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泥蚶(Tegillarca granosa)cDNA文库的构建及铁结合蛋白基因(Ferritin)序列分析 被引量：14
1
作者 贺静静 李晔 +6 位作者 李太武 苏秀榕 王孟前 李松伟 周军 马斌 李强芳 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期289-295,共7页
取正常泥蚶肌肉组织获得总RNA,纯化mRNA后,利用含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物逆转录合成cDNA第一链,通过LD-PCR合成cDNA双链,经胶回收除去短片段,与pDNR-LIB载体进行连接,电转化到大肠杆菌DH10B中,构建形成原始文库,进行滴度测试和重组率... 取正常泥蚶肌肉组织获得总RNA,纯化mRNA后,利用含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物逆转录合成cDNA第一链,通过LD-PCR合成cDNA双链,经胶回收除去短片段,与pDNR-LIB载体进行连接,电转化到大肠杆菌DH10B中,构建形成原始文库,进行滴度测试和重组率鉴定。结果表明原始文库的滴度为3.17×105cfu/ml,重组率为86.3%,插入片段多在500—2500bp间。随机挑选458个克隆测序,经分析获得94种已知基因及87种未知基因。其中包括铁结合蛋白(Ferritin)的全长cDNA序列。该基因序列全长895bp,5'-端非编码区为163bp,3'-非编码区为213bp,开放阅读框为519bp,编码172个氨基酸。推测其蛋白分子量和等电点分别为20kDa和4.89。氨基酸序列与皱纹盘鲍、太平洋牡蛎、血红扇头蜱、文昌鱼、中华蟾蜍、非洲爪蟾、小家鼠以及人等的同源性有62%—82%。比对结果表明,铁结合蛋白基因在动物进化中高度保守。 展开更多
关键词 CDNA文库 序列分析 泥蚶 铁结合蛋白基因
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大豆铁蛋白(Ferritin)基因家族的克隆与表达 被引量：3
2
作者 陈华涛 陈新 +3 位作者 顾和平 张红梅 袁星星 崔晓艳 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期586-591,共6页
从大豆中克隆到铁蛋白基因家族的13个成员,分别命名为GmFer1;1、GmFer2;1、GmFer2;2、GmFer3;1、GmFer3;2、GmFer7;1、GmFer10;1、GmFer11;1、GmFer14;1、GmFer14;2、GmFer18;1、GmFer18;2和GmFer18;3,它们之间序列相似性介于37.2%～99.... 从大豆中克隆到铁蛋白基因家族的13个成员,分别命名为GmFer1;1、GmFer2;1、GmFer2;2、GmFer3;1、GmFer3;2、GmFer7;1、GmFer10;1、GmFer11;1、GmFer14;1、GmFer14;2、GmFer18;1、GmFer18;2和GmFer18;3,它们之间序列相似性介于37.2%～99.1%,并且具有保守类Ferritin结构域,被聚为3个亚家族(GroupI、II和III)。大豆铁蛋白基因在根、茎、叶和种子中均表达,100μmol/L的柠檬酸铁处理后,大豆铁蛋白基因在根、茎和叶中的表达均受到强烈诱导,表达量显著增强。随着大豆种子的不断发育,大豆铁蛋白基因的表达量呈现出早期积累,后期下降的变化趋势。 展开更多
关键词 大豆 铁蛋白 基因克隆 表达分析
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外源铁蛋白基因(Pea-Fer)对稻米品质性状的影响 被引量：2
3
作者 赵霏 任三娟 +3 位作者 郭泽建 吴建国 包劲松 沈圣泉 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1-5,16,共6页
