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吡虫啉单克隆抗体的制备及其间接竞争化学发光酶联免疫分析方法的建立 被引量：2
1
作者 谢波 柳心梅 +3 位作者 卢迪莎 程勇健 罗林 肖治理 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1474-1481,共8页
以吡虫啉原药和3-巯基丙酸为原料,合成了吡虫啉半抗原,通过活泼酯法将其与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联制备得到完全抗原,经免疫Balb/c雌性小鼠并与骨髓瘤细胞融合获得吡虫啉单克隆抗体,建立了用于吡虫啉检测的间... 以吡虫啉原药和3-巯基丙酸为原料,合成了吡虫啉半抗原,通过活泼酯法将其与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联制备得到完全抗原,经免疫Balb/c雌性小鼠并与骨髓瘤细胞融合获得吡虫啉单克隆抗体,建立了用于吡虫啉检测的间接竞争化学发光酶联免疫分析方法(ic-CLEIA)。优化了方法的包被原稀释倍数、抗体稀释倍数、缓冲液种类、缓冲液的pH值、一抗竞争反应时间、酶标二抗稀释倍数等条件,最适条件为:包被原质量浓度62.50 ng/mL(稀释16000倍),抗体质量浓度103.12 ng/mL(稀释64000倍),缓冲液PBS(pH 7.4),抗原与抗体竞争反应时间30 min,酶标二抗稀释倍数1∶7000。结果表明,在最适条件下该方法的检出限(IC_(10))为0.03 ng/mL,IC_(50)为0.57 ng/mL,线性检测范围(IC_(20)~IC_(80))为0.083~3.99 ng/mL。与氯噻啉的交叉反应率为2.2%,与噻虫胺、呋虫胺、啶虫脒、噻虫啉、噻虫嗪5种吡虫啉结构类似物无明显交叉反应。对黄瓜和苹果样品的加标回收率为82.0%~112%,相对标准偏差小于15%。实际样品检测结果与HPLC仪器方法相关性良好(r^(2)=0.989)。结果表明,所建立的ic-CLEIA方法具有特异性强、灵敏度高的特点,可用于食品中吡虫啉残留的快速检测。 展开更多
关键词 吡虫啉 单克隆抗体 间接竞争化学发光酶联免疫分析
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沙拉沙星间接竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立
2
作者 李思 蒋蔚 +5 位作者 程婷婷 卢春慧 辛思培 曹敬政 王权 孙卫东 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第5期1772-1783,共12页
为建立动物源性食品中沙拉沙星(SAR)残留的快速检测方法,本试验通过对盐酸沙拉沙星进行分子改造和偶联蛋白合成完全免疫原,免疫小鼠制备SAR单克隆抗体。通过棋盘法确定最佳包被原浓度及一抗稀释度,优化确定最佳反应条件,从而建立间接竞... 为建立动物源性食品中沙拉沙星(SAR)残留的快速检测方法,本试验通过对盐酸沙拉沙星进行分子改造和偶联蛋白合成完全免疫原,免疫小鼠制备SAR单克隆抗体。通过棋盘法确定最佳包被原浓度及一抗稀释度,优化确定最佳反应条件,从而建立间接竞争化学发光酶联免疫(ic-CLEIA)检测方法,并通过灵敏度、精密度、交叉反应率、添加回收试验对该方法进行评价。紫外扫描结果显示,完全免疫原偶联成功;制备的SAR单克隆抗体效价达1∶4×106;包被原浓度为0.25μg/mL,抗体稀释比为1∶750000,4℃包被过夜,5%脱脂乳封闭,竞争孵育1 h,酶标二抗稀释比为1∶10000,孵育1 h为ic-CLEIA最佳反应条件;建立的ic-CLEIA方法标准曲线呈线性,线性范围为0.0625~10 ng/mL,R2=0.995,灵敏度IC50为1.45 ng/mL;其平均批内和批间变异系数均<10%;除与二氟沙星的交叉反应率达到98.08%以外,与其他氟喹诺酮类药物的交叉反应率均<8%,与其他非氟喹诺酮类药物均无交叉反应;SAR标准溶液的最低检测限(LOD)为0.32 ng/mL,SAR在鸡肉样品中的LOD为0.46μg/kg;添加回收率在88.3%~106.7%范围内,其变异系数≤12.2%。结果表明,本研究建立的ic-CLEIA方法检测速度快、灵敏度高,适用于动物源性食品中SAR残留的大量检测,为SAR残留检测提供了新的方法。 展开更多
关键词 沙拉沙星 单克隆抗体 间接竞争化学发光酶联免疫 残留检测
