钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN-93对兔心衰模型心室肌细胞晚钠电流的影响 被引量：2

1

作者 刘衍冬 颜素娟 +5 位作者 闫双冰 董泉彬 郑安财 李凡 裴兆辉 李菊香 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1964-1968,共5页

目的:探讨异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导兔心衰(heart failure,HF)时,兔心室肌细胞晚钠电流(late sodium current,I_(Na L))的变化及钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^(2+)/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,Ca MKⅡ)抑制剂KN... 目的:探讨异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导兔心衰(heart failure,HF)时,兔心室肌细胞晚钠电流(late sodium current,I_(Na L))的变化及钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^(2+)/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,Ca MKⅡ)抑制剂KN-93对I_(Na L)的影响。方法:经兔耳缘静脉注射ISO(300μg·kg^(-1)·d^(-1),连续15 d)诱导兔HF模型;1月后行心脏彩超检查和HE染色观察心肌形态改变来评价HF模型;Western blot分析Na_V1.5、Ca MKⅡδ和磷酸化Ca MKⅡδ的蛋白水平;经Langendorff装置灌注消化生理盐水(normal saline,NS)组和HF组的兔心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录I_(Na L)。结果:与NS组相比,HF组兔心率增加(P<0.01),心室腔增大(P<0.05),心功能明显降低(P<0.01);心肌细胞排列紊乱,呈空泡样变性,细胞间质存在水肿,纤维组织增多。HF组的Na_V1.5、Ca MKⅡδ及磷酸化Ca MKⅡδ的蛋白水平与NS组相比均明显增加(P<0.01)。HF组的I_(Na L)与NS组相比明显增加(P<0.01);加入海葵毒素Ⅱ(sea anemone toxinⅡ,ATXⅡ)后,HF组及NS组I_(Na L)均明显增加,且HF组比NS组增加更明显(P<0.01);在ATXⅡ诱导电流增加稳定后,加入KN-93,NS组及HF组中I_(Na L)均明显减少(P<0.05)。结论:Ca MKⅡ抑制剂KN-93能抑制心衰增加的I_(Na L),这一作用可能与影响Ca MKⅡδ活性及Ca MKⅡδ参与I_(Na L)的调控有关。 展开更多

关键词 钙/钙调素依赖性蛋白激酶ⅱ 心力衰竭 晚钠电流 KN-93

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钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ在大鼠胚胎心肌肥大细胞中调控血管紧张素Ⅱ诱导的细胞自噬 被引量：11

2

作者 罗敏 张慧蓉 赵玲 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第12期1917-1922,共6页

目的:探讨钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^(2+)/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMK Ⅱ)与细胞自噬在胚胎心肌细胞肥大发展过程中的相互作用。方法:使用血管紧张素Ⅱ作用于大鼠胚胎心肌细胞株H9c2细胞,建立体外心肌细胞肥... 目的:探讨钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^(2+)/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMK Ⅱ)与细胞自噬在胚胎心肌细胞肥大发展过程中的相互作用。方法:使用血管紧张素Ⅱ作用于大鼠胚胎心肌细胞株H9c2细胞,建立体外心肌细胞肥大模型,通过药物抑制和基因过表达及敲除等方法分析细胞自噬通路AMPK-LC3 Ⅱ。结果:血管紧张素Ⅱ可快速诱导CaMKⅡ及细胞自噬相关通路AMPK磷酸化以及细胞自噬标记蛋白LC3 Ⅱ表达,CaMKⅡ抑制剂以及基因敲除和药物抑制CaMK Ⅱ下游因子组蛋白乙酰转移酶4(HDAC4)可显著阻断血管紧张素Ⅱ诱导的LC3 Ⅱ蛋白表达(P<0.05)。结论:CaMK Ⅱ作为心肌肥大病理过程的中心调控子,可以通过AMPK或其下游HDAC4直接或间接调控细胞自噬,进而调节心肌肥大的发生发展。 展开更多

关键词 心肌细胞肥大 细胞自噬 钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶ⅱ AMPK LC3II

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钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ调控压力负荷心力衰竭小鼠心肌细胞肥大和凋亡的作用及机制 被引量：4

3

作者 葛广全 赵峰 +6 位作者 陈道虎 石振塑 陈泽伦 王天光 王小啟 何书武 魏以桢 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1314-1321,共8页