利用外源豌豆铁蛋白基因(Pea-Fer)的转化系Fer34及其受体亲本粳稻(Oryza sativa ssp.japan-ica)品种秀水11(XS11),经过连续回交和自交,并结合GUS标记基因辅助选择技术,获得了含有Pea-Fer基因的Fer34-XS11。该纯系与原受体亲本秀水11构... 利用外源豌豆铁蛋白基因(Pea-Fer)的转化系Fer34及其受体亲本粳稻(Oryza sativa ssp.japan-ica)品种秀水11(XS11),经过连续回交和自交,并结合GUS标记基因辅助选择技术,获得了含有Pea-Fer基因的Fer34-XS11。该纯系与原受体亲本秀水11构成一对近等基因系。以该对近等基因系为材料,研究外源铁蛋白基因(Pea-Fer)对稻米主要品质性状的影响。结果发现,在稻米外观和蒸煮食用品质方面,转基因品系的外型、垩白、透明度、糊化温度、胶稠度和直链淀粉含量等性状与对照基本相同;在稻米主要营养品质方面,转基因品系除稻米籽粒中铁含量比对照有显著增加以外,其余检测的矿质元素、蛋白质、氨基酸含量等都无显著性差异;在稻米胚乳淀粉及其结构方面,转基因品系的淀粉黏滞性(RVA谱)、米饭质地及其电镜下淀粉粒结构和排列等,均与对照相仿。可见,外源豌豆铁蛋白基因(Pea-Fer)的转入,主要提高了转基因品系稻米籽粒中的铁含量,但并未影响稻米的主要品质性状。 展开更多
关键词 水稻 转基因 豌豆铁蛋白基因 蒸煮食用品质 营养品质 RVA谱 质地性 电镜
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外源铁蛋白基因NtFer1对粳稻生理影响的研究
4
作者 唐鑫华 张磊 +3 位作者 姜廷波 杨传平 高红秀 邹德堂 《安徽农业科学》 CAS 2014年第23期7718-7722,共5页
[目的]验证铁蛋白基因的功能,提高转基因粳稻的含铁量和转基因粳稻对盐胁迫和生物胁迫的抗性。[方法]利用农杆菌介导法将烟草铁蛋白基因NtFer1导入粳稻基因组。[结果]对T0、T1代卡那霉素抗性植株PCR、Southern杂交、Northern杂交和RT-PC... [目的]验证铁蛋白基因的功能,提高转基因粳稻的含铁量和转基因粳稻对盐胁迫和生物胁迫的抗性。[方法]利用农杆菌介导法将烟草铁蛋白基因NtFer1导入粳稻基因组。[结果]对T0、T1代卡那霉素抗性植株PCR、Southern杂交、Northern杂交和RT-PCR检测分析表明,外源基因已整合到粳稻基因组中,并能够稳定遗传表达。转基因粳稻超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性和叶绿素相对含量高于对照,丙二醛(MDA)含量低于对照,其根、叶片和糙米中铁含量均高于对照。接种稻瘟病病菌后转基因植株叶瘟指数低于对照。[结论]转入外源铁蛋白基因NtFer1能够提高粳稻的含铁量和转基因粳稻对盐胁迫和生物胁迫的抗性。 展开更多
关键词 铁蛋白 转基因 粳稻 稻瘟病
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铁死亡相关基因热休克蛋白A5与肝细胞癌因果关系的孟德尔随机化和中介分析
5
作者 崔兵 许铖铖 +3 位作者 徐瑗 陈阿琴 毛朝明 陈跃华 《浙江大学学报(医学版)》 CSCD 北大核心 2024年第6期691-698,共8页
目的:探讨铁死亡相关基因热休克蛋白A5(HSPA5)与肝癌发展的因果关系及其作用机制。方法:采用两步两样本孟德尔随机化(MR)设计评估HSPA5、调节性T细胞及肝癌之间的因果关系。首先通过公开的全基因组关联研究(GWAS)数据库筛选与HSPA5、调... 目的:探讨铁死亡相关基因热休克蛋白A5(HSPA5)与肝癌发展的因果关系及其作用机制。方法:采用两步两样本孟德尔随机化(MR)设计评估HSPA5、调节性T细胞及肝癌之间的因果关系。首先通过公开的全基因组关联研究(GWAS)数据库筛选与HSPA5、调节性T细胞、肝癌相关的单核苷酸多态性作为工具变量,采用MR分析HSPA5对肝癌的直接影响,接着通过两步MR分析调节性T细胞在这一过程中可能的中介作用。同时,以肝癌为暴露因素,HSPA5为结局变量进行了反向MR分析。所有MR分析均以逆方差加权法作为主要的因果关联检验方法,通过MR-Egger、加权中值法、加权众数法和简单众数法验证结果的稳健性,并采用Cochrane’s Q统计量评估工具变量的异质性,MR-Egger回归的截距项和MR-PRESSO进行多效性检验,留一法进行敏感性分析。利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库和人类蛋白质图谱(HPA)数据库验证HSPA5在肝癌组织中的表达水平及其与调节性T细胞的相关性,揭示HSPA5与调节性T细胞在肝癌进展中的相互作用机制及其与患者预后的关系。结果:MR分析结果显示,HSPA5表达增加与肝癌风险呈正相关(均P<0.01),而反向MR分析未发现肝癌与HSPA5之间存在关联(P>0.05)。HSPA5表达与调节性T细胞功能显著相关(均P<0.05),且调节性T细胞在肝癌微环境中的富集与肝癌进展呈正相关(均P<0.05)。中介效应分析结果显示,调节性T细胞在HSPA5和肝癌间的中介效应分别占5.00%和7.45%。TCGA和HPA数据库分析显示,肝癌组织中HSPA5的mRNA和蛋白质表达水平均高于正常组织,且高表达与患者不良预后显著相关。免疫浸润分析验证了HSPA5与调节性T细胞之间的显著正相关性,且调节性T细胞在肝癌中的高浸润与肝癌进展密切相关。结论:HSPA5的高表达与肝癌的发生及不良预后显著相关,并可能通过调控调节性T细胞在肿瘤微环境中的功能促进肝癌发展。 展开更多
