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斜纹夜蛾铁硫亚基蛋白的表达及功能鉴定
1
作者
左洪亮
陈永
+2 位作者
高璐
刘海远
钟国华
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期139-146,共8页
铁硫亚基蛋白(rieske iron-sulfur protein,RISP)是线粒体复合物Ⅲ的关键蛋白亚基之一,在呼吸链电子传递过程中起到重要作用。本研究通过RT-PCR克隆得到斜纹夜蛾Spodoptera litura RISP基因SlitRISP的ORF,构建了pET32a-SlitRISP原核表...
铁硫亚基蛋白(rieske iron-sulfur protein,RISP)是线粒体复合物Ⅲ的关键蛋白亚基之一,在呼吸链电子传递过程中起到重要作用。本研究通过RT-PCR克隆得到斜纹夜蛾Spodoptera litura RISP基因SlitRISP的ORF,构建了pET32a-SlitRISP原核表达载体,SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,SlitRISP原核表达蛋白以包涵体的形式存在于菌体沉淀中,且RISP抗体可成功用于该蛋白的免疫印迹检测。为了进一步鉴定SlitRISP在斜纹夜蛾离体细胞系SL-1中的功能,通过向细胞内转染siRNA,利用RNAi技术沉默SL-1中的SlitRISP。qRT-PCR结果表明,分别经50nmol/L和100nmol/L siRNA处理48h后,SL-1中SlitRISP的表达均几乎完全被抑制;Western blot结果显示,SL-1中SlitRISP含量显著低于CK。当SL-1SlitRISP被成功沉默后,通过检测SL-1线粒体膜电位、细胞ATP含量和细胞增殖抑制率鉴定RISP在线粒体电子传递过程中的重要作用。流式细胞仪测定结果表明,经50nmol/L和100nmol/LsiRNA处理24h后,SL-1线粒体膜电位相对于CK分别降低23.52%和11.32%,而处理48h后,SL-1线粒体膜电位则分别升高5.58%和27.66%;siRNA处理24h和48h后,SL-1ATP含量相对于CK分别降低82.71%和84.50%,最终导致SL-1细胞增殖抑制率分别为53.64%和67.94%。这些结果表明SlitRISP在SL-1中参与线粒体膜电位的形成和细胞ATP的合成。介于RISP在线粒体电子传递链中的重要作用,其可能成为新型杀虫作用靶标,这可为研制新型呼吸抑制剂提供参考。
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关键词
斜纹夜蛾
铁硫亚基蛋白
原核表达
蛋白
功能
SL-1细胞
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职称材料
小菜蛾线粒体复合物Ⅲ铁硫蛋白基因5′上游调控区域的克隆及序列分析
2
作者
龚亮
张彦博
+1 位作者
耿鹏
胡美英
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第7期121-126,共6页
利用Tail-PCR技术克隆了小菜蛾线粒体复合物Ⅲ铁硫蛋白亚基的基因组DNA序列,全长5 013 bp,GenBank登录号为HM210791。研究表明,该基因具有3个内含子,大小分别为96 bp、577 bp和549 bp,且其内含子两端具有典型的GT-AG结构。生物信息学分...