目的探讨抑制钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)调控压力负荷心力衰竭小鼠心肌细胞肥大和凋亡的作用及机制。方法取6~8周雄性C57BL/6小鼠24只,随机分为4组:假手术组、假手术+KN-93组、主动脉缩窄术(TAC)组、TAC+KN-93组,每组6只。... 目的探讨抑制钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)调控压力负荷心力衰竭小鼠心肌细胞肥大和凋亡的作用及机制。方法取6~8周雄性C57BL/6小鼠24只,随机分为4组:假手术组、假手术+KN-93组、主动脉缩窄术(TAC)组、TAC+KN-93组,每组6只。称各组小鼠体重和心脏质量,计算心脏质量指数(HWI);通过超声心动图评价小鼠心脏结构和功能;WGA、Masson及TUNEL染色分别检测小鼠心肌细胞横截面积、纤维化程度和凋亡水平;qRT-PCR检测心房钠尿肽(ANP)mRNA表达,蛋白质印迹法检测ANP、脑钠肽(BNP)、β肌球蛋白重链(β-MHC)、活化的Caspase 3、活化的Caspase 9、Bcl-2、B淋巴细胞瘤2相关X蛋白(Bax)、磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)和沉默调节蛋白3(Sirt3)的表达。结果与假手术组相比,TAC组小鼠HWI、左心室舒张末期直径(LVEDD)、左心室收缩末期直径(LVESD)均增加(P均<0.05),左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS)均降低(P均<0.05);心肌细胞横截面积增大(P<0.05),心肌组织ANP mRNA和蛋白及BNP、β-MHC蛋白表达均增加(P均<0.05),心肌纤维化和心肌细胞凋亡均增加(P均<0.05),心肌组织凋亡蛋白活化的Caspase 3、活化的Caspase 9和Bax相对表达量均增加(P均<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2相对表达量降低(P<0.05),p-CaMKⅡ/CaMKⅡ比值下降(P<0.05),Sirt3相对表达量增加(P<0.05)。而给予CaMKⅡ抑制剂KN-93后,TAC+KN-93组小鼠上述指标均被逆转,与TAC组相比差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论抑制CaMKⅡ能够减轻压力负荷心力衰竭小鼠的心功能不全,抑制心肌细胞肥大及凋亡,且其作用机制与Sirt3有关。 展开更多

关键词 心力衰竭 主动脉缩窄术 压力负荷 心肌肥厚 钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型 沉默调节蛋白3

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TNF-α和钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在大鼠心肌缺血后适应中的作用 被引量：1

4

作者 刘敏 张家明 +2 位作者 李超 郝海菊 李景东 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1330-1334,共5页

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)和肌浆网钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在大鼠心肌缺血后适应发生机制中的作用。方法:SD大鼠随机分为5组(各组n=16),包括假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后适应组(IP组)、重组人肿... 目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)和肌浆网钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在大鼠心肌缺血后适应发生机制中的作用。方法:SD大鼠随机分为5组(各组n=16),包括假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后适应组(IP组)、重组人肿瘤坏死因子受体:Fc融合蛋白(rhTNFR:Fc)+缺血再灌注组(F+IR组)和rhTNFR:Fc+缺血后适应组(F+IP组)。结扎冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注损伤和缺血后适应模型,测量各组心肌梗死面积;RT-PCR及Western blotting测定心肌TNF-αmRNA和蛋白及CaMKⅡ含量和活性。结果:(1)与sham组比较,IR组梗死面积/缺血区面积及缺血区面积/总面积的比值均显著增加(P<0.01);与IR组比较,IP组、F+IR组和F+IP组这2个比值均显著减少(P<0.01),其中F+IP组减少更为明显。(2)与sham组比较,其余各组心肌组织TNF-αmRNA和蛋白均显著升高(P<0.01);与IR组比较,IP组、F+IR组和F+IP组TNF-α表达均显著降低(P<0.01);与IR组比较,IP组、F+IR组和F+IP组CaMKⅡ活性均明显升高(P<0.01),其中以F+IP组升高最为显著。(4)与sham组比较,IR组和IP组肌浆网CaMKⅡ活性显著降低(P<0.01),而F+IR组和F+IP组均明显升高;与IR组比较,IP组、F+IR组和F+IP组CaMKⅡ活性均明显升高(P<0.01),其中以F+IP组升高最为显著。结论:缺血后适应可通过降低缺血再灌注时心肌组织TNF-αmRNA和蛋白表达、增加CaMKⅡ含量和活性发挥心肌保护作用。 展开更多

关键词 缺血后适应 心肌 钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶ⅱ 肿瘤坏死因子

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钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ与记忆 被引量：4

5

作者 廖素群 《生物学教学》 北大核心 2004年第7期1-3,共3页

钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ是突触后致密成分的重要蛋白质组分,它能感受突触后钙离子水平的变化,并能通过自磷酸化维持长时活性,在调节谷氨酸能突触可塑性和学习记忆中有重要作用。

关键词 钙/钙调素依赖性蛋白激酶ⅱ 记忆 突触 自磷酸化 长时程增强

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钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂对新生大鼠心房肌细胞钙超载的干预作用 被引量：3

6

作者 丁翔 仝识非 +1 位作者 秦瑶 宋治远 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1275-1277,共3页