关键词 肝细胞癌 热休克蛋白A5 铁死亡 调节性T细胞 孟德尔随机化 全基因组关联分析
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牛乳铁蛋白抗菌肽(Lactoferricin)基因的克隆与表达质粒构建 被引量：4
6
作者 邓强 王春晓 +3 位作者 鲁建章 朱政 刘承初 刘景晶 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第11期4442-4444,4476,共4页
按大肠杆菌偏爱密码子设计了牛乳铁蛋白肽的3段引物序列,通过PCR合成BeL1-2-3,经双酶切后克隆入pED质粒的BamHⅠ和HindⅢ位点之间,构建出牛乳铁蛋白肽的表达载体,转化至E.coliBL-2(1 DE3),获得牛的乳铁蛋白肽基因克隆菌。该克隆菌经诱导... 按大肠杆菌偏爱密码子设计了牛乳铁蛋白肽的3段引物序列,通过PCR合成BeL1-2-3,经双酶切后克隆入pED质粒的BamHⅠ和HindⅢ位点之间,构建出牛乳铁蛋白肽的表达载体,转化至E.coliBL-2(1 DE3),获得牛的乳铁蛋白肽基因克隆菌。该克隆菌经诱导后,可表达出可观的融合蛋白,且表达量与诱导时间呈一定相关性。 展开更多
关键词 乳铁蛋白 牛乳铁蛋白肽 基因克隆 融合表达
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家蚕铁蛋白Ferritin家族基因的鉴定及序列特征与表达谱分析 被引量：1
7
作者 游小林 王林玲 +3 位作者 刘泽锋 王李 周泽扬 李治 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期402-413,共12页
机体内的铁蛋白Ferritin能存储和释放铁离子,在调节细胞的铁离子平衡中发挥重要作用。采用生物信息学方法分析家蚕基因组中Ferritin基因家族成员Bm Fer1、Bm Fer2、Bm Fer3和Bm Fer4的序列特征,并通过转录组芯片数据和实时定量PCR分析... 机体内的铁蛋白Ferritin能存储和释放铁离子,在调节细胞的铁离子平衡中发挥重要作用。采用生物信息学方法分析家蚕基因组中Ferritin基因家族成员Bm Fer1、Bm Fer2、Bm Fer3和Bm Fer4的序列特征,并通过转录组芯片数据和实时定量PCR分析其时空表达谱,为研究蚕体内的铁元素代谢机制提供基础数据。Bm Fer1、Bm Fer2、Bm Fer3具有Ferritin蛋白家族典型的5个α螺旋结构,但铁离子结合位点的种类和数量相对较少。Bm Fer1和Bm Fer3为线粒体铁蛋白,具有O糖基化位点;Bm Fer2和Bm Fer4为细胞质铁蛋白,具有N糖基化位点。Bm Fer1、Bm Fer4为重链型铁蛋白,具有典型的亚铁氧化酶活性中心,在系统进化上与代表物种的重链型铁蛋白聚为一支;而Bm Fer2为轻链型铁蛋白,无亚铁氧化酶活性中心,聚类于轻链型分支。转录组芯片数据表明,家蚕5龄幼虫中肠中Bm Fer1、Bm Fer2的表达量明显高于其他各组织,而且在头部、脂肪体、血细胞、马氏管中的表达量是Bm Fer1的平均值高于Bm Fer2。在家蚕幼虫5龄4 d至蛾期的发育过程中,Bm Fer1和Bm Fer2的表达量均明显上调,尤以上蔟后期发育至蛾期的上调最为明显。实时定量PCR分析显示,Bm Fer1和Bm Fer2在家蚕5龄幼虫丝腺组织的表达量明显高于其他组织。Western blotting分析发现Bm Fer2在家蚕胚胎细胞中有表达,并在催青后的蚕卵中上调表达,推测Bm Fer2基因在家蚕早期胚胎发育中已开始转录、表达行使其功能。 展开更多
关键词 家蚕 铁蛋白 序列特征 原核表达 基因表达谱
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意大利蜜蜂铁蛋白基因AmFer3HCH的克隆及其在温度胁迫下的应答 被引量：1