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间接竞争化学发光酶联免疫分析方法检测禽肉中金刚烷胺和氯霉素残留 被引量：22
3
作者 许小炫 苏晓娜 +6 位作者 谭庶 钟翠丽 曾道平 张燕 徐振林 王序 杨金易 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第4期305-312,共8页
为快速检测禽肉中残留的金刚烷胺和氯霉素,结合高效的前处理方法,建立检测金刚烷胺和氯霉素的间接竞争化学发光酶联免疫分析方法(indirect competitive chemiluminescence enzyme-linked immunosorbent assay,ic-CLEIA)。对包被原与抗... 为快速检测禽肉中残留的金刚烷胺和氯霉素,结合高效的前处理方法,建立检测金刚烷胺和氯霉素的间接竞争化学发光酶联免疫分析方法(indirect competitive chemiluminescence enzyme-linked immunosorbent assay,ic-CLEIA)。对包被原与抗体的最佳稀释倍数、竞争时间、酶标二抗稀释倍数进行优化。结果表明:金刚烷胺的IC50为0.33μg/L,线性范围为0.06~1.77μg/L;氯霉素的IC50为0.039μg/L,线性范围为0.010~0.179μg/L。样品经乙酸乙酯和碳酸钾溶液提取后,取上清液用氮气吹干,净化后进行检测。金刚烷胺和氯霉素的加标回收率分别为92.55%~105.14%和92.00%~112.50%,变异系数均低于10.48%,且实际样品检测结果与仪器方法相关性良好(R2>0.98),表明建立的ic-CLEIA方法具有良好的准确度和可靠性。该方法将为涉及多种药物残留的免疫快速检测方法及相应的前处理技术提供技术依据。 展开更多
关键词 禽肉 金刚烷胺 氯霉素 化学发光酶联免疫 前处理
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猪伪狂犬病病毒gB抗体竞争酶联免疫检测方法的建立
4
作者 刘梅芬 马震原 +9 位作者 王淑娟 闫若潜 班付国 赵雪丽 谢彩华 王东方 柴茂 刘影 杨海波 王翠 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期141-147,共7页
为建立猪伪狂犬病病毒gB抗体竞争酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的gB蛋白为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗gB蛋白单克隆抗体为酶标抗体,经各反应条件的优化,成功建立了PRV gB抗体的竞争酶联免疫检测方法,并对该方法的... 为建立猪伪狂犬病病毒gB抗体竞争酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的gB蛋白为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗gB蛋白单克隆抗体为酶标抗体,经各反应条件的优化,成功建立了PRV gB抗体的竞争酶联免疫检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了评估。PRV gB抗体竞争酶联免疫检测方法经优化后的最佳条件为:gB蛋白的最佳包被浓度为0.25μg/mL、包被量100μL/孔,酶标抗体的最佳稀释浓度为1∶1000,样品检测时间为30 min(抗原抗体反应)+15 min(底物显色);敏感性结果显示,PRV gB标准阳性血清(Z89)经1∶512稀释后经检测仍为阳性;特异性结果显示,猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、大肠杆菌抗体阳性血清的检测结果均为阴性;批内、批间重复试验结果显示,批内、批间变异系数分别为0.24%~9.45%、0.58%~11.61%,均小于12%。通过对采集的184份临床血清检测结果进行比较,该方法与商品化试剂盒的阳性符合率为96.23%,阴性符合率为96.95%,总符合率96.74%。本研究在国内首次建立PRV gB竞争酶联免疫检测方法,为PRV gB抗体快速检测提供了可靠的技术手段。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 gB蛋白 竞争酶联免疫
