词 大型溞 间接竞争免疫吸附法 胆碱酯免疫含量
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驼源莠去津多克隆抗体的制备及间接竞争酶联免疫吸附分析方法的建立 被引量:2
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作者 齐萌 周惠 +1 位作者 霍静倩 张金林 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期43-50,共8页
为构建莠去津的快速监测技术,本试验通过美洲驼免疫,成功建立了基于美洲驼多克隆抗体的莠去津的酶联免疫检测方法,通过棋盘法确定了最佳包被抗原和抗血清稀释倍数,对影响反应的关键因素进行了优化,并进行了交叉反应性试验和添加回收试... 为构建莠去津的快速监测技术,本试验通过美洲驼免疫,成功建立了基于美洲驼多克隆抗体的莠去津的酶联免疫检测方法,通过棋盘法确定了最佳包被抗原和抗血清稀释倍数,对影响反应的关键因素进行了优化,并进行了交叉反应性试验和添加回收试验。结果表明:通过优化反应体系,确定最优NaCl浓度为0.2 mol/L,最优甲醇浓度为5%,最佳缓冲液pH值为7.4,在最优条件下,间接竞争酶联免疫分析法的IC_(50)为12.13 ng/mL;同时利用其他3种三氮苯类除草剂及常见环境代谢物进行了多克隆抗体的特异性试验,其对特丁津、西玛津和对去异丙基莠去津的交叉反应率较高,其他化合物交叉反应率较低;取河流水进行了实际样品的添加回收试验,试验结果与LC-MS比对,添加回收率在90.1%~114.2%之间,说明驼源多克隆抗体的莠去津间接竞争酶联免疫吸附分析方法可用于检测环境实际样品。 展开更多
关键词 莠去津 骆驼免疫 多克隆抗体 免疫分析
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基于酶联免疫分析方法检测畜禽饲料中恩拉霉素 被引量:1
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作者 蔡永辉 王康 +1 位作者 陈敏 王冰清 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期571-576,共6页
本文建立了一种应用于检测畜禽饲料中恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法。采用羰基二咪唑法将生物活性高的恩拉霉素A组分合成的半抗原偶联卵清蛋白,构建检测原;同时将杂交瘤细胞株2H1F91免疫BALB/c小鼠,制备特异性识别恩拉霉素的单克隆... 本文建立了一种应用于检测畜禽饲料中恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法。采用羰基二咪唑法将生物活性高的恩拉霉素A组分合成的半抗原偶联卵清蛋白,构建检测原;同时将杂交瘤细胞株2H1F91免疫BALB/c小鼠,制备特异性识别恩拉霉素的单克隆抗体。在此基础上,构建了恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法的标准曲线,该曲线IC_(50)为91.61ng/mL,线性范围为25.73~471.39ng/mL,检出限为13.11ng/mL。猪饲料样品的添加回收率为91.60%~95.75%,鸡饲料的添加回收率为89.33%~94.80%,并且二者的变异系数均低于12%,这表明建立的方法结果可靠,适用于畜禽饲料中恩拉霉素含量的快速检测。 展开更多
关键词 恩拉霉素 单克隆抗体 间接竞争免疫吸附分析 猪饲料 鸡饲料
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雌二醇间接竞争酶联免疫吸附方法的建立 被引量:7
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作者 刘珒 雷红涛 +5 位作者 孙远明 李振峰 杨金易 沈玉栋 王弘 曾道平 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第8期146-150,共5页
建立食品中雌二醇免疫分析方法。将雌二醇进行结构改造合成半抗原并经过核磁氢谱和红外光谱验证,再采用活泼酯法与载体BSA和OVA偶联制备人工抗原,免疫兔子制备多克隆抗体,经过反应条件优化建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法。结果表明:I... 建立食品中雌二醇免疫分析方法。将雌二醇进行结构改造合成半抗原并经过核磁氢谱和红外光谱验证,再采用活泼酯法与载体BSA和OVA偶联制备人工抗原,免疫兔子制备多克隆抗体,经过反应条件优化建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法。结果表明:IC_(50)为3.9ng/mL,检测限为0.3ng/mL,交叉反应率均小于1.21%。检测方法具有高灵敏度和特异性,可应用于食品中雌二醇检测试剂盒的研制。 展开更多
关键词 雌二醇 抗体 间接竞争免疫检测
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以赭曲霉毒素A单克隆抗体建立竞争酶联免疫吸附分析方法的研究 被引量:19
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作者 刘仁荣 余宙 +1 位作者 何庆华 许杨 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第11期174-177,共4页
