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大豆长链脂酰辅酶A合成酶基因GmLACS在酵母中的表达 被引量:8
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作者 于莉莉 谭小力 侯文胜 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期719-722,共4页
在LACS缺陷型酵母YB525中对已经克隆的大豆长链脂酰辅酶A合成酶基因(GmLACS)进行表达,并对其功能进行了预测。进化树比对分析显示大豆长链脂酰辅酶A合成酶(GmLACS)与其它植物的LACSs具有高度的同源性;酵母互补测试显示GmLACS蛋白能够互... 在LACS缺陷型酵母YB525中对已经克隆的大豆长链脂酰辅酶A合成酶基因(GmLACS)进行表达,并对其功能进行了预测。进化树比对分析显示大豆长链脂酰辅酶A合成酶(GmLACS)与其它植物的LACSs具有高度的同源性;酵母互补测试显示GmLACS蛋白能够互补LACS缺陷型酵母YB525,具有长链脂酰辅酶A合成酶活性;底物偏好性分析显示GmLACS偏好活化大豆中的重要的长链脂肪酸。以上研究结果表明:大豆长链脂酰辅酶A合成酶基因GmLACS编码的蛋白属于LACS家族,能够活化外源脂肪酸并参与了脂肪酸相关的脂类代谢。 展开更多
关键词 大豆 辅酶a合成酶 进化树分析 酵母互补
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鹅脂肪甘油三酯脂肪酶和长链脂酰辅酶A合成酶1基因表达差异及其对脂肪沉积和血清脂类代谢的调控 被引量:7
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作者 王宝维 孔敏 +3 位作者 葛文华 张名爱 马传兴 张肖 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期2079-2089,共11页
本试验旨在研究脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)和长链脂酰辅酶A合成酶1(ACSL1)基因在鹅的不同组织器官中的表达差异,并探索2个基因表达对机体脂肪沉积和血清脂类代谢的调控。选取16周龄五龙鹅30只(公母各占1/2),屠宰后用实时荧光定量PCR检测... 本试验旨在研究脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)和长链脂酰辅酶A合成酶1(ACSL1)基因在鹅的不同组织器官中的表达差异,并探索2个基因表达对机体脂肪沉积和血清脂类代谢的调控。选取16周龄五龙鹅30只(公母各占1/2),屠宰后用实时荧光定量PCR检测不同组织器官(肝脏、心脏、皮下脂肪、腹部脂肪、胸肌、腿肌、肌胃、腺胃、小肠、肾脏、大脑、肺、脾脏)中A TG L、A CSL1基因表达量。结果表明:1)在鹅的皮下脂肪、腹部脂肪、肝脏、脾脏、肾脏、心脏、胸肌和腿肌中均检测出ATGL和ACSL1基因的表达;ATGL基因在皮下脂肪和腹部脂肪中表达量最高,其次是肝脏和脾脏,在肾脏、心脏、胸肌和腿肌中只有少量表达;ACSL1基因在皮下脂肪、腹部脂肪、肝脏、脾脏中表达量较高,在肾脏、心脏、胸肌和腿肌中有少量表达,而在肌胃、腺胃和肺中几乎不表达。2)ATGL基因表达量与腿肌肌内脂肪率、胸肌肌内脂肪率、腹部脂肪率、胸肌率和腿肌率呈显著或极显著负相关(P<0.05或P<0.01),与皮下脂肪率呈显著正相关(P<0.05);ACSL1基因表达量与腿肌肌内脂肪率、胸肌肌内脂肪率、胸肌率呈正相关(P>0.05),与腿肌率呈显著正相关(P<0.05),与皮下脂肪率呈显著负相关(P<0.05)。3)ATGL基因表达量与血清甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和葡萄糖含量呈显著或极显著正相关(P<0.05或P<0.01);ACSL1基因表达量与血清总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和葡萄糖含量呈负相关(P>0.05),与甘油三酯含量呈显著负相关(P<0.05)。由此可见,ATGL和ACSL1基因在鹅的不同组织器官中的表达具有明显差异性,对机体脂肪沉积和血清脂类代谢具有反向调控作用。 展开更多
