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锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)抑制小鼠RAW264.7细胞增殖以及吞噬体-溶酶体的融合 被引量:4
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作者 方陈城 张继明 +5 位作者 卢楠 李鹏 樊宇 康月茜 杨春 何永林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1317-1320,1326,共5页
目的观察卡介苗(BCG)的锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖以及吞噬体-溶酶体融合的影响。方法在大肠杆菌BL21(DE3)中克隆表达Zmp1,用金属螯合磁珠纯化;用纯化的Zmp1处理RAW264.7细胞,采用CCK-8法检测(0... 目的观察卡介苗(BCG)的锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)对RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖以及吞噬体-溶酶体融合的影响。方法在大肠杆菌BL21(DE3)中克隆表达Zmp1,用金属螯合磁珠纯化;用纯化的Zmp1处理RAW264.7细胞,采用CCK-8法检测(0、24、48、72、96)h的细胞增殖情况,采用流式细胞术检测细胞周期分布;用减毒沙门菌感染RAW264.7细胞诱导吞噬体形成后,用Zmp1处理细胞,在吞噬体内的减毒沙门菌和溶酶体的溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)分别用相应Alexa Fluor(R)350抗沙门菌抗体(蓝色荧光)和Cy5抗LAMP1抗体(红色荧光)标记,通过荧光显微镜观察RAW264.7细胞内两种荧光,将其重合分析吞噬体与溶酶体融合情况。结果用Zmp1蛋白处理细胞48 h后,细胞增殖活性明显降低;处理48 h后,细胞周期中G1期细胞比例下降,S期比例增高;采用双荧光标记感染沙门菌的RAW264.7细胞,Zmp1处理后显示紫色荧光的吞噬溶酶体融合减少。结论 Zmp1抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞增殖,抑制吞噬体-溶酶体融合。 展开更多
关键词 离子依赖的金属蛋白酶1(zmp1) 细胞增殖 吞噬体 溶酶体
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结核分枝杆菌锌离子依赖金属蛋白酶的研究进展
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作者 鞠晓红 王月华 +1 位作者 王瑶 曹亮 《中国动物传染病学报》 北大核心 2024年第6期201-207,共7页
锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)是结核分枝杆菌(MTB)产生的一种分泌型毒力因子,属于M13内肽酶家族。Zmp1功能多样,能阻碍吞噬体成熟、抑制炎症小体活化,使细菌在巨噬细胞内存活,进而诱导细胞坏死、促进MTB播散。同时,Zmp1也具有强烈免疫原... 锌离子依赖金属蛋白酶1(Zmp1)是结核分枝杆菌(MTB)产生的一种分泌型毒力因子,属于M13内肽酶家族。Zmp1功能多样,能阻碍吞噬体成熟、抑制炎症小体活化,使细菌在巨噬细胞内存活,进而诱导细胞坏死、促进MTB播散。同时,Zmp1也具有强烈免疫原性,通过Th2途径激发高效特异的体液免疫应答,发挥免疫调节作用。因此,Zmp1在MTB的致病、免疫调节等方面发挥关键作用,为抗结核药物研发、疫苗制备、感染检测提供了潜在靶点,极具研究价值。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 离子金属蛋白酶1(zmp1) Rv0198c 炎症小体 吞噬体成熟
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锌依赖的金属蛋白酶1促进巨噬细胞凋亡 被引量:2
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作者 李鹏 何永林 +1 位作者 张继明 方陈城 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1585-1587,1592,共4页
目的构建锌依赖的金属蛋白酶1(zmp1)基因的真核表达质粒,探讨其对巨噬细胞凋亡的影响。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增zmp1基因;克隆到真核表达质粒p EGFP-N1的多克隆位点中,构建真核表达质粒p EGFP-N1-zmp1并转染RAW2... 目的构建锌依赖的金属蛋白酶1(zmp1)基因的真核表达质粒,探讨其对巨噬细胞凋亡的影响。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增zmp1基因;克隆到真核表达质粒p EGFP-N1的多克隆位点中,构建真核表达质粒p EGFP-N1-zmp1并转染RAW264.7细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,实时定量PCR(qRT-PCR)检测zmp1 mRNA的水平;藻红蛋白标记的膜联素Ⅴ/7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-PE/7-AAD)双染色结合流式细胞术检测Zmp1蛋白对细胞凋亡影响。结果扩增出zmp1基因;真核表达质粒经过XhoⅠ和Bam HⅠ双酶切及基因测序鉴定构建成功;转染细胞24 h后,经荧光倒置显微镜观察到绿色荧光;qRT-PCR结果显示转染p EGFP-N1-zmp1的RAW264.7细胞zmp1 mRNA的表达显著升高;转染后48 h,细胞早期凋亡率有所增加。结论在RAW264.7细胞中成功表达了Zmp1并能促进巨噬细胞凋亡。 展开更多