目的观察钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)抑制剂KN93对新生大鼠心房肌细胞钙负荷的影响,并对细胞CaMKⅡ的表达变化进行检测。方法新生大鼠心房肌细胞原代培养96h,应用钙离子导入剂ion... 目的观察钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)抑制剂KN93对新生大鼠心房肌细胞钙负荷的影响,并对细胞CaMKⅡ的表达变化进行检测。方法新生大鼠心房肌细胞原代培养96h,应用钙离子导入剂ionomycin(1.0μmol/L)建立心房肌细胞钙超载模型,并在KN933种浓度(0.25、0.5、1.0μmol/L)的干预下,以钙离子指示剂Fluo-3/AM负载心房肌细胞,激光共聚焦显微镜观察心房肌细胞内游离钙的变化;应用Western blot法检测CaMKⅡ表达的变化。结果①细胞培养至第4天,免疫组织化学染色90%以上细胞α-肌动蛋白抗体阳性。②与对照组比较,钙离子导入剂ionomycin明显增加细胞内钙离子荧光值[(660.16±108.47)vs(376.12±57.57),P<0.01];KN93对细胞内钙离子荧光值无明显影响(P>0.05)。③预先加入3种不同浓度KN93可显著降低ionomycin导致的细胞内钙离子荧光强度的增加幅度(P<0.01),与对照组比较差异也有统计学意义(P<0.01)。④钙超载组细胞CaMKⅡ表达较对照组明显增加(P<0.01);而KN93对细胞CaMKⅡ表达影响不明显。⑤不同浓度KN93预处理后,钙超载组细胞CaMKⅡ的表达显著降低(P<0.01)。结论 CaMKⅡ抑制剂KN93可降低ionomycin引发的大鼠心房肌细胞钙负荷,并下调细胞CaMKⅡ表达。 展开更多

关键词 钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型 肌细胞 心脏 钙 大鼠

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钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱα对阿片诱导痛觉过敏大鼠中央杏仁核抑制性突触后电流的影响

7

作者 盛晴宇 张泽茹 罗放 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期575-579,共5页

目的探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)对阿片诱导痛觉过敏(OIH)大鼠中央杏仁核(CeA)抑制性突触后电流的影响。方法实验一:取雄性SD大鼠12只,随机分为对照组和KN93组,每组右侧CeA立体定位置管恢复1周后经颈皮下注射芬太尼(60 ... 目的探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)对阿片诱导痛觉过敏(OIH)大鼠中央杏仁核(CeA)抑制性突触后电流的影响。方法实验一:取雄性SD大鼠12只,随机分为对照组和KN93组,每组右侧CeA立体定位置管恢复1周后经颈皮下注射芬太尼(60 μg/kg×4次,间隔15 min)造OIH模型,随后对照组及KN93组大鼠CeA区分别注射50%DMSO 0.5 μl或CaMKⅡα抑制剂KN93 10 nmol,记录给药前后大鼠机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。实验二:另取雄性SD大鼠32只,随机分为Con-1组、Con-2组、OIH-1组和OIH-2组,建模成功后制成脑片,其中Con-1组与OIH-1组用膜片钳记录CeA区神经元自发抑制性突触后电流(sIPSCs);Con-2组和OIH-2组记录CeA区神经元微小抑制性突触后电流(mIPSCs),观察加用KN93 10 μmol/L前后上述电流幅值和频率的变化。结果实验一:与造模前比较,造模后两组MWT和TWL均明显降低(P < 0.01);与造模后比较,给药后KN93组MWT和TWL明显升高(P<0.01)。实验二:与Con-1组比较,OIH-1组sIPSCs幅值和频率明显降低(P<0.05),给药后OIH-1组sIPSCs幅值和频率明显升高(P<0.05),但对Con-1组无明显影响;与Con-2组比较,OIH-2组mIPSCs幅值和频率亦明显降低(P<0.05),给药前后OIH-2组与Con-2组mIPSCs幅值和频率差异无统计学意义。结论CaMKⅡα可抑制CeA区自发抑制性突触后电流,这可能是CaMKⅡα调制阿片诱导痛觉过敏的机制之一。 展开更多

关键词 杏仁核 阿片 痛觉过敏 钙/钙调素依赖性蛋白激酶ⅱα 抑制性突触后电流

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长期甲状腺素刺激对大鼠心肌Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的影响 被引量：5

8

作者 李超 刘善红 +2 位作者 张家明 刘敏 李景东 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期147-151,共5页