关键词 肪甘油三酯肪酶基因 辅酶a合成酶基因 组织器官 基因表达 基因调控
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脂酰辅酶A长链合成酶3及其相关疾病 被引量:3
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作者 张荣 陈雁斌 袁中华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期736-741,共6页
脂滴(lipid droplets)是细胞内脂质贮存和调节细胞脂质稳态的重要细胞器,其表面具有多种脂滴相关蛋白质。长链酰基辅酶A合成酶家族的成员脂酰辅酶A长链合成酶3(acyl CoA long chain synthetase 3,ACSL3)即脂滴相关蛋白质的一种,也是生... 脂滴(lipid droplets)是细胞内脂质贮存和调节细胞脂质稳态的重要细胞器,其表面具有多种脂滴相关蛋白质。长链酰基辅酶A合成酶家族的成员脂酰辅酶A长链合成酶3(acyl CoA long chain synthetase 3,ACSL3)即脂滴相关蛋白质的一种,也是生物合成过程中必需的酶之一。ACSL3广泛分布于大多数细胞中的脂滴表面,其在脂滴的合成、自噬的调节和细胞铁死亡等多种病理生理过程中发挥着不同的作用。此外,多项研究表明,ACSL3还广泛参与到多种疾病的发生发展,包括动脉粥样硬化、非酒精性脂肪肝病、糖尿病和肿瘤等。当前,国内对ACSL3的研究相对集中于ACSL3与动物育种和生长的关系,而对ACSL3在脂质代谢中的作用机制及其与疾病的关系鲜有报道。本文基于国内外对ACSL3的研究,对该基因的结构、在细胞脂代谢中的作用机制及其相关疾病进行归纳,进一步探究ACSL3在脂滴的合成、自噬、铁死亡过程中的作用,为防治动脉粥样硬化、非酒精性脂肪肝病、糖尿病(glucose)等多种ACSL3相关疾病提供新的理论依据。 展开更多
关键词 辅酶a合成酶3 自噬 动脉粥样硬化
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长链脂酰辅酶A合成酶家族与恶性肿瘤 被引量:4
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作者 张秀娟 李玲 叶棋浓 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期875-884,共10页
脂肪酸代谢紊乱容易导致癌症的发生。长链脂酰辅酶A合成酶家族(long chain acyl-coenzyme A synthetase family,ACSLs)负责激活长链脂肪酸,在脂肪酸代谢中发挥重要作用。但在癌细胞中,其调控作用经常被解除,细胞内脂肪酸的分布、种类和... 脂肪酸代谢紊乱容易导致癌症的发生。长链脂酰辅酶A合成酶家族(long chain acyl-coenzyme A synthetase family,ACSLs)负责激活长链脂肪酸,在脂肪酸代谢中发挥重要作用。但在癌细胞中,其调控作用经常被解除,细胞内脂肪酸的分布、种类和数量发生改变,进而导致癌症和其他代谢性疾病的发生。ACSLs在哺乳动物中包括5种亚型,分别为ACSL1、3、4、5和6。ACSL1在甘油三脂的合成和分配中发挥重要作用;ACSL3有助于脂滴的形成,脂滴对维持脂质稳态具有重要作用;ACSL4的表达与类固醇激素相关,在铁死亡途径中发挥重要作用;ACSL5可以催化外源性脂肪酸的代谢,但不能催化从头合成脂肪酸的代谢;ACSL6在脑内的脂肪酸代谢及生殖器官中精子发生和卵巢功能维持等方面发挥重要作用。ACSLs的调控因子包括转录因子、共激活因子、激素受体、蛋白激酶和小的非编码RNA等。它们通过介导脂肪酸代谢,广泛参与线粒体介导的能量代谢,内质网应激和肿瘤炎性微环境等。此外,ACSLs还作为独立预后因素,成为各种癌症临床诊断和治疗的生物标志物和治疗靶点。近年来,越来越多的研究表明,ACSL家族在癌症的发生发展进程中发挥重要作用。本文从ACSL基因家族,ACSLs与恶性肿瘤及基于ACSLs脂代谢的肿瘤治疗方面进行阐述,为后续ACSL基因家族的研究及肿瘤的靶向治疗提供理论依据和候选分子靶标。 展开更多
关键词 辅酶a合成酶 代谢 恶性肿瘤 靶向治疗
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草鱼脂酰辅酶A合成酶4基因全长cDNA分子克隆及表达调控 被引量:1
