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镍离子亲和层析介质的制备及其用于组氨酸标记蛋白质的纯化
被引量：
9
1
作者
夏海锋
张显
+3 位作者
金雄华
刘婷婷
郑志永
饶志明
《江南大学学报（自然科学版）》
CAS
2010年第6期685-689,共5页
以交联琼脂糖微球为基质,通过环氧氯丙烷活化,偶联亚胺二乙酸并螯合N i2+,制备得到一种镍离子亲和层析介质。结果发现,在强碱条件下环氧活化率达到了38.0μmol/mL,最终N i2+配基密度达到了30.9μmol/mL,偶联效率为81.3%。利用得到的镍...
以交联琼脂糖微球为基质,通过环氧氯丙烷活化,偶联亚胺二乙酸并螯合N i2+,制备得到一种镍离子亲和层析介质。结果发现,在强碱条件下环氧活化率达到了38.0μmol/mL,最终N i2+配基密度达到了30.9μmol/mL,偶联效率为81.3%。利用得到的镍离子亲和介质对基因工程大肠杆菌表达的组氨酸标记3-羟基丁酮还原酶进行了一步层析纯化,酶活回收率达到了58.8%,纯化倍数为2.1,蛋白纯度在85%左右,纯化效果与常用商品介质基本相当。
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关键词
琼脂糖微球
镍离子亲和层析
组氨酸标记
克隆表达
纯化
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职称材料
带信号肽DsbA-胸腺素α_1融合蛋白的表达及其分离纯化
2
作者
郑小玲
林陈水
+1 位作者
倪建良
夏楠
《浙江工业大学学报》
CAS
2007年第6期613-616,共4页
以构建好的人胸腺素α1基因工程菌为研究材料,研究影响DsbA-胸腺素α1融合蛋白分泌效率的因素,优化信号肽酶表达得到阻遏的培养条件,获得含带信号肽DsbA-胸腺素α1融合蛋白的菌体,破碎细胞后利用疏水层析与Ni2+螯合亲和层析进行目标蛋...
以构建好的人胸腺素α1基因工程菌为研究材料,研究影响DsbA-胸腺素α1融合蛋白分泌效率的因素,优化信号肽酶表达得到阻遏的培养条件,获得含带信号肽DsbA-胸腺素α1融合蛋白的菌体,破碎细胞后利用疏水层析与Ni2+螯合亲和层析进行目标蛋白分离纯化,获得较高纯度底物蛋白(信号肽DsbA-胸腺素α1融合蛋白,其分子量约为34 kD),为进一步研究及分离纯化DsbA信号肽酶创造条件.
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关键词
融合蛋白
信号肽
疏水
层析
镍离子亲和层析
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职称材料
条斑紫菜TPS基因0.6Kb片段的原核表达及抗血清的制备
3
作者
孟庆芹
王斌
+2 位作者
徐丽娟
孙牧君
郭宝太
《青岛农业大学学报（自然科学版）》
2013年第4期295-299,共5页
以pET22b为起始载体,构建了条斑紫菜6-磷酸海藻糖合成酶基因(PyTPS)0.6Kb片段的原核表达载体,并命名为pET22b-PyTPS0.6。重组菌BL21(pET22b-PyTPS0.6)经ITPG诱导后,SDS-PAGE分析显示菌体总蛋白的电泳图谱上有分子量约为23kDa的特异性蛋...