目的:通过观察长期甲状腺素刺激对心肌Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)的影响,探讨CaMKII是否参与甲亢性心脏病的发生发展。方法:将20只SD大鼠随机分为甲状腺素刺激组和对照组,每组各10只。以0.2 mg.kg-1.d-1的剂量腹腔注射甲状... 目的:通过观察长期甲状腺素刺激对心肌Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)的影响,探讨CaMKII是否参与甲亢性心脏病的发生发展。方法:将20只SD大鼠随机分为甲状腺素刺激组和对照组,每组各10只。以0.2 mg.kg-1.d-1的剂量腹腔注射甲状腺素或等体积生理盐水3个月(每次给药前称体重),造模后3个月处死大鼠。以心重(HW)、心重与体重之比(HW/BW)、左心室重与体重之比(LVW/BW)及心肌细胞直径大小反映心肌肥厚;以心肌血管周围胶原面积(PVCA)/血管腔面积(VA)的比值反映心肌纤维化。用实时定量RT-PCR和Western blotting分别从mRNA水平和蛋白表达水平反映CaMKII的变化。结果:造模3个月后与对照组相比,甲状腺素刺激组的HW/BW、LVW/BW、心肌细胞直径大小和心肌纤维化程度(PVCA/VA)均明显高于对照组,分别是对照组的1.87、1.84、2.15和1.94倍,差异均显著(P<0.05,P<0.01);甲状腺素刺激组心肌细胞中CaMKIImRNA表达水平、蛋白含量与对照组相比均降低,分别是对照组的40%和79%,但CaMKII的活性较对照组增加1.58倍,其差异均显著(P<0.05)。结论:长期甲状腺素刺激诱导大鼠心肌肥厚模型中,甲状腺素降低心肌CaMKII的表达,但心肌CaMKII的活性增加,CaMKII可能参与甲状腺素诱导的甲亢性心脏病的发生发展。 展开更多

关键词 心肌肥大 甲状腺素 钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶ⅱ

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钙依赖性蛋白激酶Ⅱδ在脑外伤后皮质中的表达变化 被引量：2

9

作者 潘泓 张静静 +3 位作者 徐冬冬 谷振勇 陶陆阳 张明阳 《法医学杂志》 CAS CSCD 2014年第3期169-171,177,共4页

目的观察钙-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱδ(calcium-calmodulindependentproteinkinaseⅡδ,CaMKⅡδ)在脑损伤后皮质中不同时段的表达变化。方法建立大鼠脑外伤模型,通过Western印迹法和免疫组织化学染色法检测损伤区周围皮质CaMKⅡδ的表... 目的观察钙-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱδ(calcium-calmodulindependentproteinkinaseⅡδ,CaMKⅡδ)在脑损伤后皮质中不同时段的表达变化。方法建立大鼠脑外伤模型,通过Western印迹法和免疫组织化学染色法检测损伤区周围皮质CaMKⅡδ的表达变化。结果 Western印迹法显示,CaMKⅡδ在正常皮质中有表达,损伤后表达上调,在损伤3d达到高峰,并随着损伤时间延长逐渐恢复到正常水平。免疫组织化学结果与Western印迹法结果一致。结论 CaMKⅡδ在脑组织损伤灶及其周围呈现先增高后降低的表达变化,为法医学推断脑外伤后损伤经过时间提供了新的参考指标。 展开更多

关键词 法医病理学 脑损伤 钙-钙调素依赖性蛋白激酶ⅱ 大鼠

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钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶II向突触转运的动物模型和在体实验方法

10

作者 郑瑞茂 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期244-244,共1页

关键词 钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶ⅱ 突触 转运 动物模型 在体实验

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补阳还五汤对血管性痴呆大鼠学习记忆功能及海马组织ERK2与CaMKⅡβ蛋白表达的影响 被引量：10

11

作者 唐敬龙 高维娟 +4 位作者 李玉明 钱涛 张泓波 李君 谢志 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1722-1727,共6页

目的:观察补阳还五汤对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆功能及其相关蛋白ERK2与CaMKⅡβ表达的影响。方法:采用Pulsinelli’s4血管阻断法制备VD动物模型,设假手术组、模型组、补阳还五汤组、尼莫地平组,在术后第7d、14d、28d,利用水迷宫试... 目的:观察补阳还五汤对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆功能及其相关蛋白ERK2与CaMKⅡβ表达的影响。方法:采用Pulsinelli’s4血管阻断法制备VD动物模型,设假手术组、模型组、补阳还五汤组、尼莫地平组,在术后第7d、14d、28d,利用水迷宫试验对各组大鼠进行行为学检测;术后第30d,采用HE染色方法观察海马CA1区形态学变化并进行神经元计数;采用Westernblotting方法观察大鼠CA1区海马组织ERK2与CaMKⅡβ蛋白表达变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠学习与记忆成绩明显下降(P<0.05);海马CA1区神经元排列紊乱,出现凝固性坏死,细胞脱失明显;ERK2与CaMKⅡβ蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,补阳还五汤组、尼莫地平组大鼠学习和记忆成绩均明显好转(P<0.05);海马CA1区神经元排列整齐,细胞形态正常,脱失不明显,接近假手术组;ERK2与CaMKⅡβ蛋白表达显著增多(P<0.05)。结论:补阳还五汤可能通过促进VD大鼠ERK2蛋白和CaMKⅡβ蛋白的表达,从而促进突触构建和学习记忆功能的恢复。 展开更多