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作者 韩振 高琦 +4 位作者 许建和 易乐飞 申欣 丁祝进 程汉良 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期2442-2450,共9页
本试验采用反转录PCR(RT-PCR)技术克隆草鱼脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)基因全长cDNA,利用实时荧光定量PCR技术研究ACSL4基因在草鱼大脑、心脏、脾脏、肝胰脏、肌肉、肾脏、肠系膜脂肪、前肠、中肠、后肠10种组织中的表达情况,并对投喂不同... 本试验采用反转录PCR(RT-PCR)技术克隆草鱼脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)基因全长cDNA,利用实时荧光定量PCR技术研究ACSL4基因在草鱼大脑、心脏、脾脏、肝胰脏、肌肉、肾脏、肠系膜脂肪、前肠、中肠、后肠10种组织中的表达情况,并对投喂不同淀粉源饲料以及饥饿再投喂0、3、6、12和24 h后草鱼肝胰脏中ACSL4基因表达情况进行研究。结果显示:草鱼ACSL4基因cDNA全长2 418 bp,其开放阅读框2 121 bp,共编码706个氨基酸;草鱼ACSL4蛋白的氨基酸序列包含1个跨膜结构域、1个脂肪酸绑定基序和1个ATP/AMP绑定基序。草鱼ACSL4 mRNA在大脑和脾脏中相对表达量较高,显著高于其他组织(P <0.05),在肌肉中相对表达量最低;投喂不同淀粉源饲料对草鱼肝胰脏中ACSL4 mRNA相对表达量无显著影响(P>0.05);饥饿再投喂12 h后,草鱼肝胰脏中ACSL4 mRNA相对表达量达到最高值,显著高于其他时间段(P<0.05),24 h后恢复至最初水平。本试验从草鱼10种混合组织中克隆了ACSL4基因全长cDNA,其所编码的氨基酸序列的主要功能性位点脂肪酸绑定基序和ATP/AMP绑定基序在不同物种间高度保守;草鱼ACSL4基因主要在大脑和脾脏中表达;饲料中淀粉源对草鱼肝胰脏中ACSL4基因的表达无显著影响;在饥饿再投喂12 h后,草鱼肝胰脏中ACSL4 mRNA相对表达量达到最高值,随后显著下降至最初水平。 展开更多
关键词 草鱼 辅酶a合成酶4 分子克隆 表达调控
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油菜脂酰CoA合成酶基因pXT166的鉴定和功能分析 被引量:8
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作者 朱福各 谭小力 +2 位作者 崇保强 周佳 袁伟伟 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期274-278,共5页
长链脂酰CoA合成酶(LACSs)在脂肪酸的合成代谢与分解代谢中起着重要的作用,它把游离脂肪酸活化为脂酰CoA硫酯。pXT166经证实具有编码长链脂酰CoA合成酶活性。本研究通过酵母互补实验验证了pXT166具有LACS的酶活性。分析该基因编码蛋白... 长链脂酰CoA合成酶(LACSs)在脂肪酸的合成代谢与分解代谢中起着重要的作用,它把游离脂肪酸活化为脂酰CoA硫酯。pXT166经证实具有编码长链脂酰CoA合成酶活性。本研究通过酵母互补实验验证了pXT166具有LACS的酶活性。分析该基因编码蛋白的底物偏好性显示,长链饱和脂肪酸是其优先底物。RT-PCR分析表明,在不同油脂含量的油菜品系种子中,授粉后35d,该基因在高含油量的种子中表达更强,表明pXT166参与了油菜种子中油脂的合成,与种籽含油量相关。 展开更多
关键词 Coa合成酶 RT—PCR 酵母互补 底物偏好性
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紫花苜蓿LACS基因家族成员鉴定及表达分析
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作者 罗天蓉 马健芝 +3 位作者 杜明阳 多杰措 熊辉岩 段瑞君 《草业学报》 北大核心 2025年第4期124-136,共13页