利用Tail-PCR技术克隆了小菜蛾线粒体复合物Ⅲ铁硫蛋白亚基的基因组DNA序列,全长5 013 bp,GenBank登录号为HM210791。研究表明,该基因具有3个内含子,大小分别为96 bp、577 bp和549 bp,且其内含子两端具有典型的GT-AG结构。生物信息学分析表明,该基因5′上游调控区域不仅包括TATA-box等启动子核心序列,而且含有BR-C Z4、Hb、Dfd、CF2-II和HSF等转录因子结合位点。进一步鉴定了该基因的转录起始位点、启动子序列和CPG岛区域。为小菜蛾线粒体复合物Ⅲ铁硫蛋白亚基的转录调控机制和具体的生理功能研究提供一定基础。
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关键词
小菜蛾
线粒体复合物Ⅲ
铁硫
蛋白
亚基
TAIL-PCR
5′上游调控区域
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职称材料
题名
斜纹夜蛾铁硫亚基蛋白的表达及功能鉴定
1
作者
左洪亮
陈永
高璐
刘海远
钟国华
机构
华南农业大学昆虫毒理研究室
出处
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期139-146,共8页
基金
国家自然科学基金项目(30971944)
文摘
铁硫亚基蛋白(rieske iron-sulfur protein,RISP)是线粒体复合物Ⅲ的关键蛋白亚基之一,在呼吸链电子传递过程中起到重要作用。本研究通过RT-PCR克隆得到斜纹夜蛾Spodoptera litura RISP基因SlitRISP的ORF,构建了pET32a-SlitRISP原核表达载体,SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,SlitRISP原核表达蛋白以包涵体的形式存在于菌体沉淀中,且RISP抗体可成功用于该蛋白的免疫印迹检测。为了进一步鉴定SlitRISP在斜纹夜蛾离体细胞系SL-1中的功能,通过向细胞内转染siRNA,利用RNAi技术沉默SL-1中的SlitRISP。qRT-PCR结果表明,分别经50nmol/L和100nmol/L siRNA处理48h后,SL-1中SlitRISP的表达均几乎完全被抑制;Western blot结果显示,SL-1中SlitRISP含量显著低于CK。当SL-1SlitRISP被成功沉默后,通过检测SL-1线粒体膜电位、细胞ATP含量和细胞增殖抑制率鉴定RISP在线粒体电子传递过程中的重要作用。流式细胞仪测定结果表明,经50nmol/L和100nmol/LsiRNA处理24h后,SL-1线粒体膜电位相对于CK分别降低23.52%和11.32%,而处理48h后,SL-1线粒体膜电位则分别升高5.58%和27.66%;siRNA处理24h和48h后,SL-1ATP含量相对于CK分别降低82.71%和84.50%,最终导致SL-1细胞增殖抑制率分别为53.64%和67.94%。这些结果表明SlitRISP在SL-1中参与线粒体膜电位的形成和细胞ATP的合成。介于RISP在线粒体电子传递链中的重要作用,其可能成为新型杀虫作用靶标,这可为研制新型呼吸抑制剂提供参考。
关键词
斜纹夜蛾
铁硫亚基蛋白
原核表达
蛋白
功能
SL-1细胞
Keywords
Spodoptera litura
Rieske iron-sulfur protein
prokaryotic expression
protein function
Spodoptera litura cultured cell line （SL-1）
分类号
Q966 [生物学—昆虫学]
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职称材料
题名
小菜蛾线粒体复合物Ⅲ铁硫蛋白基因5′上游调控区域的克隆及序列分析
2
作者
龚亮
张彦博
耿鹏
胡美英
机构
华南农业大学农药与化学生物学教育部重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第7期121-126,共6页
基金
国家自然科学基金项目(30871660)
高等学校博士学科点专项科研基金项目(20094404110019)
文摘
利用Tail-PCR技术克隆了小菜蛾线粒体复合物Ⅲ铁硫蛋白亚基的基因组DNA序列,全长5 013 bp,GenBank登录号为HM210791。研究表明,该基因具有3个内含子,大小分别为96 bp、577 bp和549 bp,且其内含子两端具有典型的GT-AG结构。生物信息学分析表明,该基因5′上游调控区域不仅包括TATA-box等启动子核心序列,而且含有BR-C Z4、Hb、Dfd、CF2-II和HSF等转录因子结合位点。进一步鉴定了该基因的转录起始位点、启动子序列和CPG岛区域。为小菜蛾线粒体复合物Ⅲ铁硫蛋白亚基的转录调控机制和具体的生理功能研究提供一定基础。
关键词
小菜蛾
线粒体复合物Ⅲ
铁硫
蛋白
亚基
TAIL-PCR
5′上游调控区域
Keywords
Plitella xylostella Rieske iron-sulfur protein Tail-PCR 5′-upstream regulatory region
分类号
S433.4 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
斜纹夜蛾铁硫亚基蛋白的表达及功能鉴定
左洪亮
陈永
高璐
刘海远
钟国华
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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职称材料
2
小菜蛾线粒体复合物Ⅲ铁硫蛋白基因5′上游调控区域的克隆及序列分析
龚亮
张彦博
耿鹏
胡美英
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
0
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职称材料
已选择
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