目的制备高效价、高特异性的抗人肌红蛋白（MYO）单克隆抗体（m Ab）,建立ELISA双抗体夹心法检测人血清中MYO。方法用天然的MYO进行免疫,用杂交瘤技术获得稳定分泌抗人MYO m Ab的细胞株;制备腹水型m Ab,经亲和纯化后进行抗体特性鉴定;...目的制备高效价、高特异性的抗人肌红蛋白（MYO）单克隆抗体（m Ab）,建立ELISA双抗体夹心法检测人血清中MYO。方法用天然的MYO进行免疫,用杂交瘤技术获得稳定分泌抗人MYO m Ab的细胞株;制备腹水型m Ab,经亲和纯化后进行抗体特性鉴定;确定最佳配对组合并建立双抗体夹心ELISA一步法,对血清样本进行检测,并与进口试剂盒进行比较。结果共筛选出9株能稳定分泌m Ab的细胞株,其中2M1、3M4、5M7、10M4亲和纯化后效价达到（1.0-2.6）×10^6（A450约为1.0时的抗体稀释倍数）。抗体配对共筛选出3对能进行夹心配对的抗体（2M1/HRP-3M4、5M7/HRP-3M4、10M4/HRP-5M7）,其中5M7/HRP-3M4这个配对有较高的灵敏度和较大的线性范围;利用最佳配对组合5M7/HRP-3M4建立标准曲线,其线性范围为（25-1000）ng/m L,优于进口试剂盒的线性范围（25-500）ng/m L;样本检测结果显示,自制试剂盒的阳性检出率为95%（19/20）,阴性检出率为100%（40/40）。结论获得了2株高特异性,高亲和力的抗人MYO m Ab,建立了双抗体夹心ELISA一步法,为ELISA试剂盒的研制奠定了基础。展开更多
文摘目的制备高效价、高特异性的抗人肌红蛋白（MYO）单克隆抗体（m Ab）,建立ELISA双抗体夹心法检测人血清中MYO。方法用天然的MYO进行免疫,用杂交瘤技术获得稳定分泌抗人MYO m Ab的细胞株;制备腹水型m Ab,经亲和纯化后进行抗体特性鉴定;确定最佳配对组合并建立双抗体夹心ELISA一步法,对血清样本进行检测,并与进口试剂盒进行比较。结果共筛选出9株能稳定分泌m Ab的细胞株,其中2M1、3M4、5M7、10M4亲和纯化后效价达到（1.0-2.6）×10^6（A450约为1.0时的抗体稀释倍数）。抗体配对共筛选出3对能进行夹心配对的抗体（2M1/HRP-3M4、5M7/HRP-3M4、10M4/HRP-5M7）,其中5M7/HRP-3M4这个配对有较高的灵敏度和较大的线性范围;利用最佳配对组合5M7/HRP-3M4建立标准曲线,其线性范围为（25-1000）ng/m L,优于进口试剂盒的线性范围（25-500）ng/m L;样本检测结果显示,自制试剂盒的阳性检出率为95%（19/20）,阴性检出率为100%（40/40）。结论获得了2株高特异性,高亲和力的抗人MYO m Ab,建立了双抗体夹心ELISA一步法,为ELISA试剂盒的研制奠定了基础。
