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锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)抑制小鼠RAW264.7细胞增殖以及吞噬体-溶酶体的融合
被引量:
4
1
作者
方陈城
张继明
+5 位作者
卢楠
李鹏
樊宇
康月茜
杨春
何永林
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第10期1317-1320,1326,共5页
目的观察卡介苗(BCG)的锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖以及吞噬体-溶酶体融合的影响。方法在大肠杆菌BL21(DE3)中克隆表达Zmp1,用金属螯合磁珠纯化;用纯化的Zmp1处理RAW264.7细胞,采用CCK-8法检测(0...
目的观察卡介苗(BCG)的锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖以及吞噬体-溶酶体融合的影响。方法在大肠杆菌BL21(DE3)中克隆表达Zmp1,用金属螯合磁珠纯化;用纯化的Zmp1处理RAW264.7细胞,采用CCK-8法检测(0、24、48、72、96)h的细胞增殖情况,采用流式细胞术检测细胞周期分布;用减毒沙门菌感染RAW264.7细胞诱导吞噬体形成后,用Zmp1处理细胞,在吞噬体内的减毒沙门菌和溶酶体的溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)分别用相应Alexa Fluor(R)350抗沙门菌抗体(蓝色荧光)和Cy5抗LAMP1抗体(红色荧光)标记,通过荧光显微镜观察RAW264.7细胞内两种荧光,将其重合分析吞噬体与溶酶体融合情况。结果用Zmp1蛋白处理细胞48 h后,细胞增殖活性明显降低;处理48 h后,细胞周期中G1期细胞比例下降,S期比例增高;采用双荧光标记感染沙门菌的RAW264.7细胞,Zmp1处理后显示紫色荧光的吞噬溶酶体融合减少。结论 Zmp1抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞增殖,抑制吞噬体-溶酶体融合。
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关键词
锌
离子
依赖的
金属
蛋白酶
1(
zmp
1)
细胞增殖
吞噬体
溶酶体
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职称材料
结核分枝杆菌锌离子依赖金属蛋白酶的研究进展
2
作者
鞠晓红
王月华
+1 位作者
王瑶
曹亮
《中国动物传染病学报》
北大核心
2024年第6期201-207,共7页
锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)是结核分枝杆菌(MTB)产生的一种分泌型毒力因子,属于M13内肽酶家族。Zmp1功能多样,能阻碍吞噬体成熟、抑制炎症小体活化,使细菌在巨噬细胞内存活,进而诱导细胞坏死、促进MTB播散。同时,Zmp1也具有强烈免疫原...
锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)是结核分枝杆菌(MTB)产生的一种分泌型毒力因子,属于M13内肽酶家族。Zmp1功能多样,能阻碍吞噬体成熟、抑制炎症小体活化,使细菌在巨噬细胞内存活,进而诱导细胞坏死、促进MTB播散。同时,Zmp1也具有强烈免疫原性,通过Th2途径激发高效特异的体液免疫应答,发挥免疫调节作用。因此,Zmp1在MTB的致病、免疫调节等方面发挥关键作用,为抗结核药物研发、疫苗制备、感染检测提供了潜在靶点,极具研究价值。
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关键词
结核分枝杆菌
锌
离子
金属
蛋白酶
1(
zmp
1)
Rv0
1
98c
炎症小体
吞噬体成熟
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职称材料
锌离子依赖的金属蛋白酶-1体内抑制分枝杆菌的抗原处理
被引量:
1
3
作者
吴宣艳
李鹏
+3 位作者
卢楠
方陈城
杨春
何永林
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第9期1180-1186,共7页
目的:在小鼠体内观察卡介苗的锌离子依赖的金属蛋白酶-1(Zinc metalloprotease-1,Zmp1)对结核分枝杆菌抗原PPE68处理的影响。方法:6~8周龄BALB/c小鼠随机分为5组,分别为p Bud CE4.1空质粒对照组(n=7)、表达PPE68抗原肽的p BudCE4.1-PPE...