长链脂酰辅酶A合成酶(LACS)基因家族是包含在酰基激活酶超家族中的一类,在脂肪酸合成代谢中具有重要的作用。基于紫花苜蓿基因组数据,采用生物信息学方法对紫花苜蓿LACS基因家族成员进行鉴定,构建系统发育树,进行理化性质、染色体定位... 长链脂酰辅酶A合成酶(LACS)基因家族是包含在酰基激活酶超家族中的一类,在脂肪酸合成代谢中具有重要的作用。基于紫花苜蓿基因组数据,采用生物信息学方法对紫花苜蓿LACS基因家族成员进行鉴定,构建系统发育树,进行理化性质、染色体定位、保守基序和基因结构、顺式作用原件及组织特异性表达分析,然后构建蛋白互作网络分析,通过qRT-PCR试验进行非生物胁迫表达分析。结果表明:在紫花苜蓿基因组中共鉴定得到10个MsLACS家族成员,分别位于5条染色体上;通过构建系统发育树,将MsLACS分为5支;保守基序分析发现12个不同的保守基序,Motif3构成了AMP保守结构域,MsLACS基因均含10~12个基序不等;基因结构分析发现,MsLACS基因结构大有不同,MsLACS基因的外显子数量为11~22个,所含内含子数量为0~3个不等,MsLACS1-1和MsLACS3不含内含子;MsLACS基因的启动子区域中主要有光反应元件、激素反应元件和非生物胁迫反应元件等;MsLACS基因在不同组织中表达不同,且具有明显的组织特异性;非生物胁迫表达分析表明:紫花苜蓿MsLACS基因对于干旱胁迫和盐胁迫响应水平整体较高,对冷胁迫响应水平偏低,表达量整体呈先升高后降低的起伏型,在叶片组织中偏高,根组织中较低;干旱和盐胁迫下,MsLACS基因在叶片中均高表达,胁迫时间段为6 h时,表达量水平整体达到最高;紫花苜蓿10个MsLACS基因共同互作,各蛋白与其他蛋白互作连线分别有18条,相互间有较强互作。研究结果可为探究紫花苜蓿中LACS基因表达以及胁迫育种提供一定研究基础。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 辅酶a合成酶(lacs) 基因家族 非生物胁迫 表达
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拟南芥KCS12基因的克隆及其对长链脂肪酸代谢调控功能的初步分析
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作者 靳远航 余春娥 郑育声 《南方农业》 2016年第21期183-185,共3页
本课题从拟南芥中克隆了超长链脂肪酸代谢相关的功能基因At KCS12,转入酵母(INVSC1)表达系统中表达,检测酵母细胞中脂肪酸组成。脂肪酸组成结果分析表明,At KCS12使酵母中棕榈酸(16∶0)和硬脂酸(18∶0)的相对含量显著增加了,十八烯酸(18... 本课题从拟南芥中克隆了超长链脂肪酸代谢相关的功能基因At KCS12,转入酵母(INVSC1)表达系统中表达,检测酵母细胞中脂肪酸组成。脂肪酸组成结果分析表明,At KCS12使酵母中棕榈酸(16∶0)和硬脂酸(18∶0)的相对含量显著增加了,十八烯酸(18∶1)的相对含量显著减少了。这些结果共同提示,At KCS12表达的蛋白不能利用酵母中的脂肪酸作为催化底物合成超长链脂肪酸,或者At KCS12蛋白无酶活性。 展开更多
关键词 拟南芥 β-酮辅酶a合成酶 肪酸 表达载体
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拟南芥AtLACS9基因的克隆及其植物表达载体构建 被引量:5
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作者 赵欢欢 吴兴 +2 位作者 张锋 李宏伟 王茅雁 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期190-193,共4页
将大豆种子凝集素基因的启动子(lec)从pBI-lec载体上酶切下来,连接到植物表达载体pCAMBIA3301(p3301)的多克隆位点上,然后运用RT-PCR方法扩增了拟南芥AtLACS9基因的编码区cDNA,并将其克隆到改造后的p3301载体的lec启动子之后,为进一步... 将大豆种子凝集素基因的启动子(lec)从pBI-lec载体上酶切下来,连接到植物表达载体pCAMBIA3301(p3301)的多克隆位点上,然后运用RT-PCR方法扩增了拟南芥AtLACS9基因的编码区cDNA,并将其克隆到改造后的p3301载体的lec启动子之后,为进一步转化大豆、获得油份含量提高的转基因大豆做准备。结果表明:p3301载体改造成功,命名为p3301-lec;AtLACS9基因的编码区cDNA由2076 bp组成,编码含691个氨基酸残基的蛋白,其种子特异性表达载体p3301-lec-AtLACS9构建成功,可进行后续研究。 展开更多
