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动脉平滑肌细胞的钙池操纵钙通道对细胞自噬的调节 被引量：3
1
作者 齐元麟 陈富华 +3 位作者 任正肖 王情 王丹 张明芳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1416-1421,共6页
目的探讨大鼠动脉平滑肌细胞A7R5上钙池操纵性钙通道(store-operated calcium channel,SOCC)对细胞自噬的影响。方法在293T细胞中包装含有STIM1、Orai1基因的慢病毒,将获得的慢病毒LV-STIM1、LV-Orai1感染大鼠A7R5细胞,Western blot检... 目的探讨大鼠动脉平滑肌细胞A7R5上钙池操纵性钙通道(store-operated calcium channel,SOCC)对细胞自噬的影响。方法在293T细胞中包装含有STIM1、Orai1基因的慢病毒,将获得的慢病毒LV-STIM1、LV-Orai1感染大鼠A7R5细胞,Western blot检测感染前后STIM1、Orai1蛋白表达及细胞自噬调节蛋白Beclin-1的表达。慢病毒感染A7R5后饥饿处理6 h或雷帕霉素处理24 h,Western blot检测处理后各组自噬相关蛋白LC3的蛋白表达量。结果重组载体p LV-STIM1、p LV-Orai1经双酶切鉴定正确。在293T成功包装慢病毒LV-STIM1、LV-Orai1。病毒感染A7R5后,与对照组相比,STIM1、Orai1蛋白表达量分别上调96%和163%,而自噬调节蛋白Beclin 1下调64%。饥饿或雷帕霉素处理可明显增加细胞自噬水平,体现为自噬标志蛋白LC3-Ⅱ含量增加,而慢病毒感染STIM1、Orai1可明显抑制饥饿或雷帕霉素诱导的细胞自噬。结论在大鼠动脉平滑肌A7R5细胞过表达钙池操纵钙通道分子STIM1和Orai1可使细胞自噬水平降低。这一分子机制可能与肺动脉高压发病相关。 展开更多
关键词 动脉平滑肌细胞 钙池操纵钙通道 细胞自噬 基质相互作用分子1 钙释放激活钙通道蛋白1 肺动脉高压
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钙离子感受蛋白STIM1与Orai1在钙敏感受体介导钙内流及NO生成中的相互作用 被引量：2
2
作者 王腊梅 钟华 +3 位作者 唐娜 庞丽娟 张春军 何芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1773-1780,共8页
目的:研究Ca^(2+)感受蛋白[基质相互作用分子1(STIM1)与钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)]在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(Ca SR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。方法:将Ca SR激动剂精胺[钙池操纵性钙通道(SOC)和受... 目的:研究Ca^(2+)感受蛋白[基质相互作用分子1(STIM1)与钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)]在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(Ca SR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。方法:将Ca SR激动剂精胺[钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)均激活]单用或与ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(TPA)+Ca SR负性变构调节剂Calhex 231(激活ROC、阻断SOC)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro 31-8220和PKCα/β1选择性抑制剂Go 6976(激活SOC、阻断ROC)联合孵育HUVECs;利用免疫荧光技术检测HUVECs中STIM1和Orai1的蛋白表达和共定位;免疫共沉淀法检测STIM1和Orai1之间的相互作用;取2~3代HUVECs随机分为特异性的质粒转染组(sh STIM1+sh Orai1组)、空质粒组(vehicle-STIM1+vehicle-Orai1组)和未转染组(control组),将3组细胞分别加入上述4组不同药物刺激,采用荧光探针Fura-2/AM检测HUVECs中Ca^(2+)浓度的变化,NO荧光探针DAF-FM DA负载方法同步检测HUVECs中NO生成的变化。结果:STIM1和Orai1蛋白表达共定位于胞浆,与control组相比,加入Calhex 231+TPA、Ro 31-8220和Go 6976刺激后,STIM1和Orai1在胞浆中的定位均减少,且二者的相互作用均减弱;在4种不同处理因素作用下,sh STIM1+sh Orai1组细胞内Ca^(2+)浓度和NO净荧光强度均明显降低(P<0.05)。结论:STIM1与Orai1以二元复合物的形式共同调节Ca SR,并通过激活SOC和ROC介导钙内流及NO生成。 展开更多
关键词 基质相互作用分子1 钙释放激活钙通道蛋白1 钙敏感受体 一氧化氮
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视觉系统中钙库操纵钙内流通路的研究进展 被引量：1
3