以pET22b为起始载体,构建了条斑紫菜6-磷酸海藻糖合成酶基因(PyTPS)0.6Kb片段的原核表达载体,并命名为pET22b-PyTPS0.6。重组菌BL21(pET22b-PyTPS0.6)经ITPG诱导后,SDS-PAGE分析显示菌体总蛋白的电泳图谱上有分子量约为23kDa的特异性蛋白条带,即PyTPS基因0.6Kb片段得到了原核表达。用溶菌酶裂解细菌提取包涵体,再利用镍离子亲和层析柱从包涵体中纯化出TPS重组蛋白。用获得的高纯度重组蛋白作抗原免疫家兔获得了抗血清,间接ELISA测定显示一份抗血清的效价为1∶16000,另一份为1∶32000。本研究制备的抗血清为进行转基因植物中PyTPS基因翻译产物的免疫学检测奠定了基础。
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关键词
PyTPS基因
原核表达
镍离子亲和层析
重组蛋白
抗血清
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职称材料
题名
镍离子亲和层析介质的制备及其用于组氨酸标记蛋白质的纯化
被引量：
9
1
作者
夏海锋
张显
金雄华
刘婷婷
郑志永
饶志明
机构
江南大学工业生物技术教育部重点实验室
出处
《江南大学学报（自然科学版）》
CAS
2010年第6期685-689,共5页
基金
国家自然科学基金项目(30970056)
国家863计划项目(2007AA02Z207)
+1 种基金
江苏省自然科学基金项目(BK2009516)
江南大学自主科研基金项目(JUSRP11012)
文摘
以交联琼脂糖微球为基质,通过环氧氯丙烷活化,偶联亚胺二乙酸并螯合N i2+,制备得到一种镍离子亲和层析介质。结果发现,在强碱条件下环氧活化率达到了38.0μmol/mL,最终N i2+配基密度达到了30.9μmol/mL,偶联效率为81.3%。利用得到的镍离子亲和介质对基因工程大肠杆菌表达的组氨酸标记3-羟基丁酮还原酶进行了一步层析纯化,酶活回收率达到了58.8%,纯化倍数为2.1,蛋白纯度在85%左右,纯化效果与常用商品介质基本相当。
关键词
琼脂糖微球
镍离子亲和层析
组氨酸标记
克隆表达
纯化
Keywords
agrose particles
Ni affinity chromatographic adsorbent
his-tag
clone and express
purification
分类号
O647.316.2 [理学—物理化学]
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职称材料
题名
带信号肽DsbA-胸腺素α_1融合蛋白的表达及其分离纯化
2
作者
郑小玲
林陈水
倪建良
夏楠
机构
浙江工业大学药学院
出处
《浙江工业大学学报》
CAS
2007年第6期613-616,共4页
基金
浙江省科技厅资助项目(2005C33031)
文摘
以构建好的人胸腺素α1基因工程菌为研究材料,研究影响DsbA-胸腺素α1融合蛋白分泌效率的因素,优化信号肽酶表达得到阻遏的培养条件,获得含带信号肽DsbA-胸腺素α1融合蛋白的菌体,破碎细胞后利用疏水层析与Ni2+螯合亲和层析进行目标蛋白分离纯化,获得较高纯度底物蛋白(信号肽DsbA-胸腺素α1融合蛋白,其分子量约为34 kD),为进一步研究及分离纯化DsbA信号肽酶创造条件.
关键词
融合蛋白
信号肽
疏水
层析
镍离子亲和层析
Keywords
fusion protein
signal peptide
hydrophobic interaction chromatography
nickel affinity chromatograph
分类号
TQ936.21 [化学工程]
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职称材料
题名
条斑紫菜TPS基因0.6Kb片段的原核表达及抗血清的制备
3
作者
孟庆芹
王斌
徐丽娟
孙牧君
郭宝太
机构
青岛农业大学生命科学学院
出处
《青岛农业大学学报（自然科学版）》
2013年第4期295-299,共5页
基金
山东省良种工程马铃薯番茄资源创新利用研究
文摘
以pET22b为起始载体,构建了条斑紫菜6-磷酸海藻糖合成酶基因(PyTPS)0.6Kb片段的原核表达载体,并命名为pET22b-PyTPS0.6。重组菌BL21(pET22b-PyTPS0.6)经ITPG诱导后,SDS-PAGE分析显示菌体总蛋白的电泳图谱上有分子量约为23kDa的特异性蛋白条带,即PyTPS基因0.6Kb片段得到了原核表达。用溶菌酶裂解细菌提取包涵体,再利用镍离子亲和层析柱从包涵体中纯化出TPS重组蛋白。用获得的高纯度重组蛋白作抗原免疫家兔获得了抗血清,间接ELISA测定显示一份抗血清的效价为1∶16000,另一份为1∶32000。本研究制备的抗血清为进行转基因植物中PyTPS基因翻译产物的免疫学检测奠定了基础。
关键词
PyTPS基因
原核表达
镍离子亲和层析
重组蛋白
抗血清
Keywords
PyTPS gene
prokaryotic expression
nickel ion affinity chromatography
recombinant protein
antiserum
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
S852.43 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
镍离子亲和层析介质的制备及其用于组氨酸标记蛋白质的纯化
夏海锋
张显
金雄华
刘婷婷
郑志永
饶志明
《江南大学学报（自然科学版）》
CAS
2010
9
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
带信号肽DsbA-胸腺素α_1融合蛋白的表达及其分离纯化
郑小玲
林陈水
倪建良
夏楠
《浙江工业大学学报》
CAS
2007
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
条斑紫菜TPS基因0.6Kb片段的原核表达及抗血清的制备
孟庆芹
王斌
徐丽娟
孙牧君
郭宝太
《青岛农业大学学报（自然科学版）》
2013
0
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职称材料
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