8
作者 马荣琴 王林玲 +2 位作者 衡惠 周泽扬 李治 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1029-1039,共11页
【目的】本研究旨在克隆鉴定意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica铁蛋白基因Am Fer3HCH,分析其在意大利蜜蜂应对温度胁迫时的组织表达变化,探讨铁蛋白Am Fer3HCH在蜜蜂应对环境温度胁迫中的作用。【方法】PCR扩增意大利蜜蜂铁蛋白基因Am... 【目的】本研究旨在克隆鉴定意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica铁蛋白基因Am Fer3HCH,分析其在意大利蜜蜂应对温度胁迫时的组织表达变化,探讨铁蛋白Am Fer3HCH在蜜蜂应对环境温度胁迫中的作用。【方法】PCR扩增意大利蜜蜂铁蛋白基因Am Fer3HCH的cDNA序列,并对其编码氨基酸序列进行生物信息学鉴定;实时定量PCR分析该基因在不同温度(40℃和5℃)胁迫下的意大利蜜蜂工蜂成虫胸、中肠和脂肪体中的表达变化。【结果】PCR扩增获得意大利蜜蜂铁蛋白基因Am Fer3HCH,cDNA片段大小为507 bp,其核苷酸序列与GenBank意大利蜜蜂基因组数据库中的铁蛋白基因Fer3HCH(GenBank登录号:GB55416)的完全一致,确认为Am Fer3HCH基因序列。Am Fer3HCH鉴定为重链型铁蛋白,在系统进化上聚类于重链型铁蛋白分支,其氨基酸序列具有重链型铁蛋白特有的Fe2+氧化酶活性中心,含有铁蛋白家族成员所共有的水合氧化铁成核中心和铁离子通道。实时定量PCR分析显示,与对照组相比在短时高温(40℃,0~48 h)胁迫过程中,Am Fer3HCH在意大利蜜蜂工蜂成虫胸、中肠和脂肪体中的表达水平整体呈先上升、后下降再上升的趋势;在低温(5℃,0~6 h)胁迫处理过程中,中肠和脂肪体中Am Fer3HCH基因的表达量呈先上升后下降趋势,而在胸中表达量逐渐下降。【结论】意大利蜜蜂铁蛋白Am Fer3HCH为重链型铁蛋白,在意大利蜜蜂对极端温度胁迫的应答中扮演了重要的角色。 展开更多
关键词 意大利蜜蜂 铁蛋白 基因克隆 温度胁迫 表达分析
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豌豆铁蛋白转基因水稻纯系的稻米矿质元素及淀粉特性研究 被引量：6
9
作者 叶红霞 郭泽健 +4 位作者 陈淑玲 包劲松 徐晓晖 舒庆尧 沈圣泉 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第5期1-6,共6页
选取已连续7代自交纯化,并结合GUS标记辅助选择,所获得的26份独立豌豆铁蛋白（pea fer-ritin,Fer）转基因水稻纯系,以秀水11为CK,就豌豆铁蛋白基因（fer）导入水稻后,可能产生对稻米Fe含量、其它矿质元素、蒸煮食用品质、淀粉黏滞特性... 选取已连续7代自交纯化,并结合GUS标记辅助选择,所获得的26份独立豌豆铁蛋白（pea fer-ritin,Fer）转基因水稻纯系,以秀水11为CK,就豌豆铁蛋白基因（fer）导入水稻后,可能产生对稻米Fe含量、其它矿质元素、蒸煮食用品质、淀粉黏滞特性等影响进行研究。结果表明,26份转基因纯系的精米平均总铁含量为10.37μg/g,变幅5.98-31.28μg/g,但仅有4份（即Fer34、Fer 36、Fer 39、Fer 65）显著高于CK（6.46μg/g）,其余22份与CK无显著差异 ；转基因纯系间在其它8种矿质元素含量方面的变异程度以Cu最大,Zn、Ca次之,S、K、Mn、P、Mg等较小,但仅Mn、Cu变化与Fe含量变异分别有显著负、正相关；转基因纯系间在胶稠度、糊化温度、直链淀粉含量等3个重要蒸煮食用品质性状上,也发生了部分变异,分别有7、4和1份纯系与CK显著不同；但在淀粉黏滞性方面,转基因纯系与CK间差异很小,从而推测豌豆铁蛋白基因导入对稻米淀粉结构及其特性影响不大。并就有关豌豆转基因纯系稻米品质变异可能产生原因和外源基因作用等问题进行了讨论。 展开更多
关键词 转基因水稻 豌豆铁蛋白基因(fer) 矿质营养元素 稻米品质
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水稻低植酸突变基因和外源铁蛋白基因的聚合 被引量：5
10
作者 李梅 郭泽健 +5 位作者 叶红霞 陆韵 包劲松 舒庆尧 吴殿星 沈圣泉 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期117-121,共5页