本研究通过活性酯法合成赭曲霉毒素A人工抗原,免疫小鼠制备单克隆抗体,在此基础上建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200~6000pg/ml,检测下限为150pg/ml。单抗与赭曲霉毒素B的交叉反应率为35%,与桔霉素、黄曲霉毒素B1和展青霉素等毒... 本研究通过活性酯法合成赭曲霉毒素A人工抗原,免疫小鼠制备单克隆抗体,在此基础上建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200~6000pg/ml,检测下限为150pg/ml。单抗与赭曲霉毒素B的交叉反应率为35%,与桔霉素、黄曲霉毒素B1和展青霉素等毒素交叉反应低于0.01%。在小麦样品中的加标回收率为83%~116%,变异系数为9.4%~19.8%。测试23份样品,赭曲霉毒素A的含量在0.6~2.56μg/kg之间。 展开更多
关键词 赭曲霉毒素A 人工抗原 单克隆抗体 免疫吸附分析方法
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直接竞争酶联免疫吸附分析法测定桃中氰戊菊酯的残留量 被引量:10
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作者 曾俊源 崔巧利 刘曙照 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期61-65,共5页
采用包被抗体、酶标半抗原直接竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定了氰戊菊酯在桃中的残留量。结果表明:在氰戊菊酯多克隆抗体包被浓度为4.0mg/L、辣根过氧化物酶(HRP)标记氰戊菊酯半抗原稀释1.0×10^5倍条件下,ELISA法检... 采用包被抗体、酶标半抗原直接竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定了氰戊菊酯在桃中的残留量。结果表明:在氰戊菊酯多克隆抗体包被浓度为4.0mg/L、辣根过氧化物酶(HRP)标记氰戊菊酯半抗原稀释1.0×10^5倍条件下,ELISA法检测氰戊菊酯的线性浓度范围为0.01-10mg/L,氰戊菊酯对抗体.酶标半抗原反应的抑制中浓度(IC50)为193μg/L,相对标准偏差(RSD,n=5)为4.5%,IC20为13.5μg/L。在2、0.2和0.05mg/kg添加水平下,ELISA法测定桃中氰戊菊酯的回收率分别为81%-89%、85%~98%和85%-106%,RSD(n=5)分别为5.1%、5.6%和7.7%。ELISA法对桃中氰戊菊酯的最低检出浓度为0.014mg/kg。 展开更多
关键词 氰戊菊酯 直接竞争免疫吸附分析 高效液相色谱 残留
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间接免疫荧光法与酶联免疫吸附试验检测抗核抗体对比分析 被引量:7
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作者 夏勇 李齐光 +1 位作者 唐希才 邱志超 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第13期2449-2451,共3页
目的:应用间接免疫荧光法(indirect immunofluoreseent assay,IF)与酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测临床疑似自身免疫疾病患者血清抗核抗体并进行相关性及对比分析。方法:IF法按说明书操作,在荧光显微镜... 目的:应用间接免疫荧光法(indirect immunofluoreseent assay,IF)与酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测临床疑似自身免疫疾病患者血清抗核抗体并进行相关性及对比分析。方法:IF法按说明书操作,在荧光显微镜下观察到特异的荧光核型为阳性;ELISA法按说明书操作,浓度≥18U/mL为阳性,12~18U/mL为可疑,≤12U/mL为阴性。结果:检测临床疑似自身免疫患者血清138份,IF法阳性50份,阴性88份,阳性率36.23%,ELISA法阳性78份,阴性60份,阳性率56.52%。经卡方检验P<0.01。其中IF法样本血清稀释倍数与ELISA法检测浓度的Spearman相关系数为0.499。结论:两种方法检测抗核抗体差异有显著性,ELISA法敏感度明显高于IF法。同时,IF法样本血清抗核抗体血清稀释倍数与ELISA法的浓度呈一定相关性。 展开更多
关键词 抗核抗体 间接免疫荧光法 免疫吸附试验
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直接竞争酶联免疫吸附分析法测定甘蔗中的克百威残留 被引量:6
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作者 刘腾飞 刘曙照 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期289-293,共5页
采用包被抗体直接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定了甘蔗中的克百威残留量。在优化条件下,对克百威标样检测的线性范围为0.0001~1mg/L,抑制中浓度(IC50)=3.09μg/L,5次重复测定的相对标准偏差(RSD)为9.3%,IC20值为0.085μg/L。甘蔗... 采用包被抗体直接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定了甘蔗中的克百威残留量。在优化条件下,对克百威标样检测的线性范围为0.0001~1mg/L,抑制中浓度(IC50)=3.09μg/L,5次重复测定的相对标准偏差(RSD)为9.3%,IC20值为0.085μg/L。甘蔗中分别添加克百威标样1,0.1,0.01mg/kg,直接竞争ELISA法测定的回收率分别为86.3%~99.1%,89.0%~101%和70.7%~90.6%,RSD(n=5)分别为5.4%,5.2%和10.7%。ELISA法对甘蔗中克百威残留的最小检出量为6.3×10-11g,定量限可达1.26μg/kg。而同样前处理条件下高效液相色谱-紫外检测器(HPLC-UV)法对克百威的最小检出量为5×10-8g,检测甘蔗中克百威残留的定量限仅为2.5mg/kg。 展开更多