目的:在小鼠体内观察卡介苗的锌离子依赖的金属蛋白酶-1(Zinc metalloprotease-1,Zmp1)对结核分枝杆菌抗原PPE68处理的影响。方法:6~8周龄BALB/c小鼠随机分为5组,分别为p Bud CE4.1空质粒对照组(n=7)、表达PPE68抗原肽的p BudCE4.1-PPE68p质粒组(n=9)、表达PPE68抗原的p Bud CE4.1-PPE68质粒组(n=9)、PPE68抗原和Zmp1共表达的p Bud CE4.1-PPE68-Zmp1质粒组(n=10)及PPE68抗原肽和Zmp1共表达的p Bud CE4.1-PPE68p-Zmp1质粒组(n=8)。各组质粒电转化减毒沙门菌株SL7207构建相应的重组沙门菌。以灌胃方式将各组沙门菌免疫小鼠3周。收集小鼠血液和肺肠灌洗液,采用ELISA法测定血清中IFN-γ、IL-12含量及肺与肠道s Ig A的含量;分离培养脾细胞,用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖情况。结果:与PPE68抗原组相比,PPE68和Zmp1共表达组的IFN-γ(117.29±16.86,P=0.034)、IL-12(40.46±7.11,P=0.0037)、淋巴细胞刺激指数SI(3.30±0.49,P=0.004)均降低;与PPE68抗原肽组相比,PPE68抗原肽和Zmp1共表达组相应因子含量下降不明显,IFN-γ(132.75±28.40,P=0.070)、IL-12(55.43±11.78,P=0.198)、SI(4.70±1.57,P=0.124)。结论:卡介苗的Zmp1影响结核分枝杆菌抗原PPE68的处理过程,这可能是影响BCG免疫效果的重要原因。
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关键词
卡介苗
PPE68
锌
离子
依赖的
金属
蛋白酶
-1
抗原处理
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职称材料
锌依赖的金属蛋白酶1促进巨噬细胞凋亡
被引量:
2
4
作者
李鹏
何永林
+1 位作者
张继明
方陈城
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第12期1585-1587,1592,共4页
目的构建锌依赖的金属蛋白酶1(zmp1)基因的真核表达质粒,探讨其对巨噬细胞凋亡的影响。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增zmp1基因;克隆到真核表达质粒p EGFP-N1的多克隆位点中,构建真核表达质粒p EGFP-N1-zmp1并转染RAW2...
目的构建锌依赖的金属蛋白酶1(zmp1)基因的真核表达质粒,探讨其对巨噬细胞凋亡的影响。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增zmp1基因;克隆到真核表达质粒p EGFP-N1的多克隆位点中,构建真核表达质粒p EGFP-N1-zmp1并转染RAW264.7细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,实时定量PCR(qRT-PCR)检测zmp1 mRNA的水平;藻红蛋白标记的膜联素Ⅴ/7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-PE/7-AAD)双染色结合流式细胞术检测Zmp1蛋白对细胞凋亡影响。结果扩增出zmp1基因;真核表达质粒经过XhoⅠ和Bam HⅠ双酶切及基因测序鉴定构建成功;转染细胞24 h后,经荧光倒置显微镜观察到绿色荧光;qRT-PCR结果显示转染p EGFP-N1-zmp1的RAW264.7细胞zmp1 mRNA的表达显著升高;转染后48 h,细胞早期凋亡率有所增加。结论在RAW264.7细胞中成功表达了Zmp1并能促进巨噬细胞凋亡。
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关键词
卡介苗
锌
依赖的
金属
蛋白酶
1(
zmp
1)
真核表达
RAW264.7细胞
细胞凋亡
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职称材料
题名
锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)抑制小鼠RAW264.7细胞增殖以及吞噬体-溶酶体的融合
被引量:
4
1
作者
方陈城
张继明
卢楠
李鹏
樊宇
康月茜
杨春
何永林
机构
重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心病原生物学教研室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第10期1317-1320,1326,共5页
