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卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似蛋白(ZnT-7-like)的基因克隆、抗体制备及差异表达
1
作者
沈杰
刘振国
+1 位作者
沈芳
吉挺
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期1117-1126,共10页
【目的】本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂Apis mellifera carnica锌转运蛋白-7相似蛋白(zinc transporter 7-like,ZnT-7-like)基因,制备ZnT-7-like多克隆抗体,了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况。【方法】运用RT-PCR法从...
【目的】本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂Apis mellifera carnica锌转运蛋白-7相似蛋白(zinc transporter 7-like,ZnT-7-like)基因,制备ZnT-7-like多克隆抗体,了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况。【方法】运用RT-PCR法从卡尼鄂拉蜂王浆腺总RNA中扩增ZnT-7-like基因,进行生物信息学分析,为避开跨膜结构的干扰,选择克隆其部分序列(273 bp)作为多肽免疫序列。将其亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,转入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达获得融合蛋白,然后将融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,分别用间接ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性,最后采用实时荧光定量RT-PCR以及Western blot技术检测该基因在不同日龄成虫王浆腺中的相对表达量。【结果】克隆得到卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因,大小为1 065 bp。SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达;制备的多克隆抗体效价高达1∶64 000,且具有很高的特异性。ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂5个日龄成虫中的转录情况存在较大差异,表现为3日龄成虫中的表达量极显著高于其他日龄(P<0.01),12日龄表达量最低,其他日龄间表达量两两差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);ZnT-7-like蛋白表达与转录水平基本一致。【结论】成功克隆了卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因,制备了兔抗蜂ZnT-7-like多克隆抗体,并在转录和翻译两个水平上测定了ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的相对表达量。这些结果为深入研究卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因的功能奠定了基础。
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关键词
卡尼鄂拉蜂
王浆腺
锌转运蛋白-7相似蛋白
基因克隆
抗体制备
差异表达
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职称材料
蓝靛果花色苷对高脂血症大鼠肝脏内与胆固醇代谢相关基因的作用
被引量：
14
2
作者
于伟
张桂芳
+3 位作者
甄井龙
宋雪建
迟晓星
王振宇
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018年第17期171-176,共6页
目的:研究蓝靛果花色苷对高脂血症大鼠肝脏肝X受体(liver X receptorα,LXRα)、B族I型清道夫受体(scavenger receptor class B,type I,SR-BI)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G5(ATP-binding cassette transporter G5,ABCG5)、过氧化物酶体...
目的:研究蓝靛果花色苷对高脂血症大鼠肝脏肝X受体(liver X receptorα,LXRα)、B族I型清道夫受体(scavenger receptor class B,type I,SR-BI)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G5(ATP-binding cassette transporter G5,ABCG5)、过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)及胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7a1)基因表达的影响。方法:选择2月龄雄性Wistar大鼠60只,将大鼠随机分为6组,其中10只给予普通饲料,其余50只给予高脂饲料。30 d造模成功后,分别建立基础饲料正常对照组(ND,灌胃1.2 g/(kg·d)生理盐水)、高脂模型对照组(HFD,灌胃1.2 g/(kg·d)生理盐水)、阳性对照组(灌胃10 mg/(kg·d)辛伐他汀片)和蓝靛果花色苷低(HFD+L)、中(HFD+M)、高(HFD+H)剂量组(分别灌胃4.0、40.0、120.0 mg/(kg·d)蓝靛果花色苷),持续28 d。利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测大鼠肝脏组织中LXRα、SR-BI、ABCG5、PPARγ及CYP7a1 mRNA的表达情况。结果:经蓝靛果花色苷干预后,与HFD组相比:蓝靛果花色苷各剂量组肝脏中SR-BI、ABCG5 m RNA表达几乎不受影响,且无显著性差异(P>0.05);HFD+M、H F D+H组LXRα、CYP7a1 mRNA表达升高且差异极显著(P<0.0 1);H F D+L、HFD+M、HFD+H组PPARγm RNA表达降低且差异极显著(P<0.01)。结论:蓝靛果花色苷通过提高高脂血症大鼠肝脏内LXRα、CYP7a1 m RNA表达,降低PPARγ mRNA表达来调节高脂血症大鼠的血脂水平,预防动脉硬化的发生。
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关键词
蓝靛果
蓝靛果花色苷
高脂血症大鼠
肝X受体
B族I型清道夫受体
三磷酸腺苷结合盒
转运
蛋白
G5
过氧化物酶体增殖物激活受体γ
胆固醇
7
Α
-
羟化酶
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职称材料
题名
卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似蛋白(ZnT-7-like)的基因克隆、抗体制备及差异表达
1
作者
沈杰
刘振国
沈芳
吉挺
机构
扬州大学动物科学与技术学院
出处
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期1117-1126,共10页