关键词 直接竞争免疫吸附分析 甘蔗 克百威 残留量 高效液相色谱
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间接竞争酶联免疫吸附法检测蜂王浆中链霉素 被引量:3
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作者 国占宝 赵亚周 +2 位作者 武玉香 柳家鹏 彭文君 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第16期206-209,共4页
目的:基于定量检测蜂王浆中链霉素的残留量,建立快速检测蜂王浆中链霉素的间接竞争酶联免疫吸附方法。方法:采用制备链霉素人工抗原、筛选杂交瘤细胞、利用体内诱生腹水法制备抗链霉素单克隆抗体。结果:Logit/Log拟合标准曲线为y=-2.1x+... 目的:基于定量检测蜂王浆中链霉素的残留量,建立快速检测蜂王浆中链霉素的间接竞争酶联免疫吸附方法。方法:采用制备链霉素人工抗原、筛选杂交瘤细胞、利用体内诱生腹水法制备抗链霉素单克隆抗体。结果:Logit/Log拟合标准曲线为y=-2.1x+0.8,相关系数r=0.9943,线性检测范围为4~324μg/kg,半数抑制浓度(IC50)为79μg/kg,检测限为4μg/kg,灵敏度为0.1μg/kg,蜂王浆样品的检测值符合率大于90%;采用方法二的样品前处理方法,链霉素阴性样品的添加回收率为67.7%~86.7%,样品重复检测结果的变异系数为4.3%~5.6%。结论:建立的间接竞争酶联免疫吸附法具有较好的特异性、检测符合率、回收率和重复稳定性,可用于蜂王浆中链霉素残留的检测。 展开更多
关键词 蜂王浆 链霉素 单克隆抗体 竞争免疫
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生物素间接竞争酶联免疫方法的建立 被引量:1
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作者 葛文亮 胥传来 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1045-1050,共6页
利用不同方法合成的生物素免疫原免疫小鼠,利用所得到的单克隆抗体建立针对生物素的间接竞争酶联吸附测定方法。所建立的间接竞争酶联吸附测定方法对生物素具有良好的特异性与较高的灵敏度,其对生物素半抑制率质量浓度为2.01 ng/m L,最... 利用不同方法合成的生物素免疫原免疫小鼠,利用所得到的单克隆抗体建立针对生物素的间接竞争酶联吸附测定方法。所建立的间接竞争酶联吸附测定方法对生物素具有良好的特异性与较高的灵敏度,其对生物素半抑制率质量浓度为2.01 ng/m L,最低检测限为0.32 ng/m L,并且对液态奶、奶粉等样品中的生物素含量具有准确的检出性。与国标相比,所建立的间接竞争酶联吸附测定方法具有结果稳定,操作方便和高灵敏度高特异性等优点,对实际样品的检测具有重要意义。 展开更多
关键词 乳制品 生物素 间接竞争吸附测定法
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呋喃它酮代谢物单链抗体制备和酶联免疫分析方法 被引量:6
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作者 杨武英 王弘 +6 位作者 洪艳平 王丹 徐振林 沈玉栋 柯法钧 陈薪竹 孙远明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第24期251-258,共8页
从呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮(5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞中克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因,通过(G1y4Ser)3连接肽采用重叠延伸聚合酶链式反应技术构建单链... 从呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮(5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞中克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因,通过(G1y4Ser)3连接肽采用重叠延伸聚合酶链式反应技术构建单链抗体基因,pET-22b(+)表达载体进行表达,Ni亲和柱进行纯化,制备得到抗AMOZ衍生物单链抗体,采用棋盘滴定实验优化包被原包被浓度和单链抗体稀释度,建立基于此单链抗体的AMOZ残留间接竞争酶联免疫分析方法并对方法进行评价。结果表明:最佳包被抗原质量浓度和单链抗体稀释度分别为0.0625μg/mL和20倍;建立的间接竞争酶联免疫分析方法半抑制浓度为8.65μg/L,线性范围为2.90~53.28μg/L,检测限为1.48μg/L;除与原药呋喃它酮有交叉反应外,此单链抗体与其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物交叉反应率均小于0.1%,虾肉样品添加回收率为74.3%~86.6%;用高效液相色谱-串联质谱法对免疫测定结果进行确证实验,两种方法相关性良好(R^2=0.9992),说明建立的间接竞争酶联免疫分析方法可用于虾类等水产品中AMOZ残留的快速筛查。 展开更多
关键词 呋喃它酮 呋喃它酮代谢物 单链抗体 间接竞争酶联免疫分析
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