关键词 辅酶a合成酶 基因克隆 载体构建
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罗格列酮对脂多糖诱导小鼠急性肾损伤肾小管上皮细胞铁死亡的抑制作用及其机制 被引量:2
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作者 杨巧玲 符璐 +4 位作者 石雨 叶严珏 卢日峰 刘永 尹俐 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期351-359,共9页
目的:探讨罗格列酮对脂多糖(LPS)诱导的急性肾损伤(AKI)小鼠肾小管上皮细胞铁死亡的抑制作用,并阐明其作用机制。方法:18只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、LPS组和LPS+罗格列酮组,每组6只。LPS组和LPS+罗格列酮组小鼠均腹腔注射LPS(10 ... 目的:探讨罗格列酮对脂多糖(LPS)诱导的急性肾损伤(AKI)小鼠肾小管上皮细胞铁死亡的抑制作用,并阐明其作用机制。方法:18只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、LPS组和LPS+罗格列酮组,每组6只。LPS组和LPS+罗格列酮组小鼠均腹腔注射LPS(10 mg·kg^(-1));LPS+罗格列酮组小鼠在LPS注射前30 min尾静脉注射罗格列酮(0.5 mg·kg^(-1));对照组小鼠注射与LPS组小鼠同体积的生理盐水。LPS注射24 h后处死小鼠,收集肾组织和血清。HE染色观察各组小鼠肾组织病理形态表现,分光光度法检测各组小鼠血清中肌酐(CRE)和血尿素氮(BUN)水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组小鼠肾组织中长链脂酰CoA合成酶4(ACSL4)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组小鼠肾组织中GPX4、SLC7A11和ACSL4蛋白表达水平。结果:HE染色,与对照组比较,LPS组小鼠肾小管管腔内出现空泡结构,肾小管损伤评分明显升高(P<0.01);与LPS组比较,LPS+罗格列酮组小鼠肾组织中细胞排列紧密,管腔内基本无空泡,肾小管损伤评分明显降低(P<0.01)。与对照组比较,LPS组小鼠血清中CRE和BUN水平明显升高(P<0.01);与LPS组比较,LPS+罗格列酮组小鼠CRE和BUN水平明显降低(P<0.01)。RT-qPCR法和Western blotting法,与对照组比较,LPS组小鼠肾组织中ACSL4 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01),GPX4和SLC7A11 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01),IL-6、IL-1β和TNF-αmRNA表达水平升高(P<0.01);与LPS组比较,LPS+罗格列酮组小鼠肾组织中ACSL4 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),GPX4和SLC7A11 mRNA及蛋白水平明显升高(P<0.01),IL-6、IL-1β和TNF-αmRNA表达水平降低(P<0.01)。结论:罗格列酮可通过调控ACSL4改善LPS诱导的AKI小鼠肾小管上皮细胞铁死亡。 展开更多
关键词 急性肾损伤 Coa合成酶4 铁死亡 罗格列酮
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ACSL1促进肝脏脂质积累与炎症发生并参与疾病发展的研究进展 被引量:6
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作者 肖可瑞 雷晨怡 +1 位作者 熊钟珉 李冬民 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期644-653,共10页