基金
国家蜂产业技术体系(NYCYTX-43)
国家自然科学基金项目(31172272)
文摘
【目的】本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂Apis mellifera carnica锌转运蛋白-7相似蛋白(zinc transporter 7-like,ZnT-7-like)基因,制备ZnT-7-like多克隆抗体,了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况。【方法】运用RT-PCR法从卡尼鄂拉蜂王浆腺总RNA中扩增ZnT-7-like基因,进行生物信息学分析,为避开跨膜结构的干扰,选择克隆其部分序列(273 bp)作为多肽免疫序列。将其亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,转入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达获得融合蛋白,然后将融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,分别用间接ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性,最后采用实时荧光定量RT-PCR以及Western blot技术检测该基因在不同日龄成虫王浆腺中的相对表达量。【结果】克隆得到卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因,大小为1 065 bp。SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达;制备的多克隆抗体效价高达1∶64 000,且具有很高的特异性。ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂5个日龄成虫中的转录情况存在较大差异,表现为3日龄成虫中的表达量极显著高于其他日龄(P<0.01),12日龄表达量最低,其他日龄间表达量两两差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);ZnT-7-like蛋白表达与转录水平基本一致。【结论】成功克隆了卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因,制备了兔抗蜂ZnT-7-like多克隆抗体,并在转录和翻译两个水平上测定了ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的相对表达量。这些结果为深入研究卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因的功能奠定了基础。
关键词
卡尼鄂拉蜂
王浆腺
锌转运蛋白-7相似蛋白
基因克隆
抗体制备
差异表达
Keywords
Apis mellifera carnica
hypopharyngeal gland
zinc transporter
7
-
like （ ZnT
-
7
-
like ）
genecloning
antibody preparation
differential expression
分类号
Q965 [生物学—昆虫学]
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职称材料
题名
蓝靛果花色苷对高脂血症大鼠肝脏内与胆固醇代谢相关基因的作用
被引量：
14
2
作者
于伟
张桂芳
甄井龙
宋雪建
迟晓星
王振宇
机构
东北林业大学林学院
黑龙江八一农垦大学国家杂粮工程技术研究中心
黑龙江八一农垦大学食品学院
哈尔滨工业大学食品科学与工程学院
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018年第17期171-176,共6页
基金
黑龙江省教育厅科学技术研究项目(12541600)
文摘
目的:研究蓝靛果花色苷对高脂血症大鼠肝脏肝X受体(liver X receptorα,LXRα)、B族I型清道夫受体(scavenger receptor class B,type I,SR-BI)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G5(ATP-binding cassette transporter G5,ABCG5)、过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)及胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7a1)基因表达的影响。方法:选择2月龄雄性Wistar大鼠60只,将大鼠随机分为6组,其中10只给予普通饲料,其余50只给予高脂饲料。30 d造模成功后,分别建立基础饲料正常对照组(ND,灌胃1.2 g/(kg·d)生理盐水)、高脂模型对照组(HFD,灌胃1.2 g/(kg·d)生理盐水)、阳性对照组(灌胃10 mg/(kg·d)辛伐他汀片)和蓝靛果花色苷低(HFD+L)、中(HFD+M)、高(HFD+H)剂量组(分别灌胃4.0、40.0、120.0 mg/(kg·d)蓝靛果花色苷),持续28 d。利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测大鼠肝脏组织中LXRα、SR-BI、ABCG5、PPARγ及CYP7a1 mRNA的表达情况。结果:经蓝靛果花色苷干预后,与HFD组相比:蓝靛果花色苷各剂量组肝脏中SR-BI、ABCG5 m RNA表达几乎不受影响,且无显著性差异(P>0.05);HFD+M、H F D+H组LXRα、CYP7a1 mRNA表达升高且差异极显著(P<0.0 1);H F D+L、HFD+M、HFD+H组PPARγm RNA表达降低且差异极显著(P<0.01)。结论:蓝靛果花色苷通过提高高脂血症大鼠肝脏内LXRα、CYP7a1 m RNA表达,降低PPARγ mRNA表达来调节高脂血症大鼠的血脂水平,预防动脉硬化的发生。
关键词
蓝靛果
蓝靛果花色苷
高脂血症大鼠
肝X受体
B族I型清道夫受体
三磷酸腺苷结合盒
转运
蛋白
G5
过氧化物酶体增殖物激活受体γ
胆固醇
7
Α
-
羟化酶
Keywords
Lonicera caerulea
Lonicera caerulea anthocyan
hyperlipidemic rats
liver X receptorα
scavenger receptor class B,type I
ATP
-
binding cassette transporter G5
peroxisome proliferator
-
activated receptorγ
cholesterol
7
α
-
hydroxylase
分类号
TS201.4 [轻工技术与工程—食品科学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似蛋白(ZnT-7-like)的基因克隆、抗体制备及差异表达
沈杰
刘振国
沈芳
吉挺
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
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职称材料
2
蓝靛果花色苷对高脂血症大鼠肝脏内与胆固醇代谢相关基因的作用
于伟
张桂芳
甄井龙
宋雪建
迟晓星
王振宇
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018
14
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