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呋喃唑酮代谢物间接竞争化学发光酶免疫法的建立 被引量：1
5
作者 黄登宇 高文静 +3 位作者 黄种乾 高丽霞 冯敏 杨秀松 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期294-299,共6页
建立快速检测动物源性食品中呋喃唑酮代谢物AOZ的间接竞争化学发光酶免疫法。利用对醛基苯甲酸(4-CBA)将AOZ衍生化为CPAOZ,利用活化酯法将CPAOZ与卵清蛋白(OVA)偶联,生成完全抗原CPAOZ-OVA。对包被原与抗体的最佳稀释倍数、封闭液浓度... 建立快速检测动物源性食品中呋喃唑酮代谢物AOZ的间接竞争化学发光酶免疫法。利用对醛基苯甲酸(4-CBA)将AOZ衍生化为CPAOZ,利用活化酯法将CPAOZ与卵清蛋白(OVA)偶联,生成完全抗原CPAOZ-OVA。对包被原与抗体的最佳稀释倍数、封闭液浓度、竞争时间、酶标二抗稀释倍数进行优化,建立标准曲线,同时对方法的特异性进行评价。结果表明:包被抗原最佳稀释倍数为2000倍,抗体的最佳稀释倍数为20000倍、封闭液为2%脱脂乳粉、竞争时间为2 h、二抗最佳稀释倍数为4000倍;线性范围是0.075~7.396 ng/m L,半抑制浓度IC_(50)为0.74 ng/m L,对呋喃唑酮原药的交叉反应率为23.4%,与其他结构类似物及衍生化试剂的交叉反应率均小于0.1%。该方法灵敏度高、特异性好,可为监管部门对于快速检测动物源性食品中AOZ提供依据。 展开更多
关键词 呋喃唑酮 间接竞争化学发光酶免疫法 动物源性食品 快速检测
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纳米抗体多聚化测略提升间接竞争性酶联免疫吸附实验检测黄曲霉毒素M_(1)的灵敏度 被引量：2
6
作者 刘颖达 刘海媛 +5 位作者 苏娜 李庆辉 刘佳 TUYATSETSEG Jambel 伊丽 吉日木图 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第18期291-299,共9页
酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容... 酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容易变性,贮存期短,易受到检测环境中其他物质干扰而造成假阳性或假阴性等。该实验使用实验室前期获得的抗黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))纳米抗体(nanobody-M4,Nb-M4)与C4结合蛋白(recombinant C4 binding protein alpha,C4BPa)C端片段融合形成自组装七聚体融合蛋白(Nb-M4-C4 bpα),并基于该七聚体开发应用于乳制品中AFM_(1)的间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)。在最佳实验参数下,AFM_(1)的IC_(50)为0.038 ng/mL,检测限为0.009 ng/mL,较单体Nb-M4的提高了8.63倍和5.56倍。与AFM_(1)类似物和其他常见真菌毒素的交叉反应可忽略不计,且在加标乳样中获得了良好的回收率和可重复性。此外,将所开发的方法应用于实际样品中AFM_(1)的分析,结果与HPLC的结果具有很好的相关性(R^(2)=0.995)。该研究表明,自组装的七聚化纳米抗体是改善亲和力和信号放大的有效策略,今后可用于灵敏、选择性和快速检测食品中的霉菌毒素和其他小分子污染物。 展开更多
关键词 竞争性酶联免疫吸附实验 纳米抗体 多聚化 灵敏度增强方法
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猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立 被引量：14
7
作者 马震原 王淑娟 +5 位作者 闫若潜 班付国 赵雪丽 谢彩华 王华俊 王东方 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期574-583,共10页