对所获得的2份低植酸突变系和2份铁蛋白(Fer)转基因富铁系稻米进行了无机磷、种子GUS、叶片PCR、稻米矿质元素含量检测和简单的遗传分析,表明这些材料作为低植酸突变种质和Fer富铁种质具有良好的实用价值。对所配杂种F1进行了花药培养,... 对所获得的2份低植酸突变系和2份铁蛋白(Fer)转基因富铁系稻米进行了无机磷、种子GUS、叶片PCR、稻米矿质元素含量检测和简单的遗传分析,表明这些材料作为低植酸突变种质和Fer富铁种质具有良好的实用价值。对所配杂种F1进行了花药培养,并对愈伤组织诱导、分化、生根和花培苗倍数性、成活率、结实性等性状进行考察,认为低植酸基因和铁蛋白外源基因对花培过程影响不明显。在大量的花培后代中筛选到31份低植酸基因和外源铁蛋白基因双重表达的花培纯系,经检测,该批材料富铁效果极为显著,是难得的低植酸富铁转基因优良新种质。 展开更多
关键词 水稻 低植酸突变基因 铁蛋白基因(fer) 矿质营养 花药培养
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转铁蛋白基因增强水稻对氧化胁迫与稻瘟病菌的抗性 被引量：14
11
作者 程志强 郭泽建 +2 位作者 徐晓晖 柴荣耀 李德葆 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期85-88,共4页
对转豌豆铁蛋白 (pea ferritin,Fer)基因水稻 T1代的 53个株系进行 PCR检测 ,52个株系能扩增出阳性 PCR产物。通过测定光合作用过程中最大光化学通量 (Fv/ Fm 值 )分析了由百草枯处理引起的 T1代水稻叶片的氧化损害。与未转基因水稻相... 对转豌豆铁蛋白 (pea ferritin,Fer)基因水稻 T1代的 53个株系进行 PCR检测 ,52个株系能扩增出阳性 PCR产物。通过测定光合作用过程中最大光化学通量 (Fv/ Fm 值 )分析了由百草枯处理引起的 T1代水稻叶片的氧化损害。与未转基因水稻相比 ,转Fer基因水稻的叶片对氧化胁迫的耐受能力有不同程度的增强。百草枯处理后转基因植株叶片叶绿素含量与水处理叶片相比没有明显下降 ,而未转基因植株叶片叶绿素含量降低至水处理叶片的 2 0 %左右。选取 9株对氧化胁迫耐受能力较强的水稻进行了 Northernblot分析和子代的稻瘟病抗性测定 ,其中 5株转基因植株 Ferm RNA积累增强。病原菌接种后 T2 代转基因植株的病斑数量明显少于非转基因植株。表明转 展开更多
关键词 铁蛋白基因 氧化胁迫 稻瘟病菌 水稻 铁蛋白 抗性 转基因
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两份转Fer基因富铁水稻特异种质应用价值的初步评价 被引量：20
12
作者 叶红霞 郭泽建 +3 位作者 舒庆尧 徐晓晖 包劲松 沈圣泉 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期270-274,共5页
在获得了105份转豌豆铁蛋白基因(Fer)水稻转化体的基础上,通过连续7代自交纯化,并结合GUS标记辅助选择,得到了82份独立转基因纯系。经稻米矿质元素检测,发掘到2份富铁转基因种质(Fer34和Fer65),其精米全铁含量为野生型亲本秀水11的4.82... 在获得了105份转豌豆铁蛋白基因(Fer)水稻转化体的基础上,通过连续7代自交纯化,并结合GUS标记辅助选择,得到了82份独立转基因纯系。经稻米矿质元素检测,发掘到2份富铁转基因种质(Fer34和Fer65),其精米全铁含量为野生型亲本秀水11的4.82倍和3.46倍。进一步鉴定表明,所筛选到的2份富铁转基因种质的外源基因(Fer)遗传简单,增加精米粉铁含量明显,对植株重要农艺性状、其他矿质营养、精米外观和食用品质等均无明显的负作用,是较为难得的富铁转基因优良新种质。此外,还就该2份富铁种质的实用价值及其应用前景进行了讨论。 展开更多
关键词 转基因水稻 豌豆铁蛋白基因 矿质营养 稻米品质
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铁蛋白基因的水稻转化及其功能初步分析 被引量：36
13
作者 徐晓晖 郭泽建 +2 位作者 程志强 黎军英 李德葆 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期49-54,共6页
