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大白菜单拷贝序列的长片段PCR体系优化: 1; 作者魏利洁苏建辉 +3 位作者轩淑欣王彦华申书兴赵建军《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第4期51-56,共6页; 目的序列长片段PCR产物可作为FISH技术的有效探针进行分子细胞遗传学研究。然而,传统PCR技术对于5 kb以上的长片段进行有效扩增很难。合适的反应条件及反应体系是进行长片段PCR有效扩增的必要前提。为了获得目的序列长片段PCR产物以用于... 展开更多; 关键词大白菜长片段pcr 体系优化单拷贝序列; 在线阅读下载PDF 职称材料

稻瘟病新抗性基因Pita2候选基因的表达载体构建被引量：2: 2; 作者张骥诚张向明 +3 位作者王春台刘学群徐鑫刘新琼《湖北农业科学》北大核心 2011年第10期2133-2135,共3页; 为了验证稻瘟病新抗性基因Pita2的功能,利用长片段PCR技术从基因的供体品种PiNo.4中扩增了2个候选基因Pita2-1,Pita2-2,长度分别为6.1 kb和16.5 kb,电泳回收目的片段,然后利用双酶切分别克隆到植物表达载体pCAMBIA1300。对阳性克隆通过... 展开更多; 关键词稻瘟病候选抗性基因长片段pcr技术表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

稻瘟病新抗性基因Pi36候选基因双元载体的构建: 3; 作者刘新琼王春台 +1 位作者刘学群王玲《湖北农业科学》北大核心 2007年第2期169-173,共5页; 为了验证Pi36候选基因的功能,利用长片段PCR(long-range PCR,LR-PCR)技术从Pi36基因的供体品种Q61中扩增了3个候选基因Pi36-1,Pi36-2,Pi36-3,长度分别为5.9kb,9.6kb和16.5kb,电泳回收目的片段,将Pi36-1和Pi36-2分别克隆到双元载体pCAMBI... 展开更多; 关键词稻瘟病菌候选抗性基因长片段pcr技术双元载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

东乡野生稻RPS2类候选抗病基因的克隆与分析被引量：5: 4; 作者崔玲玲李磊 +7 位作者韩小霞邢俊杰李玲龙阳志刚罗秀娟李丁谢灵灵曹孟良《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期111-115,共5页; 利用NBS保守结构域获得的探针及基于RecA文库富集方法的试剂盒筛选东乡野生稻液体pCAMBIA1301质粒文库,杂交筛选获得阳性克隆,在NCBI上进行BLASTN序列比对后,设计相关引物,扩增获得编码区,并利用生物信息学方法预测其编码蛋白序列,与已... 展开更多; 关键词东乡野生稻液体质粒文库长片段高保真pcr 生物信息学; 在线阅读下载PDF 职称材料