关键词 卡介苗 依赖的金属蛋白酶1(zmp1) 真核表达 RAW264.7细胞 细胞凋亡
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锌离子依赖的金属蛋白酶-1体内抑制分枝杆菌的抗原处理 被引量:1
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作者 吴宣艳 李鹏 +3 位作者 卢楠 方陈城 杨春 何永林 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1180-1186,共7页
目的:在小鼠体内观察卡介苗的锌离子依赖的金属蛋白酶-1(Zinc metalloprotease-1,Zmp1)对结核分枝杆菌抗原PPE68处理的影响。方法:6~8周龄BALB/c小鼠随机分为5组,分别为p Bud CE4.1空质粒对照组(n=7)、表达PPE68抗原肽的p BudCE4.1-PPE... 目的:在小鼠体内观察卡介苗的锌离子依赖的金属蛋白酶-1(Zinc metalloprotease-1,Zmp1)对结核分枝杆菌抗原PPE68处理的影响。方法:6~8周龄BALB/c小鼠随机分为5组,分别为p Bud CE4.1空质粒对照组(n=7)、表达PPE68抗原肽的p BudCE4.1-PPE68p质粒组(n=9)、表达PPE68抗原的p Bud CE4.1-PPE68质粒组(n=9)、PPE68抗原和Zmp1共表达的p Bud CE4.1-PPE68-Zmp1质粒组(n=10)及PPE68抗原肽和Zmp1共表达的p Bud CE4.1-PPE68p-Zmp1质粒组(n=8)。各组质粒电转化减毒沙门菌株SL7207构建相应的重组沙门菌。以灌胃方式将各组沙门菌免疫小鼠3周。收集小鼠血液和肺肠灌洗液,采用ELISA法测定血清中IFN-γ、IL-12含量及肺与肠道s Ig A的含量;分离培养脾细胞,用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖情况。结果:与PPE68抗原组相比,PPE68和Zmp1共表达组的IFN-γ(117.29±16.86,P=0.034)、IL-12(40.46±7.11,P=0.0037)、淋巴细胞刺激指数SI(3.30±0.49,P=0.004)均降低;与PPE68抗原肽组相比,PPE68抗原肽和Zmp1共表达组相应因子含量下降不明显,IFN-γ(132.75±28.40,P=0.070)、IL-12(55.43±11.78,P=0.198)、SI(4.70±1.57,P=0.124)。结论:卡介苗的Zmp1影响结核分枝杆菌抗原PPE68的处理过程,这可能是影响BCG免疫效果的重要原因。 展开更多
关键词 卡介苗 PPE68 离子依赖的金属蛋白酶-1 抗原处理
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干涉抑制Id1对前列腺癌PC3细胞的体内外影响
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作者 于小玲 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第A10期2009-2009,共1页
关键词 ID1 PC3 内外影响 激素非依赖 直接注射 肿瘤侵袭 裸鼠移植瘤 基因表达 基质金属蛋白酶 侵袭力
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人oxLDL自身免疫复合物的体外致动脉粥样硬化作用 被引量:3
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作者 梁中书 杨侃 +5 位作者 曹宇 欧阳茂 张志辉 李静乐 唐晓鸿 张梦玺 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期202-206,共5页
目的:观察oxLDL自身免疫复合物对U937巨噬样细胞泡沫化和活化的影响,以探讨oxLDL免疫学反应致动脉粥样硬化的机制。方法:采用密度离心法从健康人血浆中提取低密度脂蛋白(LDL),用铜离子氧化成oxLDL;用亲和层析法从136例住院患者血清中提... 目的:观察oxLDL自身免疫复合物对U937巨噬样细胞泡沫化和活化的影响,以探讨oxLDL免疫学反应致动脉粥样硬化的机制。方法:采用密度离心法从健康人血浆中提取低密度脂蛋白(LDL),用铜离子氧化成oxLDL;用亲和层析法从136例住院患者血清中提取oxLDL自身抗体。在体外制成2种形式不同的免疫复合物:聚乙二醇沉淀的不溶性免疫复合物(PEG IC)和RBC吸附的可溶性免疫复合物(RBC IC),把这2种免疫复合物加至U937巨噬样细胞的培养基中,以oxLDL作阳性对照,并用热聚合人γ球蛋白(HAGG)封闭Fcγ受体作阻断对照,检测干预后的各组U937巨噬样细胞内胆固醇和胆固醇酯及培养基中基质金属蛋白酶1 (MMP 1 )的水平。结果:RBC IC干预组与RBC吸附oxLDL(RBC oxLDL)干预组比较,U937巨噬样细胞培养基中MMP 1蛋白表达[ (0. 769±0. 030)ng/mlvs(0. 513±0. 034)ng/ml,P<0. 01]和细胞内胆固醇酯蓄积[ (20. 271±1. 668)μg/mgvs(17. 226±1. 298)μg/mg,P<0. 05]明显升高;而在PEG IC组这种作用则更为明显,且呈剂量依赖性。用10mg/ml的HAGG封闭Fcγ受体后,MMP 1的水平下降约71%,其对巨噬样细胞泡沫化和活化的作用都受到明显的抑制。结论:oxLDL自身免疫复合物能够促进巨噬细胞泡沫化和活化, 展开更多
关键词 免疫复合物 OXLDL 动脉粥样硬化作用 体外 FCΓ受体 致动脉粥样硬化 基质金属蛋白酶 MMP-1 U937 低密度脂蛋白 RBC-IC 胆固醇酯 免疫学反应 健康人血浆 亲和层析法 细胞培养基 剂量依赖 泡沫化 自身抗体 住院患者 阳性对照
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