关键词 补阳还五汤 痴呆 血管性 海马 Morris水迷宫 细胞外信号调节激酶2 钙/钙调素依赖性蛋白激酶ⅱβ

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CaMKⅡ在细胞钙稳态维持及心肌保护中作用的研究进展 被引量：10

12

作者 常荣 格日力 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期55-58,共4页

钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)是主要表达于心脏的一种多功能苏氨酸/丝氨酸蛋白激酶,通过磷酸化与Ca2+调节相关的蛋白影响心肌的兴奋收缩耦联及细胞钙稳态。在心肌缺血缺氧等病理条件下,心肌细胞钙离子循环出现异常,CaMKⅡ通过代... 钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)是主要表达于心脏的一种多功能苏氨酸/丝氨酸蛋白激酶,通过磷酸化与Ca2+调节相关的蛋白影响心肌的兴奋收缩耦联及细胞钙稳态。在心肌缺血缺氧等病理条件下,心肌细胞钙离子循环出现异常,CaMKⅡ通过代偿性活性改变起到维持Ca2+稳态及心肌保护效应。深入了解CaMKⅡ对钙循环的调节、在间歇性高海拔缺氧介导的心脏保护及心肌细胞内酸中毒后心肌收缩力恢复过程中的作用机制,具有重要的基础研究及临床应用前景。 展开更多

关键词 钙/钙调素依赖性蛋白激酶ⅱ 钙稳态 心肌保护

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鞘内注射硫酸镁和吗啡对切口痛大鼠脊髓背角p-αCaMK Ⅱ表达的影响 被引量：1

13

作者 刘艳阳 胡兴国 +3 位作者 龚琴 邹功胜 孔明 曾因明 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1208-1212,共5页

目的观察鞘内注射(it)硫酸镁(MgSO4)和吗啡对切口痛大鼠脊髓背角磷酸化钙—钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(p-αCaMKⅡ)表达的影响。方法所有大鼠术前8d鞘内置管,用机械缩足反射阈值、热缩足潜伏期和累计疼痛评分来评价大鼠疼痛行为学变化... 目的观察鞘内注射(it)硫酸镁(MgSO4)和吗啡对切口痛大鼠脊髓背角磷酸化钙—钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(p-αCaMKⅡ)表达的影响。方法所有大鼠术前8d鞘内置管,用机械缩足反射阈值、热缩足潜伏期和累计疼痛评分来评价大鼠疼痛行为学变化;用免疫组织化学和Western blot法来测定吗啡和硫酸镁对大鼠脊髓背角p-αCaMKⅡ表达的影响。结果术前或术后30minit吗啡5μg或MgSO4188μg和吗啡2.5μg使术后2h的机械性缩爪阈值(MWT)和热刺激缩爪阈值(TWL)明显延长(P<0.01),累积疼痛评分明显降低(P<0.01);术前30minitMgSO4375μg或吗啡5μg或MgSO4188μg和吗啡2.5μg使大鼠术后2h脊髓背角p-αCaMKⅡ表达明显减少(P<0.05)。结论在大鼠切口痛模型中,it吗啡5μg或MgSO4188μg和吗啡2.5μg具有确切的抗伤害作用,其抗伤害作用可能与抑制脊髓背角p-αCaMKⅡ表达有关。 展开更多

关键词 疼痛 硫酸镁 吗啡 钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶ⅱ 脊髓

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神经病理性疼痛引起大鼠空间记忆障碍和内侧前额叶PSD95以及CaMK Ⅱ-Thr^(305)的表达升高 被引量：4

14

作者 阚红军 于剑锋 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 2015年第3期182-188,共7页

目的:研究神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)对大鼠空间学习记忆功能和内侧前额叶(medical prefrontal cortex,m PFC)钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(alpha calcium/calmodulindependent protein kinaseⅡ,Ca MKⅡ)磷酸化水平以及突触后... 目的:研究神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)对大鼠空间学习记忆功能和内侧前额叶(medical prefrontal cortex,m PFC)钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(alpha calcium/calmodulindependent protein kinaseⅡ,Ca MKⅡ)磷酸化水平以及突触后密度蛋白95(postsynaptic density protein 95,PSD95)表达的影响。方法:选择经过八臂迷宫训练的雄性健康Wistar大鼠32只,将大鼠随机分为4组,神经病理性疼痛模型组(NP group,NP组,n=8),NP模型m PFC注射生理盐水组(NS组,n=8),NP模型m PFC注射Ca MKⅡ抑制剂KN-93组(KN-93组,n=8)和假手术组(sham operated group,SO组,n=8)。采用坐骨神经慢性压迫损伤制备大鼠NP模型。各组大鼠分别于术后第7、14、21、28和35天测机械缩足阈(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL),第29~35天再次进行八臂迷宫实验以检测大鼠的空间学习和记忆功能。术后第33天采用立体脑穿刺进行药物干预试验,建立NP模型m PFC注射生理盐水组(NS组)和NP模型m PFC注射Ca MKⅡ抑制剂KN-93组(KN-93组)两组实验模型,第35天进行八臂迷宫检测大鼠的空间学习和记忆功能,检测后立即处死大鼠,通过Western Blotting、RT-PCR和免疫荧光方法测定m PFC部位Ca MKⅡ磷酸化位点Thr305磷酸化水平和突触小体内PSD95表达水平。结果:与SO组相比,NP组、NS组和KN-93组的术后痛阈明显降低(P<0.05)。与SO组相比,NP组空间学习和记忆功能减退,PSD95表达升高,Ca MKⅡ-Thr305水平升高(P<0.05)。与NS组比较,KN-93组空间学习和记忆功能改善,PSD95表达降低,Ca MKⅡ-Thr305水平降低(P<0.05)。结论:NP能引起大鼠空间学习和记忆能力减退并使m PFC脑区的PSD95表达水平和Ca MKⅡ磷酸化水平升高。 展开更多