为了建立一种快速定量检测猪伪狂犬病病毒(PRV)gB蛋白抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的抗gB蛋白单克隆抗体作为酶标抗体,以国家参考品稀释制备... 为了建立一种快速定量检测猪伪狂犬病病毒(PRV)gB蛋白抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的抗gB蛋白单克隆抗体作为酶标抗体,以国家参考品稀释制备的校准品绘制标准曲线实现定量检测,成功建立的PRV-gB-CLEIA在45 min内即可完成检测,可检测到最大稀释倍数为1∶2 048稀释的国家参考品;与猪瘟等其他5种病毒抗原的标准阳性血清无交叉反应;批内变异系数为1.13%~9.47%,批间变异系数为2.43%~14.07%,重复性和稳定性较好。通过对采集的180份临床血清检测结果进行比较,该方法与中和试验阳性符合率为94.00%,阴性符合率为96.92%,总符合率为96.11%,明显优于商品化ELISA试剂盒。本研究建立的PRV-gB-CLEIA检测方法可以用于PRV gB抗体的快速定量检测。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 gB蛋白 竞争化学发光酶联免疫 定量
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化学发光酶联免疫法检测苏丹红Ⅰ 被引量：15
8
作者 范艳 孟玮 +4 位作者 朱立鑫 刘仁荣 许龙 裘雪梅 杨帆帆 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第12期209-212,共4页
为检测食品中苏丹红Ⅰ残留,建立间接竞争化学发光酶联免疫分析(chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA)法。通过优化包被抗原中本抗原与载体物质的量比、包被抗原质量浓度、抗体稀释比例,建立竞争抑制曲线。线性范围为0.156~5 ng/m... 为检测食品中苏丹红Ⅰ残留,建立间接竞争化学发光酶联免疫分析(chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA)法。通过优化包被抗原中本抗原与载体物质的量比、包被抗原质量浓度、抗体稀释比例,建立竞争抑制曲线。线性范围为0.156~5 ng/m L,最低检测限为0.078 9 ng/m L,IC50为0.679 ng/m L。CLEIA回收率为75.08%~112.18%,变异系数为8.89%~15.61%;通过与酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法进行比较,在相同抗原抗体质量浓度条件下,CLEIA法测定的IC50较ELISA方法降低30%,具有较高的灵敏度。 展开更多
关键词 苏丹红Ⅰ 化学发光酶联免疫分析 酶联免疫吸附分析
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化学发光酶联免疫法检测鱼虾中氯霉素残留 被引量：15
9
作者 高彬文 张素霞 +2 位作者 沈建忠 王战辉 刘金凤 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第5期68-69,共2页
关键词 化学发光分析法 光电检测技术 氯霉素残留 酶联免疫法 鱼虾 放射免疫分析 酶免疫分析 拉曼散射
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直接竞争化学发光酶免疫法检测猪肉中磺胺嘧啶 被引量：8
10
作者 楚金申 许杨 +2 位作者 何庆华 王刘花 卢江 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第10期124-129,共6页
建立一种检测猪肉中磺胺嘧啶的简便、快速、高特异性的直接竞争化学发光酶免疫法。采用改良的过碘酸钠法制备酶标抗体,以辣根过氧化物酶催化鲁米诺-过氧化氢作为化学发光体系。经优化该方法检测条件为:利用柠檬酸缓冲液稀释抗原包被质... 建立一种检测猪肉中磺胺嘧啶的简便、快速、高特异性的直接竞争化学发光酶免疫法。采用改良的过碘酸钠法制备酶标抗体,以辣根过氧化物酶催化鲁米诺-过氧化氢作为化学发光体系。经优化该方法检测条件为:利用柠檬酸缓冲液稀释抗原包被质量浓度为0.8μg/mL,酶标抗体2000倍稀释,竞争反应25min;所建立的方法分析灵敏度为2.96ng/mL,批内变异系数小于8.32%,批间变异系数小于13.4%,以猪肉为样品的分析回收率为75.6%～103.7%,与其他结构类似物未见明显交叉,所建立的标准曲线相关系数为0.9922、检测线性范围为4.14～244ng/mL、检测时间为25min,可在实际生产中应用。 展开更多
