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题名多功能M13KE噬菌体展示系统的建立
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作者
方月琴
郭娟宁
陆豪杰
朱国强
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机构
江苏健雄职业技术学院
扬州大学兽医学院
新乡医学院
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出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期143-147,共5页
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基金
国家自然科学基金项目(31270171)
江苏高校优势学科建设工程资助项目
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文摘
以M13KE噬菌体为起始载体,建立一种无需辅助噬菌体的较长片段多肽库展示系统,以解决当前噬菌体展示仅能筛选短肽库现象,并扩大靶向高通量筛选范畴。根据M13KE次要外壳蛋白(Minor coat protein of wild-type M13KE,wt-pⅢ)基因III(wt-gene Ⅲ)结构与功能关系,设计并扩增出能发挥其基因功能的截短基因Ⅲ(Truncated gene Ⅲ,tgⅢ);通过拼接-重叠-延伸PCR(Splice-overlapping-extension polymerase chain reaction,SOEing-PCR)获得含启动子、信号肽和结构基因的融合基因片段,将其插入至M13KE载体的合适部位,进行蛋白质诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析。同时在wt-gⅢ和tgⅢ部位分别插入HA和c-Myc多肽标签,再次进行表达和检测。结果显示,tgⅢ被插入到M13KE的非必需部位,利用抗蛋白III(anti-M13 pⅢ)抗体进行Western blot检测发现,wt-gⅢ和tgIII均能表达pIII(protein Ⅲ,pⅢ);anti-HA和c-Myc抗体都能检测到2个标签蛋白和pⅢ蛋白质的表达。获得一种多功能M13KE载体,具有既能表达短片段多肽库,也能表达较长片段多肽库的潜能,而且无需辅助噬菌体,可用于更大范围的高通量靶向筛选。
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关键词
靶向高通量筛选
噬菌体展示系统
M13KE
长片段多肽库
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Keywords
High-throughput screening Phage display M13KE Longer peptide library
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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