关键词 神经病理性疼痛 钙/钙调素依赖性蛋白激酶ⅱ 突触后密度蛋白95 记忆 KN-93

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CaMKⅡ抑制剂抑制AngⅡ或电场刺激诱导的心肌成纤维细胞TNF-α、TGF-β_1及collagenⅠ、Ⅲ的表达 被引量：5

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作者 钟拥军 陈东芹 姚小燕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1549-1554,共6页

目的:观察钙-钙调素依赖性蛋白激酶(CaMK)Ⅱ在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)或电场刺激(EFS)诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖、分泌细胞因子及胶原酶表达中的作用及其机制。方法:培养新生1-3 d乳鼠心肌成纤维细胞(3代),分为正常对照组(control)、0.... 目的:观察钙-钙调素依赖性蛋白激酶(CaMK)Ⅱ在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)或电场刺激(EFS)诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖、分泌细胞因子及胶原酶表达中的作用及其机制。方法:培养新生1-3 d乳鼠心肌成纤维细胞(3代),分为正常对照组(control)、0.1μmol/L AngⅡ组、0.1μmol/L AngⅡ+0.5μmol/L CaMKⅡ抑制剂KN92组、0.1μmol/L AngⅡ+0.5μmol/L CaMKⅡ抑制剂KN93组、0.1μmol/L AngⅡ+0.5μmol/L CaMKⅡ抑制剂AIP组;10 V1.0 Hz EFS组、10 V 1.0 Hz EFS+0.5μmol/L KN92组、10 V 1.0 Hz EFS+0.5μmol/L KN93组、10 V1.0 Hz EFS+0.5μmol/L AIP组、10 V1.0 Hz EFS+0.1μmol/L AngⅡ组。MTT法测定心肌成纤维细胞增殖;ELISA法测定细胞因子(TGF-β1,TNF-α)分泌;RT-PCR检测TGF-β1、TNF-α、collagenⅠ、ⅢmRNA水平。结果:CaMKⅡ抑制剂(0.5μmol/L KN93,0.5μmol/L AIP)能预防AngⅡ或EFS诱导的心肌成纤维细胞增殖;CaMKⅡ抑制剂(0.5μmol/L KN93,0.5μmol/L AIP)可预防AngⅡ或EFS引起的细胞培养上清液TGF-β1、TNF-α含量及相应mRNA表达增加。CaMKⅡ抑制剂(0.5μmol/L AIP,1.0μmol/L AIP)预防0.1μmol/L AngⅡ引起的collagenⅠ、Ⅲ表达增加。结论:抑制CaMKⅡ对AngⅡ或EFS诱导的心肌成纤维细胞增殖具有预防作用,其机制可能与CaMKⅡ抑制剂抑制TGF-β1、TNF-α以及胶原的表达有关。 展开更多

关键词 血管紧张素ⅱ 电场刺激 钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶ⅱ 转化生长因子β 肿瘤坏死因子 胶原酶Ⅰ 胶原酶Ⅲ

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CaMKⅡα/β稳定表达的PC12细胞株的构建及其功能的初步研究

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作者 张蕊 苑玉和 +1 位作者 赵明 陈乃宏 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1765-1770,共6页