铁蛋白是与铁离子结合的一种铁贮藏蛋白,用来调节细胞内的自由铁离子浓度。本研究利用农杆菌介导的转化方法将豌豆铁蛋白(peaferritin,Fer)基因转化到水稻秀水11品种中。经对转基因水稻(T0代)进行了PCR检测,及Southern杂交分析,结果表明... 铁蛋白是与铁离子结合的一种铁贮藏蛋白,用来调节细胞内的自由铁离子浓度。本研究利用农杆菌介导的转化方法将豌豆铁蛋白(peaferritin,Fer)基因转化到水稻秀水11品种中。经对转基因水稻(T0代)进行了PCR检测,及Southern杂交分析,结果表明,Fer基因已整合到水稻基因组中。通过测定光合作用过程中最大光化学量子产量(Fv/Fm值)分析了由百草枯处理引起的水稻叶片的氧化损害。结果表明,转Fer基因的叶片呈现出不同程度的抗百草枯氧化的能力。用水稻稻瘟病菌接种水稻叶片,发现转Fer基因植株可以减少或延缓病原菌侵染后活性氧的产生。另外,对不同组织中的铁含量测定结果表明,转Fer基因水稻的种子和叶片组织中铁的含量明显提高。这些结果说明Fer在水稻中已表达,增加了转基因植株中铁的贮藏量,同时减少了体内的游离铁从而也减轻了转基因植株的氧化损伤。 展开更多
关键词 水稻 铁蛋白 氧化损害 转基因 农杆菌介导 抗氧化作用
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人乳铁蛋白基因克隆及细胞表达研究 被引量：28
14
作者 曹阳 高华颖 +4 位作者 于黎 袁晓东 李庆伟 汤敏谦 安利佳 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期9-14,共6页
通过PCR法直接克隆了 2 .36 6kb的人乳铁蛋白基因cDNA序列及 80 0bp的山羊 β.M乳球蛋白基因 5′端调控序列 ,并连接到表达载体pLNCX中。利用脂质体包裹含人乳铁蛋白基因cDNA的重组质粒pLNCXHLF ,并导入到小鼠乳腺癌细胞株MA.M 782中 ,G... 通过PCR法直接克隆了 2 .36 6kb的人乳铁蛋白基因cDNA序列及 80 0bp的山羊 β.M乳球蛋白基因 5′端调控序列 ,并连接到表达载体pLNCX中。利用脂质体包裹含人乳铁蛋白基因cDNA的重组质粒pLNCXHLF ,并导入到小鼠乳腺癌细胞株MA.M 782中 ,G418及PCR筛选获得阳性单克隆细胞 ,增殖后 ,转染细胞利用海藻酸钠固定化包埋培养 ,经激素诱导 ,培养液上清通过Western印记检测证明 ,转染细胞表达并分泌出人乳铁蛋白 ,分子质量为34kDa;ELISA法测出 ,每升培养基 (含 10 5个细胞 )重组蛋白最高表达量为 6 5mg ;抗菌实验表明 ,所获得的重组人乳铁蛋白具有抑制大肠杆菌生长的作用 ,而且比人乳铁蛋白标准品作用更强。 展开更多
关键词 人乳铁蛋白 脂质体 固定化 细胞表达 基因克隆
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乳铁蛋白肽基因的合成及其在动物乳腺中的表达 被引量：12
15
作者 张锦霞 王铁东 +2 位作者 张守峰 郭学军 扈荣良 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2006年第2期229-233,共5页
根据已发表的编码牛乳铁蛋白肽（LfcinB）25个氨基酸的mRNA序列，设计了4条用于合成牛乳铁蛋白肽全基因的引物，用重叠延伸PCR法合成149bp的牛乳铁蛋白肽基因（包括牛乳铁蛋白信号肽序列、上下游酶切位点和终止密码子），并将此基因克... 根据已发表的编码牛乳铁蛋白肽（LfcinB）25个氨基酸的mRNA序列，设计了4条用于合成牛乳铁蛋白肽全基因的引物，用重叠延伸PCR法合成149bp的牛乳铁蛋白肽基因（包括牛乳铁蛋白信号肽序列、上下游酶切位点和终止密码子），并将此基因克隆到载体pI-B，获得了乳腺特异性表达质粒pI-BL，该质粒经生理盐水稀释后直接注入稳定泌乳期奶山羊和奶牛乳腺组织（注射量为400μg），以琼脂板溶圈法检测奶样抑菌活性。结果显示，注射后3～48h，奶样有明显抑菌活性，其中3～9h抑菌活性最高。 展开更多
关键词 乳铁蛋白 乳铁蛋白肽 基因合成 乳腺特异性表达
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日本血吸虫铁蛋白基因的筛选、克隆与表达 被引量：18
16
作者 易新元 曾宪芳 +2 位作者 周金春 蔡春 舒新华 《湖南医科大学学报》 CSCD 1998年第5期425-428,共4页