关键词 磺胺嘧啶 直接竞争化学发光酶免疫法 辣根过氧化物酶 猪肉
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化学发光免疫分析与酶联免疫分析法检测水产品药物残留的比较研究 被引量：11
11
作者 萨仁托雅 张峰 +1 位作者 郑有虎 卢亚楠 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期486-491,共6页
对检测水产品中呋喃唑酮代谢物（AOZ）和氯霉素（CAP）药物残留的两种方法——化学发光免疫分析（CLEIA）和酶联免疫分析（ELISA）法进行了比较研究。结果表明：两种药物残留检测中,CLEIA分析方法的线性范围和检出限均优于ELISA法,且两... 对检测水产品中呋喃唑酮代谢物（AOZ）和氯霉素（CAP）药物残留的两种方法——化学发光免疫分析（CLEIA）和酶联免疫分析（ELISA）法进行了比较研究。结果表明：两种药物残留检测中,CLEIA分析方法的线性范围和检出限均优于ELISA法,且两种免疫分析法的添加回收率均具有很好的相关性;用CLEIA法检测AOZ的检出限为0.01μg/kg,线性范围为0.01~2.56μg/kg,检测CAP的检出限为0.016μg/kg,线性范围为0.025~6.400μg/kg;用ELISA法检测AOZ的检出限为0.1μg/kg,线性范围为0.10~1.62μg/kg,检测CAP的检出限为0.05μg/kg,线性范围为0.05~4.05μg/kg;用CLEIA法检测CAP的批内变异系数（RSD）为5.5%~11.3%,批间RSD为12.3%~20.9%,检测AOZ的批内RSD为6.6%~11.1%,批间RSD为15.6%~18.3%。研究表明,用CLEIA法检测水产品药物残留较ELISA法检出限低、线性范围宽,虽然检出CAP和AOZ的变异系数均高于ELISA法,但仍符合《兽药残留酶联免疫试剂（盒）备案参考评判标准》的规定。 展开更多
关键词 化学发光免疫分析 酶联免疫分析 氯霉素 呋喃唑酮代谢物
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直接竞争化学发光酶免疫法检测谷物中的伏马菌素B_1 被引量：7
12
作者 何庆华 许杨 刘师文 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第22期173-176,共4页
建立1种检测谷物中伏马菌素B1的直接竞争化学发光酶免疫方法。该方法的最佳检测条件为:抗原包被质量浓度0.4μg/mL,酶标抗体3000倍稀释,竞争反应时间20min;检测限为0.13ng/mL,半抑制浓度(IC50)为1.43ng/mL,批内变异系数2.4%,批间变异系... 建立1种检测谷物中伏马菌素B1的直接竞争化学发光酶免疫方法。该方法的最佳检测条件为:抗原包被质量浓度0.4μg/mL,酶标抗体3000倍稀释,竞争反应时间20min;检测限为0.13ng/mL,半抑制浓度(IC50)为1.43ng/mL,批内变异系数2.4%,批间变异系数9.2%,以玉米为样品的加标回收率达到100.2%～115.4%。谷物盲样的检测结果显示,该方法与酶联免疫吸附检测试剂盒、高效液相色谱检测结果的相关系数分别为0.9793、0.9851,三者之间无显著性差异,所建立的直接竞争化学发光酶免疫方法可用于谷物样品中伏马菌素B1的大规模快速筛查。 展开更多
关键词 伏马菌素B1 化学发光酶免疫分析 直接竞争酶联免疫分析
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直接竞争化学发光酶免疫方法检测克伦特罗残留 被引量：4
13
作者 杨金易 李萍 +4 位作者 雷红涛 王弘 徐振林 孙文佳 孙远明 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期198-202,共5页
摘要建立了克伦特罗的直接竞争化学发光酶免疫检测方法，并考察了方法的特异性、灵敏度。最佳反应条件为：包被抗原浓度为25ng／mL；酶标抗体稀释80000倍；0．02mol／L磷酸盐缓冲液（PBS）（pH7．0），竞争反应时间30min。方法的IC50为0... 摘要建立了克伦特罗的直接竞争化学发光酶免疫检测方法，并考察了方法的特异性、灵敏度。最佳反应条件为：包被抗原浓度为25ng／mL；酶标抗体稀释80000倍；0．02mol／L磷酸盐缓冲液（PBS）（pH7．0），竞争反应时间30min。方法的IC50为0．09ng/mL；检出限为0．01ng／mL；线性范围0．02～7．59ng/mL；对尿样、猪肉、肝脏以及饲料样品检测的平均回收率分别为94．5％-95．3％、90．7％-94．1％，批内和批间相对标准偏差均小于15％。该方法与HPLC方法的相关性良好，说明其具有较高的灵敏度和特异性，可用于实际样品的检测。 展开更多