目的建立稳定表达CaMKⅡα/β的PC12稳定细胞株,以便进一步研究钙/钙调素依赖性蛋白激酶CaMKⅡα/β不同亚型的生理功能。方法通过脂质体介导的方法将构建的表达载体pEGFP-CaMKⅡα/β转染入PC12细胞中,然后用含G418抗生素的选择性培养... 目的建立稳定表达CaMKⅡα/β的PC12稳定细胞株,以便进一步研究钙/钙调素依赖性蛋白激酶CaMKⅡα/β不同亚型的生理功能。方法通过脂质体介导的方法将构建的表达载体pEGFP-CaMKⅡα/β转染入PC12细胞中,然后用含G418抗生素的选择性培养基进行长期筛选,挑取耐药单克隆,培养并收集耐药的单克隆细胞;通过MTT法检测转染细胞在体外对PC12细胞增殖与活性的影响;Westernblot分析稳定表达的pEGFP-CaMKⅡα/β不同亚型对PC12细胞中相关突触囊泡蛋白表达的影响;并用高效液相色谱法(HPLC)检测过表达的CaMKⅡα/β对PC12细胞神经递质多巴胺DA释放的影响。结果 MTT细胞活性检测结果显示,转染重组质粒pEGFP-N1-CaMKⅡα/β的PC12细胞稳定株的生长活性与对照组相接近。应用Western blot方法对融合蛋白CaMKⅡα/β-GFP在PC12细胞内的表达进行鉴定,结果显示在PC12-CaMKⅡα/β组中,分子量82/89 ku处检测到该目的基因的大量表达,而在对照组的相应位置则没有任何条带,表明外源性目的基因已在细胞内过表达。West-ern blot方法检测突触囊泡蛋白结果显示CaMKⅡα/β不同亚型的过表达对囊泡蛋白的影响并无差异。HPLC检测结果显示过表达的CaMKⅡα/β对PC12细胞中DA的释放差异具有显著性。结论该实验获得稳定表达pEGFP-CaMKⅡα/β的PC12细胞株。初步探讨了该激酶的不同亚型对细胞功能的影响。 展开更多

关键词 钙-钙调素依赖性蛋白激酶camkⅱα/β 稳定细胞株 突触囊泡蛋白的表达 神经递质DA释放 融合蛋白 高效液相检测

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慢性铝暴露对大鼠海马神经元PKC、CaMKⅡ、Ng的影响 被引量：9

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作者 邢伟 王彪 +4 位作者 郝凤进 许金华 赵岩 刘素媛 时利德 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期410-414,共5页

通过研究慢性铝暴露对大鼠学习记忆和海马长时程增强(long-term potentiation,LTP)的影响,并检测海马神经元蛋白激酶C(protein kinasec,PKC)活性及Ca2+-钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca2+-calmodulin dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)和神经颗粒素... 通过研究慢性铝暴露对大鼠学习记忆和海马长时程增强(long-term potentiation,LTP)的影响,并检测海马神经元蛋白激酶C(protein kinasec,PKC)活性及Ca2+-钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca2+-calmodulin dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)和神经颗粒素(neurogranin,Ng)蛋白表达的变化,探讨铝暴露损害学习记忆的作用机制.选用断乳后Wistar大鼠,以含有不同浓度AlCl3的蒸馏水进行饲养.3个月后,测定铝暴露组大鼠脑内和血中的铝含量;测量记录大鼠海马群体峰电位(population spike,PS)LTP;用改良Takai法测定海马神经元PKC活性变化;Western印迹法检测CaMKⅡ和Ng的蛋白表达.结果显示,与对照组相比,铝暴露组的PKC活性降低,差异有统计学意义(P<0·01);与对照组相比,铝暴露组的CaMⅡ蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0·05);与对照组相比,铝暴露组的Ng蛋白表达降低,且差异有统计学意义(P<0·05).实验结果说明:慢性铝暴露可以降低大鼠海马神经元PKC的活性及Ng和CaMKⅡ的蛋白表达,可能影响Ng磷酸化水平,从而影响CaM与Ng之间的亲和性,也影响Ca2+-CaM对CaMKⅡ的调节,抑制LTP的形成,损害学习记忆的功能. 展开更多

关键词 铝 蛋白激酶C(PKC) Ca^2+-钙调蛋白激酶ⅱ(camkⅱ) 神经颗粒素(Ng) 学习记忆

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慢性缺氧对幼鼠心肌细胞CaM、CaMKⅡ的影响 被引量：2

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作者 赵鹏军 李奋 +4 位作者 朱飞云 潘俊 杨欢喜 钱龙华 孙锟 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期391-394,共4页