采用Ｓｊ未成熟虫卵抗原超免疫兔血清（ＲＡＳｊＩＥＡ）对Ｓｊ成虫ｃＤＮＡ文库进行筛选，并对可能具有抗日本血吸虫生殖／卵胚发育潜能的抗原分子进行克隆、表达。常规法免疫筛选Ｓｊ成虫文库，获得单个阳性克隆，ＰＣＲ扩增后琼脂糖... 采用Ｓｊ未成熟虫卵抗原超免疫兔血清（ＲＡＳｊＩＥＡ）对Ｓｊ成虫ｃＤＮＡ文库进行筛选，并对可能具有抗日本血吸虫生殖／卵胚发育潜能的抗原分子进行克隆、表达。常规法免疫筛选Ｓｊ成虫文库，获得单个阳性克隆，ＰＣＲ扩增后琼脂糖电泳测定基因大小，ＤＮＡ测序，基因库搜索，找出同源基因。共鉴定出６个不同的基因克隆。选择其中的铁蛋白（ＳｊＦｅｒ）基因亚克隆于ｐＧＭＣ载体。重组蛋白以ＧＭＣＳＦ（粒细胞巨噬细胞集落刺激因子）－ＳｊＦｅｒ融合蛋白的形式在细菌中高效表达。表达产物仅溶于８Ｍ尿素溶液中，分子量为４０ｋＤ。 展开更多
关键词 日本血吸虫 铁蛋白基因 克隆 基因表达
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葡萄IRT基因的克隆、鉴定及其对氨基酸-铁复合肥的响应特征
17
作者 郑秋玲 王建萍 +6 位作者 肖慧琳 史圣朋 宁友峥 杜远鹏 管雪强 唐美玲 宋志忠 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第5期913-921,共9页
为揭示葡萄铁素吸收与转运的分子机制,明确铁调节转运蛋白编码基因VvIRT在葡萄果实不同发育时期的表达差异及其对叶面喷施氨基酸-铁复合肥的响应特征,本研究以烟酿1号为材料,分离并克隆葡萄铁调节转运蛋白编码基因IRT,分析IRT基因分布... 为揭示葡萄铁素吸收与转运的分子机制,明确铁调节转运蛋白编码基因VvIRT在葡萄果实不同发育时期的表达差异及其对叶面喷施氨基酸-铁复合肥的响应特征,本研究以烟酿1号为材料,分离并克隆葡萄铁调节转运蛋白编码基因IRT,分析IRT基因分布、结构及其编码蛋白质的保守基序等特征;设置叶面喷施氨基酸-铁复合肥处理,利用实时荧光定量PCR分析烟酿1号IRT基因在果实不同发育时期的表达差异及其对叶面喷施处理的响应特征。结果表明:在葡萄基因组中克隆得到10个VvIRT基因(VvIRT1~VvIRT10),分布在7条染色体上。其编码蛋白质均含有Fe^(2+)转运蛋白或锌/铁转运体(PF02535),属于典型的铁调节蛋白。VvIRT1、VvIRT2、VvIRT4、VvIRT5、VvIRT8等基因编码的蛋白质属于碱性蛋白质,而其他5个蛋白质属于酸性蛋白质。VvIRT5蛋白和VvIRT8蛋白属于不稳定蛋白,其他8个蛋白为稳定蛋白。VvIRT7蛋白主要定位于液泡膜,其他蛋白质均主要定位于细胞质膜。VvIRT7在葡萄果实不同发育时期各组织中的整体表达水平都是最高的,其次为VvIRT9和VvIRT6,而VvIRT1、VvIRT3、VvIRT5、VvIRT8和VvIRT10在葡萄果实发育过程中均无表达。叶面喷施铁肥处理下,韧皮部中VvIRT7表达量和果实及韧皮部中VvIRT9表达量在花后35 d(幼果期)至70 d(转色期)明显增加,而在花后85 d(第2次膨大期)至115 d(成熟期),韧皮部和叶片中VvIRT7和VvIRT9表达量明显减少。因此,葡萄VvIRT基因对叶面喷施铁肥的响应特征与果实发育时期及器官类型密切相关,VvIRT7、VvIRT9基因编码蛋白质是葡萄果实发育过程中2个重要的铁调节转运蛋白。 展开更多
关键词 葡萄 铁调节转运蛋白 铁肥 VvIRT基因
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奶牛乳铁蛋白基因5′侧翼区PCR-SSCP多态性分析 被引量：10
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作者 李国华 张沅 +1 位作者 孙东晓 李宁 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期827-830,共4页
采用PCR SSCP技术 ,对奶牛乳铁蛋白基因 5′侧翼区 112 2bp序列进行多态性分析。在该区所划分的 5个亚片段上 ,发现Blf5′ 1(2 2 7bp) ,Blf 5′ 3(175bp)和Blf5′ 5 (2 93bp) 3个DNA片段存在多态。进一步对这 3个片段进行测序分析 ,在Bl... 采用PCR SSCP技术 ,对奶牛乳铁蛋白基因 5′侧翼区 112 2bp序列进行多态性分析。在该区所划分的 5个亚片段上 ,发现Blf5′ 1(2 2 7bp) ,Blf 5′ 3(175bp)和Blf5′ 5 (2 93bp) 3个DNA片段存在多态。进一步对这 3个片段进行测序分析 ,在Blf 5′ 1序列中 ,发现位于转录起始位点上游 - 92 6和 - 915位分别有G→A及T→G点突变 ;在Blf5′ 3片段中 ,- 4 78位存在G的插入 ;Blf 5′ 5位点上 ,发生 - 2 8位的C颠换为A和 +33位的G颠换为C两处突变。利用TFSEARCH (ver.1 3)软件对乳铁蛋白基因 5′侧翼区潜在调控元件及蛋白质结合位点进行了预测 ,结果显示 展开更多