关键词 克伦特罗 化学发光酶免疫分析 直接竞争
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直接竞争化学发光酶免疫法检测呋喃妥因代谢物 被引量：6
14
作者 李亚楠 王瑞 +2 位作者 李涛 王云贵 黄登宇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第8期231-235,共5页
建立检测动物组织中呋喃妥因代谢物的直接竞争化学发光酶免疫法。采用棋盘法确定抗体和酶标抗原的最佳稀释度,通过单因素试验优化包被条件、封闭液种类和竞争反应时间,建立直接竞争抑制曲线,并对方法的灵敏度、特异性、准确度和精密度... 建立检测动物组织中呋喃妥因代谢物的直接竞争化学发光酶免疫法。采用棋盘法确定抗体和酶标抗原的最佳稀释度,通过单因素试验优化包被条件、封闭液种类和竞争反应时间,建立直接竞争抑制曲线,并对方法的灵敏度、特异性、准确度和精密度进行方法学评价。结果表明,经优化,最佳反应条件为抗体稀释度1∶4 000,酶标抗原稀释度1∶80,包被条件为37℃2h后4℃过夜,封闭液为1%牛血清白蛋白,竞争反应1h。该方法的线性检测范围为0.030~10.595 ng/m L,IC_（50）为0.559 ng/m L;加标回收率为84.9%~103.4%,批内变异系数为3.4%~7.8%,批间变异系数为4.7%~11.8%;除与呋喃妥因原药交叉反应率为36.2%,与其他结构类似物及衍生化试剂交叉反应率均小于0.1%。该方法灵敏、准确,可用于动物组织中呋喃妥因代谢物的快速筛查。 展开更多
关键词 呋喃妥因 1-氨基-乙内酰脲 直接竞争化学发光酶免疫检测 动物组织
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白酒中邻苯二甲酸二乙酯的化学发光酶联免疫分析方法 被引量：1
15
作者 黄少文 羿利华 +3 位作者 孙远明 雷红涛 柳春红 沈玉栋 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期178-183,共6页
以邻苯二甲酸二乙酯（diethyl phthalate，DEP）为研究目标，以4-氨基邻苯二甲酸二乙酯为半抗原，通过重氮法偶联载体蛋白并免疫动物，制备针对DEP的特异性兔多克隆抗体。通过棋盘滴定法和单因素实验确定最佳的实验参数，即包被抗原浓度... 以邻苯二甲酸二乙酯（diethyl phthalate，DEP）为研究目标，以4-氨基邻苯二甲酸二乙酯为半抗原，通过重氮法偶联载体蛋白并免疫动物，制备针对DEP的特异性兔多克隆抗体。通过棋盘滴定法和单因素实验确定最佳的实验参数，即包被抗原浓度为50ng／mL，4℃环境下包被12h；抗体用T液稀释；药物缓冲液选用pH5．4、0．005mol／L的PBS缓冲液；酶标二抗用P液稀释，稀释度为1／3000；反应时间是：一抗：二抗=30min：40min。基于此建立了间接竞争化学发光酶联免疫法检测DEP。该方法对DEP的最低检测限（LOD）为3．09ng／mL，检测范围（IC20～IC80）为5．93—42．03ng／mL，半抑制浓度（IC50）值为16．57ng／mL，与14种结构类似物及功能类似物交叉反应均远低于0．5％，通过对白酒样品添加回收率的测定，证明了该方法的准确性，适用于白酒中DEP的快速检测。 展开更多
关键词 邻苯二甲酸二乙酯 化学发光酶联免疫 间接竞争
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呋喃它酮代谢物直接竞争化学发光酶免疫分析法的建立 被引量：5
16
作者 吕月霞 王瑞 +2 位作者 黄登宇 王云贵 李涛 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第22期71-75,86,共6页