目的探讨慢性缺氧对心肌细胞钙调素(calmodulin,CaM)、钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin_dependentkinaseⅡ,CaMKⅡ)的影响。方法长期吸入FiO2为10%的混合气体,建立缺氧动物模型;用RT_PCR方法检测正常和慢性缺氧幼鼠心肌细胞... 目的探讨慢性缺氧对心肌细胞钙调素(calmodulin,CaM)、钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin_dependentkinaseⅡ,CaMKⅡ)的影响。方法长期吸入FiO2为10%的混合气体,建立缺氧动物模型;用RT_PCR方法检测正常和慢性缺氧幼鼠心肌细胞内CaM、CaMKⅡmRNA的变化;用WesternBlot方法检测两组动物心肌细胞CaM、CaMKⅡ蛋白水平的改变。结果随缺氧时间延长,幼鼠心肌细胞内CaM、CaMKⅡmRNA转录水平均上调,缺氧1周和3周组动物和正常组比较差异有显著性(P<0.05),CaM、CaMKⅡδ缺氧1周组和缺氧3周组比较差异也有显著性(P<0.01),CaMKⅡγ缺氧1周组和缺氧3周组比较差异无显著性(P>0.05);随缺氧时间延长,心肌细胞内CaM、CaMKⅡ蛋白含量也逐渐增高,两者变化趋势相似。结论长期慢性缺氧可使心肌细胞内CaM、CaMKⅡ含量增高,CaM和CaMKⅡ不仅调控心肌细胞Ca2+活动,而且调控某些基因的表达,使心肌肥厚、心室扩张。因此,慢性缺氧可影响心肌细胞电-机械收缩活动,对心功能产生影响。 展开更多

关键词 慢性缺氧 钙调素 钙/钙调素依赖性蛋白激酶ⅱ 钙离子 心律失常

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巨细胞病毒感染小鼠学习记忆与CaMKⅡ表达的变化 被引量：4

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作者 张英 曹云霞 +2 位作者 程苾恒 闻良珍 丛林 《实用医学杂志》 CAS 2008年第13期2202-2204,共3页

目的:探讨巨细胞病毒感染对小鼠学习记忆的影响、Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达,及其在学习与记忆中的作用。方法:采用颅内注射制造巨细胞病毒颅内感染小鼠模型,利用Morris水迷宫试验对病毒感染组和对照组动物的学习和... 目的:探讨巨细胞病毒感染对小鼠学习记忆的影响、Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达,及其在学习与记忆中的作用。方法:采用颅内注射制造巨细胞病毒颅内感染小鼠模型,利用Morris水迷宫试验对病毒感染组和对照组动物的学习和记忆成绩进行3 d测试,记录其学习和记忆成绩,同时观察海马组织神经细胞[Ca2+]i及CaMKⅡ在胞膜中表达水平的变化。结果:Morris水迷宫测试的结果显示,病毒感染组小鼠的学习记忆成绩明显下降,神经细胞[Ca2+]i较对照组增高,胞膜蛋白CaMKⅡ的水平表达下降,且差异有显著性(P<0.01)。结论:巨细胞病毒感染能够导致小鼠学习记忆能力下降及CaMKⅡ在神经细胞胞膜的表达下降,说明CaMKⅡ参与了巨细胞病毒对学习记忆的影响。 展开更多

关键词 巨细胞病毒感染 钙-钙调素依赖性蛋白激酶 学习记忆能力

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细胞外信号调节激酶通路抑制剂对完全弗氏佐剂致痛大鼠背根神经结中谷氨酸转运蛋白表达的影响 被引量：3

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作者 苏小军 郝建华 +1 位作者 郭正刚 李萌萌 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第7期1128-1130,共3页

目的:观察细胞外信号调节激酶(ERK)通路抑制剂PD98059对完全弗氏佐剂(CFA)致痛大鼠脊髓背根神经结(DRG)中谷氨酸转运蛋白表达的影响。方法:24只大鼠随机分为对照组、单纯致痛组、PD1组和PD10组。疼痛模型采用大鼠足底注射CFA100μL。对... 目的:观察细胞外信号调节激酶(ERK)通路抑制剂PD98059对完全弗氏佐剂(CFA)致痛大鼠脊髓背根神经结(DRG)中谷氨酸转运蛋白表达的影响。方法:24只大鼠随机分为对照组、单纯致痛组、PD1组和PD10组。疼痛模型采用大鼠足底注射CFA100μL。对照组及单纯致痛组经椎管内给予二甲基亚砜(DMSO)10μL,每日2次。PD1组和PD10组分别经椎管内给予PD980591μg或10μg,每日2次。测定大鼠每日痛阈变化,3d后RT-PCR法检测大鼠DRG内谷氨酸转运蛋白表达的变化。结果:注射CFA致痛后各组大鼠痛阈均显著降低,PD1组与PD10组大鼠痛阈均较单纯致痛组显著升高,PD1组与PD10组痛阈升高差异无显著性。单纯致痛组DRG中谷氨酸转运体1(GLT-1)和兴奋性氨基酸载体1(EAAC1)表达显著高于对照组、PD1组、PD10组。除PD1组DRG中GLT-1表达高于对照组外,PD1组、PD10组及对照组DRG中GLT-1与EAAC1表达差异无显著性。结论:鞘内给予PD98059可减轻大鼠足底注射CFA引起的疼痛反应并减低致痛侧DRG中谷氨酸转运蛋白表达。 展开更多

关键词 钙-钙调素依赖性蛋白激酶类 谷氨酸 载体蛋白质类 炎性疼痛 完全弗氏佐剂

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