关键词 乳铁蛋白基因 PCR—SSCP 牛 调控因子
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细粒棘球蚴铁蛋白基因的克隆重组高效表达及免疫学初步研究 被引量：9
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作者 王娅娜 丁淑琴 +4 位作者 王健 张焱 王洁 王淑静 赵巍 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期399-402,406,共5页
目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus Eg)铁蛋白(ferritin)基因的原核表达重组质粒并表达、纯化该重组蛋白,初步研究其免疫反应。方法将细粒棘球蚴铁蛋白基因亚克隆于表达载体pGEX-6p-1,转化重组体到大肠杆菌Bl21中,在异丙基-β... 目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus Eg)铁蛋白(ferritin)基因的原核表达重组质粒并表达、纯化该重组蛋白,初步研究其免疫反应。方法将细粒棘球蚴铁蛋白基因亚克隆于表达载体pGEX-6p-1,转化重组体到大肠杆菌Bl21中,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下表达;用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行初步鉴定,用切胶纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,通过Western-blot对该蛋白的免疫学特性进行初步研究。结果重组铁蛋白与GST以融合表达的形式在细菌中高效表达,表达产物为不可溶性的包涵体,蛋白分子量约为42 kD。融合蛋白Egferritin/GST能被细粒棘球蚴免疫的家兔血清和特异性小鼠抗血清所识别,同时特异性小鼠抗血清可识别天然抗原囊液、原头蚴可溶性蛋白中约19 kD的蛋白条带。结论成功地表达细粒棘球蚴重组铁蛋白,并且该蛋白有一定的免疫原性及抗原性。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 铁蛋白 基因克隆 表达 免疫原性
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可口革囊星虫(Phascoloma esculenta)铁结合蛋白基因的研究 被引量：16
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作者 杜莉利 李太武 +1 位作者 苏秀榕 李登峰 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期252-256,共5页
根据已报道的铁结合蛋白基因的保守序列设计引物,用cDNA末端快速扩增(RACE)法,成功地从可口革囊星虫体液中获得铁结合蛋白基因的全长序列。结果表明,该基因cDNA全长1017bp,5′-端非编码区为151bp,3′-非编码区为341bp,开放阅读框长度为5... 根据已报道的铁结合蛋白基因的保守序列设计引物,用cDNA末端快速扩增(RACE)法,成功地从可口革囊星虫体液中获得铁结合蛋白基因的全长序列。结果表明,该基因cDNA全长1017bp,5′-端非编码区为151bp,3′-非编码区为341bp,开放阅读框长度为525bp(包括一个终止密码子),可编码175个氨基酸(GenBank:EU091352)。该序列与加洲海兔、皱纹盘鲍、刺参、微小牛蜱、叉尾、非洲爪蟾、小家鼠、人等的铁结合蛋白基因有67%—75%的同源性,而相应的氨基酸同源性为59%—76%,氨基酸相似性为74%—89%。分析结果表明,铁结合蛋白基因在动物进化中是高度保守的。 展开更多
关键词 可口革囊星虫 铁结合蛋白基因 CDNA末端快速扩增 CDNA克隆 序列分析
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