采用以对碘苯酚为增强剂的鲁米诺-辣根过氧化物酶-过氧化氢化学发光检测体系,建立检测动物组织中呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-2-氨基-2-僫唑烷基酮（AMOZ）残留的直接竞争化学发光酶免疫分析法（dc-CLEIA）。结果表明：此方法IC50为0.62 n... 采用以对碘苯酚为增强剂的鲁米诺-辣根过氧化物酶-过氧化氢化学发光检测体系,建立检测动物组织中呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-2-氨基-2-僫唑烷基酮（AMOZ）残留的直接竞争化学发光酶免疫分析法（dc-CLEIA）。结果表明：此方法IC50为0.62 ng/m L,检测限为15.52 pg/m L,线性范围0.038~9.78 ng/m L,变异系数均小于10%;该方法中抗体除了与呋喃它酮原药有一定交叉外,与其他结构类似物无交叉,表现了良好的特异性;鸡肉样品添加回收率为83%~94%,验证了该方法的准确性,为实际动物组织中AMOZ残留提供了便捷、准确、快速筛查的手段。 展开更多
关键词 呋喃它酮代谢物 直接竞争化学发光酶免疫分析法 鸡肉
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重金属铜化学发光酶联免疫快速检测方法的建立 被引量：4
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作者 杨浩 程龙球 +3 位作者 黄建芳 朱柳蓉 刘洋 向军俭 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期584-590,共7页
目的:用自制重金属铜单抗和合成铜完全抗原,建立检测重金属铜离子的间接竞争化学发光酶联免疫(CLEIA)法,为植物中草药和土壤环境中铜的快速定量测定提供简便、可靠的方法。方法:使用本实验室前期制备并鉴定合格的优质铜单抗和合成铜抗原... 目的:用自制重金属铜单抗和合成铜完全抗原,建立检测重金属铜离子的间接竞争化学发光酶联免疫(CLEIA)法,为植物中草药和土壤环境中铜的快速定量测定提供简便、可靠的方法。方法:使用本实验室前期制备并鉴定合格的优质铜单抗和合成铜抗原,建立铜间接竞争CLEIA法,并对其准确度、精密度、特异性和稳定性进行评价;采集植物中草药和土壤样品共31份,通过微波消解联合沉淀法进行前处理并制备待测样,由间接竞争CLEIA法进行铜含量测定,以ICP-AES仪器法所测结果为对照评价其可靠性。结果:该方法检测灵敏度为17. 9 ng/ml,检测限为1. 9 ng/ml,线性范围为3. 0～200 ng/ml;准确度试验回收率为98. 8%～105. 5%,精密度试验RSD≤5. 0%;特异性试验仅与Mg^(2+)、Zn^(2+)有13. 3%、3. 3%的交叉反应;酶标板置-20℃避光保存6周内其检测结果准确性未出现明显改变。对植物中草药和土壤样品进行前处理并制样检测,对比ICP-AES法检测结果,相关系数分别为0. 972和0. 989,两种方法具有较好相关性,表明间接竞争CLEIA法可应用于一般环境样品中铜的简便快速定量测定。结论:成功建立铜间接竞争CLEIA检测法,其灵敏度及各参数均符合国家法定相关样品铜离子检测技术指标的要求,可应用于一般环境样品中铜含量的快速测定。 展开更多
关键词 铜离子 单克隆抗体 间接竞争化学发光酶联免疫
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呋喃妥因代谢物化学发光酶联免疫检测方法的研究 被引量：5
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作者 王瑞 吕月霞 +2 位作者 黄登宇 王云贵 李涛 《中国兽药杂志》 北大核心 2015年第4期35-41,共7页
对呋喃妥因代谢物1－氨基乙内酰脲（ AHD）进行半抗原改造，采用活化酯法将半抗原与卵清蛋白（ OVA）偶联为包被原，与标准品竞争AHD单克隆抗体的抗原结合位点，加入辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗，建立了AHD间接竞争化学发光酶联免疫（... 对呋喃妥因代谢物1－氨基乙内酰脲（ AHD）进行半抗原改造，采用活化酯法将半抗原与卵清蛋白（ OVA）偶联为包被原，与标准品竞争AHD单克隆抗体的抗原结合位点，加入辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗，建立了AHD间接竞争化学发光酶联免疫（ CLEIA）检测法，并对化学发光液、包被原与抗体最优稀释度、包被条件、封闭液和竞争时间五项参数进行优化。结果表明：该方法具有良好的特异性， IC50为0．753 ng／mL，在鸡肉组织中的检测限为0．028μg／kg，添加回收率在80．54％～102．64％之间，变异系数均小于10％。与国标中液相色谱－串联质谱法（ LC－MS／MS）和我国出入境行业标准中酶联免疫检测法（ ELISA）相比，不仅降低了检测限，而且操作简便，为动物源性食品中呋喃妥因代谢物的残留提供了准确、便捷的分析检测手段。 展开更多