基金
重庆市自然科学基金(cstc2012A10023)
重庆市教委科研基金(KJ1500203)
文摘
目的观察卡介苗(BCG)的锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖以及吞噬体-溶酶体融合的影响。方法在大肠杆菌BL21(DE3)中克隆表达Zmp1,用金属螯合磁珠纯化;用纯化的Zmp1处理RAW264.7细胞,采用CCK-8法检测(0、24、48、72、96)h的细胞增殖情况,采用流式细胞术检测细胞周期分布;用减毒沙门菌感染RAW264.7细胞诱导吞噬体形成后,用Zmp1处理细胞,在吞噬体内的减毒沙门菌和溶酶体的溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)分别用相应Alexa Fluor(R)350抗沙门菌抗体(蓝色荧光)和Cy5抗LAMP1抗体(红色荧光)标记,通过荧光显微镜观察RAW264.7细胞内两种荧光,将其重合分析吞噬体与溶酶体融合情况。结果用Zmp1蛋白处理细胞48 h后,细胞增殖活性明显降低;处理48 h后,细胞周期中G1期细胞比例下降,S期比例增高;采用双荧光标记感染沙门菌的RAW264.7细胞,Zmp1处理后显示紫色荧光的吞噬溶酶体融合减少。结论 Zmp1抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞增殖,抑制吞噬体-溶酶体融合。
关键词
锌
离子
依赖的
金属
蛋白酶
1(
zmp
1)
细胞增殖
吞噬体
溶酶体
Keywords
zinc-dependent metalloprotease
1
(
zmp
1
)
cell proliferation
phagosome
lysosome
分类号
R378.91 [医药卫生—病原生物学]
R392.12 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
结核分枝杆菌锌离子依赖金属蛋白酶的研究进展
2
作者
鞠晓红
王月华
王瑶
曹亮
机构
吉林医药学院
出处
《中国动物传染病学报》
北大核心
2024年第6期201-207,共7页
文摘
锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)是结核分枝杆菌(MTB)产生的一种分泌型毒力因子,属于M13内肽酶家族。Zmp1功能多样,能阻碍吞噬体成熟、抑制炎症小体活化,使细菌在巨噬细胞内存活,进而诱导细胞坏死、促进MTB播散。同时,Zmp1也具有强烈免疫原性,通过Th2途径激发高效特异的体液免疫应答,发挥免疫调节作用。因此,Zmp1在MTB的致病、免疫调节等方面发挥关键作用,为抗结核药物研发、疫苗制备、感染检测提供了潜在靶点,极具研究价值。
关键词
结核分枝杆菌
锌
离子
金属
蛋白酶
1(
zmp
1)
Rv0
1
98c
炎症小体
吞噬体成熟
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
zinc-dependent metalloprotease-
1
(
zmp
1
)
Rv0
1
98c
inflammasome
phagosome maturation
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
锌离子依赖的金属蛋白酶-1体内抑制分枝杆菌的抗原处理
被引量:
1
3
作者
吴宣艳
李鹏
卢楠
方陈城
杨春
何永林
机构
重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心病原生物学教研室
出处
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第9期1180-1186,共7页
基金
重庆市自然科学基金资助项目(编号:cstc2016jcyj A0196
cstc2012jj A10023)
重庆市教委资助项目(编号:KJ1500203)
文摘
目的:在小鼠体内观察卡介苗的锌离子依赖的金属蛋白酶-1(Zinc metalloprotease-1,Zmp1)对结核分枝杆菌抗原PPE68处理的影响。方法:6~8周龄BALB/c小鼠随机分为5组,分别为p Bud CE4.1空质粒对照组(n=7)、表达PPE68抗原肽的p BudCE4.1-PPE68p质粒组(n=9)、表达PPE68抗原的p Bud CE4.1-PPE68质粒组(n=9)、PPE68抗原和Zmp1共表达的p Bud CE4.1-PPE68-Zmp1质粒组(n=10)及PPE68抗原肽和Zmp1共表达的p Bud CE4.1-PPE68p-Zmp1质粒组(n=8)。各组质粒电转化减毒沙门菌株SL7207构建相应的重组沙门菌。以灌胃方式将各组沙门菌免疫小鼠3周。