长链脂酰辅酶A合成酶(acyl-CoA synthetase long-chain,ACSL)属于多基因家族编码的酶,位于内质网和线粒体外膜上的ACSL主要催化脂肪酸形成脂酰辅酶A(acyl-CoA),参与脂肪酸代谢、膜修饰等多种生理过程。ACSL家族在不同细胞的脂肪酸代谢... 长链脂酰辅酶A合成酶(acyl-CoA synthetase long-chain,ACSL)属于多基因家族编码的酶,位于内质网和线粒体外膜上的ACSL主要催化脂肪酸形成脂酰辅酶A(acyl-CoA),参与脂肪酸代谢、膜修饰等多种生理过程。ACSL家族在不同细胞的脂肪酸代谢中发挥不同作用,其功能异常可导致如脂肪肝、动脉粥样硬化和糖尿病的发生。ACSL家族成员1(ACSL family member 1,ACSL1)作为ACSL家族在肝脏中的主要亚型,主要参与维持胆固醇稳定、脂肪酸活化以及胆汁酸代谢,同时与某些肝脏疾病如肝细胞癌、非酒精性脂肪肝的发生发展密切相关。本文综述了ACSL家族各成员的生理功能、作用特点,并阐释了ACSL1对脂质代谢、调节细胞铁死亡的影响以及在相关疾病如肝纤维化、肝细胞癌、恶病质、非酒精性脂肪肝、甲状腺癌以及乳腺癌发展中的作用机制的研究进展。 展开更多
关键词 辅酶a合成酶(ACSL) ACSL1 肪酸代谢 肝细胞癌 非酒精性肪肝
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硫唑嘌呤对RSL3诱导小鼠精母细胞铁死亡的影响
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作者 叶严珏 汤子怡 +3 位作者 谭钰培 阳诗盈 刘永 尹俐 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1217-1226,共10页
目的:探讨硫唑嘌呤(AZA)对还原型谷胱甘肽(GSH)过氧化物酶4抑制剂RSL3诱导的小鼠精母细胞铁死亡的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:小鼠精母GC-2细胞随机分为对照组(不进行处理)、RSL3组(给予10 nmol·L^(-1) RSL3处理24 h)、RS... 目的:探讨硫唑嘌呤(AZA)对还原型谷胱甘肽(GSH)过氧化物酶4抑制剂RSL3诱导的小鼠精母细胞铁死亡的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:小鼠精母GC-2细胞随机分为对照组(不进行处理)、RSL3组(给予10 nmol·L^(-1) RSL3处理24 h)、RSL3+铁死亡抑制剂(Fer-1)组(给予10 nmol·L^(-1) RSL3处理24 h+2μmol·L^(-1) Fer-1处理12 h)、RSL3+低剂量AZA组(给予10 nmol·L^(-1)RSL3处理24h+5μmol·L^(-1)AZA处理12h)、 RSL3+中剂量AZA组(给予10 nmol·L^(-1) RSL3处理24 h+10μmol·L^(-1) AZA处理12 h)和RSL3+高剂量AZA组(给予10 nmol·L^(-1) RSL3处理24 h+20μmol·L^(-1) AZA处理12 h)。MTT法检测不同浓度AZA和不同浓度RSL3作用后GC-2细胞活性,采用GSH和氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒检测GC-2细胞中GSH和GSSG水平,采用丙二醛(MDA)试剂盒检测各组GC-2细胞中MDA水平,采用Western blotting法检测各组GC-2细胞中长链脂酰CoA合成酶4 (ACSL4)、血红素氧合酶1 (HO-1)和谷胱甘肽过氧化物酶4 (GPX4)蛋白表达水平,采用免疫荧光法检测各组GC-2细胞中ACSL4蛋白表达情况。结果:与对照组比较,5、10和20μmol·L^(-1)AZA组GC-2细胞活性差异无统计学意义(P>0.05),30和40μmol·L^(-1) AZA组GC-2细胞细胞活力明显降低(P<0.01),因此AZA作用浓度选择为20μmol·L^(-1)以内。与对照组比较,1、5和10 nmol·L^(-1) RSL3组GC-2细胞活性差异无统计学意义(P>0.05),50、100、500和1 000 nmol·L^(-1)RSL3组GC-2细胞活性明显降低(P<0.05或P<0.01),因此将RSL3作用浓度定为10 nmol·L^(-1)以内。