水稻白叶枯病抗性基因Xa31(t)候选基因表达载体的构建: 5; 作者赵传纪刘学群 +1 位作者王春台徐鑫《安徽农业科学》 CAS 2013年第15期6611-6612,6629,共3页; [目的]构建水稻白叶枯病抗性基因Xa31(t)候选基因的表达载体。[方法]利用长片段PCR在抗白叶枯病水稻品种扎昌龙中扩增长10.6 kb的候选基因,将其通过Asc I单酶切克隆至植物表达载体pCAMBIA1300中,并对阳性克隆进行质粒PCR、酶切检测和测... 展开更多; 关键词水稻白叶枯病候选基因长片段pcr 表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名大白菜单拷贝序列的长片段PCR体系优化: 1; 作者魏利洁苏建辉轩淑欣王彦华申书兴赵建军; 机构河北农业大学园艺学院; 出处《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第4期51-56,共6页; 基金国家自然科学基金项目(31501758 31171964) +3 种基金河北省科技计划项目(16226304D); 文摘目的序列长片段PCR产物可作为FISH技术的有效探针进行分子细胞遗传学研究。然而,传统PCR技术对于5 kb以上的长片段进行有效扩增很难。合适的反应条件及反应体系是进行长片段PCR有效扩增的必要前提。为了获得目的序列长片段PCR产物以用于FISH研究,根据大白菜A03染色体顶端无重复序列区段设计了80对长片段PCR引物,从基因组DNA模板质量、d NTPs浓度以及退火温度和延伸时间方面对PCR技术体系进行了优化。试验证明,选用幼苗嫩叶的基因组DNA和LA Taq DNA聚合酶可以提高长片段PCR引物的扩增质量和扩增效率;确定了适合5～15 kb长片段PCR的反应体系为20μL：50 ng/μL模板DNA 2μL,2.5 mmol/L d NTPs 1.6μL,10μmol/μL正反引物各1μL,10×LA PCR BufferⅡ（含Mg^2＋）2μL,5 U/μL LA Taq酶0.2μL;反应条件为98℃变性15 s;58～64℃退火10 s,68℃延伸5 min,35个循环;68℃延伸10 min,4℃保存。在大白菜基因组中成功获得了60对5～15 kb的扩增片段。为在大白菜粗线期染色体上开展长片段PCR-FISH技术研究及在近缘种间开展比较染色体涂染揭示进化关系奠定了理论基础。; 关键词大白菜长片段pcr 体系优化单拷贝序列; Keywords Chinese cabbage Long range pcr（LR-pcr） System optimization Single copy sequences; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学] S634.03 [农业科学—蔬菜学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名稻瘟病新抗性基因Pita2候选基因的表达载体构建被引量：2: 2; 作者张骥诚张向明王春台刘学群徐鑫刘新琼; 机构中南民族大学生命科学学院生物技术国家民委重点实验室; 出处《湖北农业科学》北大核心 2011年第10期2133-2135,共3页; 基金国家自然科学基金项目(30971563) 湖北省自然科学基金项目(2009CDA125 2010CDB02006); 文摘为了验证稻瘟病新抗性基因Pita2的功能,利用长片段PCR技术从基因的供体品种PiNo.4中扩增了2个候选基因Pita2-1,Pita2-2,长度分别为6.1 kb和16.5 kb,电泳回收目的片段,然后利用双酶切分别克隆到植物表达载体pCAMBIA1300。对阳性克隆通过菌落PCR、酶切鉴定和测序分析,已成功地获得了2个候选基因的重组阳性克隆,为进一步研究Pita2基因的功能奠定了基础。; 关键词稻瘟病候选抗性基因长片段pcr技术表达载体; Keywords rice blast disease candidate resistance gene long-range pcr expression vector; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名稻瘟病新抗性基因Pi36候选基因双元载体的构建: 3; 作者刘新琼王春台刘学群王玲; 机构中南民族大学生命科学学院生物技术国家民委重点实验室华南农业大学资源环境学院; 出处《湖北农业科学》北大核心 2007年第2期169-173,共5页; 基金国家自然科学基金青年项目(30600400); 文摘为了验证Pi36候选基因的功能,利用长片段PCR(long-range PCR,LR-PCR)技术从Pi36基因的供体品种Q61中扩增了3个候选基因Pi36-1,Pi36-2,Pi36-3,长度分别为5.9kb,9.6kb和16.5kb,电泳回收目的片段,将Pi36-1和Pi36-2分别克隆到双元载体pCAMBIA1300,而将Pi36-3克隆到双元载体pYLTAC27的AscI位点。为了将Pi36-3也克隆到具有高效转化效率的双元载体pCAMBIA1300中,首先在不改变pCAMBIA1300基本骨架的前提下,在其多克隆位点增加了AscI酶切位点,获得新载体pCAMBIA1300AscI;然后将克隆在载体pYLTAC27上的Pi36-3片段切下来,组装到新载体pCAMBI-A1300AscI上。经过酶切鉴定和测序分析,已成功地获得了3个候选基因的重组阳性克隆,为进一步地研究Pi36基因的功能奠定了基础。; 关键词稻瘟病菌候选抗性基因长片段pcr技术双元载体; Keywords Magnaporthe grisea candidate resistance gene long-range pcr binary vector; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学] S435.111.41 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名东乡野生稻RPS2类候选抗病基因的克隆与分析被引量：5: 4; 作者崔玲玲李磊韩小霞邢俊杰李玲龙阳志刚罗秀娟李丁谢灵灵曹孟良; 机构中南大学研究生院隆平分院湖南西城杂交水稻基因科技有限公司国家杂交水稻工程技术研究中心; 出处《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期111-115,共5页; 基金国家“973”项目(2007CB109007) 国家“863”重点项目(2006AA100101) 国家科技支撑计划项目(2007BAD77B00); 文摘利用NBS保守结构域获得的探针及基于RecA文库富集方法的试剂盒筛选东乡野生稻液体pCAMBIA1301质粒文库,杂交筛选获得阳性克隆,在NCBI上进行BLASTN序列比对后,设计相关引物,扩增获得编码区,并利用生物信息学方法预测其编码蛋白序列,与已克隆的NBS-LRR类抗性基因建立进化树.结果分析表明,其预测蛋白除了部分氨基酸缺失及2个氨基酸不同外,与粳稻大部分序列一致,分子进化树表明其与粳稻、拟南芥RPS2基因的关系最近.; 关键词东乡野生稻液体质粒文库长片段高保真pcr 生物信息学; Keywords Dongxiang wild rice the liquid plasmid library LA-pcr bioinforrnatics; 分类号 S511.903.4 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名水稻白叶枯病抗性基因Xa31(t)候选基因表达载体的构建: 5; 作者赵传纪刘学群王春台徐鑫; 机构中南民族大学生命科学学院/生物技术国家民委重点实验室; 出处《安徽农业科学》 CAS 2013年第15期6611-6612,6629,共3页; 基金教育部科学技术研究重点项目(210265); 文摘 [目的]构建水稻白叶枯病抗性基因Xa31(t)候选基因的表达载体。[方法]利用长片段PCR在抗白叶枯病水稻品种扎昌龙中扩增长10.6 kb的候选基因,将其通过Asc I单酶切克隆至植物表达载体pCAMBIA1300中,并对阳性克隆进行质粒PCR、酶切检测和测序分析。[结果]试验成功构建了水稻白叶枯病抗性基因Xa31(t)候选基因的表达载体。[结论]该研究为进一步研究Xa31(t)基因的功能奠定了基础。; 关键词水稻白叶枯病候选基因长片段pcr 表达载体; Keywords Rice Bacterial blight Candidate gene Long-range pcr Expression vector; 分类号 S511 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	大白菜单拷贝序列的长片段PCR体系优化	魏利洁苏建辉轩淑欣王彦华申书兴赵建军	《华北农学报》 CSCD 北大核心	2016	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	稻瘟病新抗性基因Pita2候选基因的表达载体构建	张骥诚张向明王春台刘学群徐鑫刘新琼	《湖北农业科学》北大核心	2011	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	稻瘟病新抗性基因Pi36候选基因双元载体的构建	刘新琼王春台刘学群王玲	《湖北农业科学》北大核心	2007	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	东乡野生稻RPS2类候选抗病基因的克隆与分析	崔玲玲李磊韩小霞邢俊杰李玲龙阳志刚罗秀娟李丁谢灵灵曹孟良	《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2009	5	在线阅读下载PDF 职称材料
5	水稻白叶枯病抗性基因Xa31(t)候选基因表达载体的构建	赵传纪刘学群王春台徐鑫	《安徽农业科学》 CAS	2013	0	在线阅读下载PDF 职称材料