收集小鼠血液和肺肠灌洗液,采用ELISA法测定血清中IFN-γ、IL-12含量及肺与肠道s Ig A的含量;分离培养脾细胞,用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖情况。结果:与PPE68抗原组相比,PPE68和Zmp1共表达组的IFN-γ(117.29±16.86,P=0.034)、IL-12(40.46±7.11,P=0.0037)、淋巴细胞刺激指数SI(3.30±0.49,P=0.004)均降低;与PPE68抗原肽组相比,PPE68抗原肽和Zmp1共表达组相应因子含量下降不明显,IFN-γ(132.75±28.40,P=0.070)、IL-12(55.43±11.78,P=0.198)、SI(4.70±1.57,P=0.124)。结论:卡介苗的Zmp1影响结核分枝杆菌抗原PPE68的处理过程,这可能是影响BCG免疫效果的重要原因。
关键词
卡介苗
PPE68
锌
离子
依赖的
金属
蛋白酶
-1
抗原处理
Keywords
Bacillus Calmette-Guerin
PPE68
Zinc metalloprotease-
1
antigen processing
分类号
R378.91 [医药卫生—病原生物学]
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
锌依赖的金属蛋白酶1促进巨噬细胞凋亡
被引量:
2
4
作者
李鹏
何永林
张继明
方陈城
机构
重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第12期1585-1587,1592,共4页
基金
重庆市自然科学基金(cstc2012jj A10023)
文摘
目的构建锌依赖的金属蛋白酶1(zmp1)基因的真核表达质粒,探讨其对巨噬细胞凋亡的影响。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增zmp1基因;克隆到真核表达质粒p EGFP-N1的多克隆位点中,构建真核表达质粒p EGFP-N1-zmp1并转染RAW264.7细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,实时定量PCR(qRT-PCR)检测zmp1 mRNA的水平;藻红蛋白标记的膜联素Ⅴ/7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-PE/7-AAD)双染色结合流式细胞术检测Zmp1蛋白对细胞凋亡影响。结果扩增出zmp1基因;真核表达质粒经过XhoⅠ和Bam HⅠ双酶切及基因测序鉴定构建成功;转染细胞24 h后,经荧光倒置显微镜观察到绿色荧光;qRT-PCR结果显示转染p EGFP-N1-zmp1的RAW264.7细胞zmp1 mRNA的表达显著升高;转染后48 h,细胞早期凋亡率有所增加。结论在RAW264.7细胞中成功表达了Zmp1并能促进巨噬细胞凋亡。
关键词
卡介苗
锌
依赖的
金属
蛋白酶
1(
zmp
1)
真核表达
RAW264.7细胞
细胞凋亡
Keywords
BCG
zinc-dependent metalloprotease
1
(
zmp
1
)
eukaryotic expression
RAW264
7 cells
apoptosis
分类号
R392.12 [医药卫生—免疫学]
R378.911 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)抑制小鼠RAW264.7细胞增殖以及吞噬体-溶酶体的融合
方陈城
张继明
卢楠
李鹏
樊宇
康月茜
杨春
何永林
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
4
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职称材料
2
结核分枝杆菌锌离子依赖金属蛋白酶的研究进展
鞠晓红
王月华
王瑶
曹亮
《中国动物传染病学报》
北大核心
2024
0
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职称材料
3
锌离子依赖的金属蛋白酶-1体内抑制分枝杆菌的抗原处理
吴宣艳
李鹏
卢楠
方陈城
杨春
何永林
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
1
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职称材料
4
锌依赖的金属蛋白酶1促进巨噬细胞凋亡
李鹏
何永林
张继明
方陈城
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015
2
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