关键词 呋喃妥因代谢物 包被原 化学发光酶联免疫检测
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化学发光酶联免疫分析法同时检测3种有机磷农药残留 被引量：30
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作者 邹茹冰 柳颖 +3 位作者 王双节 张亚 郭逸蓉 朱国念 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期37-45,共9页
利用能同时识别对硫磷、甲基对硫磷和杀螟硫磷的宽谱特异性单克隆抗体,建立了同时测定这3种有机磷农药残留的化学发光酶联免疫分析方法 (chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA),比较了间接竞争(ic-CLEIA)和直接竞争(dc-CLEIA)2... 利用能同时识别对硫磷、甲基对硫磷和杀螟硫磷的宽谱特异性单克隆抗体,建立了同时测定这3种有机磷农药残留的化学发光酶联免疫分析方法 (chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA),比较了间接竞争(ic-CLEIA)和直接竞争(dc-CLEIA)2种反应模式,优化了相关理化参数,确立了最适反应条件。结果表明:间接竞争CLEIA法检测对硫磷、甲基对硫磷和杀螟硫磷的抑制中浓度(IC_(50))分别为5.57、2.30和2.62μg/kg,检测线性范围分别为0.39~100、0.39~25和0.39~25μg/kg;直接竞争CLEIA法检测对硫磷、甲基对硫磷和杀螟硫磷的抑制中浓度(IC_(50))分别为5.43、1.34和1.24μg/kg,检测线性范围分别为0.39~100、0.10~25和0.10~25μg/kg。所建立的CLEIA方法基本能满足对硫磷、甲基对硫磷和杀螟硫磷在谷物和果蔬中最大残留限量的检测要求,为研制有机磷农药多残留检测试剂盒提供了技术依据。 展开更多
关键词 化学发光酶联免疫分析 有机磷农药 残留 单克隆抗体 宽谱特异性
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化学发光法与酶联免疫吸附试验检测献血者梅毒螺旋体特异性抗体结果分析 被引量：38
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作者 门守山 商发奎 +2 位作者 韩春花 宋金香 韩景银 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期226-230,共5页
目的:探讨化学发光法(CMIA)检测梅毒螺旋体(TP)特异性抗体在血站血液检测中的应用价值。方法:同期采用新创酶联免疫吸附法(ELISA)和雅培化学发光法检测梅毒特异性抗体共计66 298份;对TP-ELISA法阴性而TP-CMIA法阳性无偿献血者血液样本... 目的:探讨化学发光法(CMIA)检测梅毒螺旋体(TP)特异性抗体在血站血液检测中的应用价值。方法:同期采用新创酶联免疫吸附法(ELISA)和雅培化学发光法检测梅毒特异性抗体共计66 298份;对TP-ELISA法阴性而TP-CMIA法阳性无偿献血者血液样本采用免疫印迹法进行梅毒特异性抗体检测确证。结果:在66 298份无偿献血者血液样本中,TP-ELISA法检出250份阳性,阳性率0.38%;TP-CMIA法检出297份阳性,阳性率0.45%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结果不一致的47份无偿献血者血液样本采用TP-WB法检测确证,有32份阳性,15份阴性,而TP-ELISA法全阴性。结论:TP-CMIA法敏感性高于TP-ELISA法,具有更高的敏感性和特异性,并且检测快速,操作简便,易于自动化,在血站梅毒螺旋体检测中有较大的应用价值。 展开更多
关键词 梅毒螺旋体筛查 化学发光法 免疫印迹法 酶联免疫吸附法 献血者
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