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钾依赖钠钙交换蛋白-6(SLC24A6)的基因克隆与蛋白表达
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作者 刘瑜 王宣春 +2 位作者 陈凤玲 牟波 胡仁明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期1041-1044,共4页
目的:克隆和表达钾依赖钠钙交换蛋白-6(SLC24A6)基因,为进一步阐明其与胰岛素分泌的关系奠定基础。方法:利用RT-PCR观察SLC24A6基因在胰岛素瘤和正常胰腺组织中的表达,并克隆SLC24A6基因全长,将SLC24A6基因构建到原核表达载体pET32a,在... 目的:克隆和表达钾依赖钠钙交换蛋白-6(SLC24A6)基因,为进一步阐明其与胰岛素分泌的关系奠定基础。方法:利用RT-PCR观察SLC24A6基因在胰岛素瘤和正常胰腺组织中的表达,并克隆SLC24A6基因全长,将SLC24A6基因构建到原核表达载体pET32a,在大肠杆菌ROSSET菌(DE3)中诱导表达纯化;将SLC24A6基因构建到绿色荧光真核表达载体pEGFP-C3,利用共聚焦显微镜观察SLC24A6在小鼠胰岛素瘤β-TC3细胞中的定位。结果:SLC24A6基因在胰岛素瘤组织表达明显高于正常胰腺;成功获得原核表达纯化蛋白,大小约80kD;重组载体pEGFP-C3-SLC24A6转染后,定位于小鼠胰岛素瘤β-TC3细胞膜上。结论:SLC24A6可能与胰岛素分泌有关,SLC24A6全长原核表达为进一步研究SLC24A6的生物学功能和蛋白质晶体结构奠定了基础,SLC24A6在胰岛素瘤细胞的定位为进一步阐明其与胰岛素分泌的关系提供了理论依据。 展开更多
关键词 钾依赖钠钙交换蛋白6 胰岛素瘤
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钠钙交换体激活CaMKⅡ介导大鼠离体心脏缺血再灌注损伤 被引量:7
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作者 孔令恒 梁飞 +4 位作者 陈玉龙 魏明 孙娜 朱娟霞 苏兴利 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期28-34,共7页
目的:探讨钠钙交换体(Na+/Ca^(2+) exchanger,NCX)在离体心脏缺血再灌注损伤中的作用及其可能机制。方法:40只大鼠随机分为4组:正常对照组(Control组)、10μmol/L KB-R7943药物对照组(KB-R7943组)、缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR... 目的:探讨钠钙交换体(Na+/Ca^(2+) exchanger,NCX)在离体心脏缺血再灌注损伤中的作用及其可能机制。方法:40只大鼠随机分为4组:正常对照组(Control组)、10μmol/L KB-R7943药物对照组(KB-R7943组)、缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)组和10μmol/L KB-R7943干预缺血再灌注组(KB-R7943+IR组)。采用Langendorff灌流装置建立离体心脏缺血再灌注模型;以再灌注末心肌纤维形态的变化、左室发展压(LVDP)比值、左室舒张末压(LVEDP)、冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、心肌梗死面积及细胞色素c和cleaved caspase-3蛋白的变化评价心肌损伤程度;Western印迹检测磷酸化钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(Ca^(2+)/calmodulindependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ)和受磷蛋白(phospholamban,PLN)苏氨酸17位点磷酸化(pThr17)水平的变化。结果:与Control组相比,IR组再灌注末心肌纤维排列紊乱,断裂明显,心肌梗死面积、LVEDP和冠状动脉流出液中LDH活性明显增加,LVDP比值降低,细胞色素c、cleaved caspase-3、磷酸化CaMKⅡ及pThr17-PLN水平均上调(P<0.01);KB-R7943+IR组心肌梗死面积明显减小,LVEDP降低,LVDP比值明显改善,LDH活性明显降低,细胞色素c和cleaved caspase-3蛋白水平明显降低,磷酸化CaMKⅡ和pThr17-PLN水平也明显下调(P<0.01)。结论:NCX可通过激活CaMKⅡ启动细胞凋亡和坏死,进而诱导心肌缺血再灌注损伤。 展开更多
关键词 交换 /蛋白依赖蛋白激酶Ⅱ 受磷蛋白 细胞色素C 乳酸脱氢酶 心肌损伤
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