GSH和MDA试剂盒检测,与对照组比较,RSL3组GC-2细胞中GSSG和MDA水平明显升高(P<0.05), GSH水平明显降低(P<0.05);与RSL3组比较,RSL3+Fer-1组和RSL3+AZA组GC-2细胞中GSSG和MDA水平明显降低(P<0.01), GSH水平明显升高(P<0.01)。Western blotting法检测,与对照组比较,RSL3组GC-2细胞中ACSL4和HO-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05),GPX4蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与RSL3组比较,RSL3+Fer-1组和RSL3+AZA组GC-2细胞中GPX4蛋白表达水平明显升高(P<0.05),ACSL4和HO-1蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。免疫荧光检测,与对照组比较,RSL3组GC-2细胞中ACSL4蛋白表达量明显增多;与RSL3组比较,RSL3+Fer-1组和RSL3+AZA组ACSL4蛋白表达量明显降低。结论:AZA可以减轻RSL3诱导的小鼠精母细胞铁死亡。 展开更多
关键词 硫唑嘌呤 铁死亡 精母细胞 谷胱甘肽过氧化物酶4 辅酶a合成酶家族成员4
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ACSL3在前列腺癌细胞系中的表达及其对前列腺癌转移的影响 被引量:3
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作者 李科 陈怡 +1 位作者 董艳 叶志强 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期250-255,共6页
目的:观察比较长链脂酰辅酶A合成酶3(long-chain acyl-CoA synthetase 3,ACSL3)在前列腺正常上皮细胞和不同类型前列腺癌细胞系中的表达差异,通过构建ACSL3基因稳定表达的前列腺癌细胞株研究ACSL3对前列腺癌细胞侵袭能力的影响。方法:利... 目的:观察比较长链脂酰辅酶A合成酶3(long-chain acyl-CoA synthetase 3,ACSL3)在前列腺正常上皮细胞和不同类型前列腺癌细胞系中的表达差异,通过构建ACSL3基因稳定表达的前列腺癌细胞株研究ACSL3对前列腺癌细胞侵袭能力的影响。方法:利用RT-PCR方法检测ACSL3 mRNA在前列腺正常上皮细胞、局限性及转移性前列腺癌细胞中的表达情况,分析其表达与前列腺癌发生、进展及转移的关系;以前列腺癌细胞基因组cDNA为模板,通过PCR扩增ACSL3基因,重组构建含有Flag标签的pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3质粒,包装慢病毒,转染前列腺癌细胞,通过荧光显微镜、RT-PCR和Western blotting等方法鉴定ACSL3在细胞内的表达情况;利用Transwell侵袭实验研究ACSL3对前列腺癌细胞侵袭能力的改变。结果:较前列腺正常上皮细胞,各种前列腺癌细胞中ACSL3 mRNA表达均明显下降。同时,局限性前列腺癌细胞中ACLS3 mRNA表达较转移性前列腺癌细胞明显升高;此外,雄激素非依赖性前列腺癌细胞比雄激素依赖性前列腺癌细胞中ACLS3 mRNA表达显著降低。进而,我们成功构建和包装了表达ACSL3基因的pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3重组质粒及慢病毒,并转染前列腺癌细胞,筛选出稳定表达株;并且,通过Transwell实验证实ACSL3表达与前列腺癌细胞的侵袭能力呈负相关。结论:前列腺正常上皮细胞及不同前列腺癌细胞系中ACSL3的表达存在明显差异,提示ACSL3可能在前列腺癌的发生发展中起重要作用;成功构建了ACSL3基因稳定表达的前列腺癌细胞株,并初步证实ACSL3过表达可以抑制前列腺癌细胞的侵袭力。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 辅酶a合成酶3 肿瘤侵袭
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