作者 杜宇翔 郭大东 毕宏生 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2014年第4期389-393,共5页
钙库操纵的钙通道(store operated Ca2+channel,SOCC)和钙库操纵的钙内流(store-operated calcium entry,SOCE)普遍存在于细胞之中,是非兴奋细胞主要的钙内流方式,参与了机体众多的生理过程。许多眼科疾病的发生和发展与SOCE的异常密切... 钙库操纵的钙通道(store operated Ca2+channel,SOCC)和钙库操纵的钙内流(store-operated calcium entry,SOCE)普遍存在于细胞之中,是非兴奋细胞主要的钙内流方式,参与了机体众多的生理过程。许多眼科疾病的发生和发展与SOCE的异常密切相关。本文就近年来对SOCE途径的机制、STIM和Orai不同亚型的结构及在眼科疾病中的作用研究进行了回顾,以期为眼科疾病治疗提供新的思路。 展开更多
关键词 钙库操纵的钙内流 基质相互作用因子 钙释放激活钙通道蛋白 眼科疾病
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高糖对H9C2心肌细胞系和乳大鼠心室肌细胞钙库操纵性钙内流及相关蛋白的影响 被引量：2
4
作者 沙勒塔娜提·塔拉别克 孙志朋 +2 位作者 王璐琪 油红捷 罗大力 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第3期411-420,共10页
目的探究高糖环境对大鼠胚胎心肌细胞系(H9C2)和乳大鼠心室肌细胞(neonatal rat ventricular myocytes,NRVMs)钙库操纵性钙内流(store operated calcium entry,SOCE)功能的影响,对基质相互作用分子1(stromal interaction molecule 1,STI... 目的探究高糖环境对大鼠胚胎心肌细胞系(H9C2)和乳大鼠心室肌细胞(neonatal rat ventricular myocytes,NRVMs)钙库操纵性钙内流(store operated calcium entry,SOCE)功能的影响,对基质相互作用分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)蛋白表达及其激活结构的作用,完善SOCE在糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)中的潜在致病机制。方法将H9C2和NRVMs细胞分为2组,对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)和高糖组(25 mmol/L葡萄糖),分别培养48 h后用激光共聚焦显微镜实时观察各组心肌细胞在毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)刺激后Ca2+荧光强度值的变化;采用Western blotting技术检测各组细胞STIM1和钙释放激活钙通道调节分子1(calcium release-activated calcium channel modulator 1,Orai1)蛋白表达的变化;借助化学交联技术和免疫荧光法检测NRVMs的STIM1蛋白的聚集变化;免疫共沉淀技术观察NRVMs心肌细胞内源性STIM1和Orai1蛋白的直接相互作用。结果与对照组相比,高糖组H9C2和NRVMs心肌细胞钙内流(Ca2+ influx)显著增加(P<0.05);高糖组H9C2和NRVMs心肌细胞STIM1以及Orai1蛋白表达上调(P<0.01);钙库排空后,高糖组NRVMs心肌细胞STIM1蛋白聚集体显著增多(P<0.01)。结论体外高糖能诱导大鼠胚胎心肌细胞系H9C2及乳大鼠原代培养心室肌细胞NRVMs的STIM1和Orai1蛋白表达上调,促进STIM1蛋白激活形成聚集体和SOCE激活,Ca2+内流增多。该作用提示高糖增加的心肌细胞SOCE可能与糖尿病心肌肥大有关。 展开更多
关键词 高糖 钙库操纵性钙内流 基质相互作用分子1 钙释放激活钙通道调节分子1
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神经元钙信号系统异常与阿尔茨海默病的“钙假说” 被引量：5
5
作者 王刘清 窦非 王友军 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期689-698,共10页
钙信号是细胞调节各项生命活动的重要机制。神经元通过胞外钙离子(calcium ion,Ca^(2+))内流、内质网Ca;释放以及Ca;释放介导的Ca;内流等方式产生具有时空特异性的钙信号,用于调控多种生物学过程,例如动作电位的调节、神经递质的释放、... 钙信号是细胞调节各项生命活动的重要机制。神经元通过胞外钙离子(calcium ion,Ca^(2+))内流、内质网Ca;释放以及Ca;释放介导的Ca;内流等方式产生具有时空特异性的钙信号,用于调控多种生物学过程,例如动作电位的调节、神经递质的释放、轴突的生长以及突触可塑性等。神经元胞内Ca;浓度因受到细胞精确调控而处于动态平衡之中。若钙信号失调导致平衡被打破,则会造成神经元功能异常甚至死亡。近年来多项研究表明,钙稳态失衡与神经退行性疾病,例如阿尔茨海默病等的产生和发展密切相关,由此发展出关于阿尔茨海默病的钙假说。该假说认为,神经元钙稳态调节机制的持续性改变是神经元功能失常、大脑产生慢性疾病的重要因素。阿尔茨海默病发生发展过程中,神经元胞浆钙水平异常增高,致使多种钙依赖性酶的活性异常,进而影响基因转录。虽然内质网钙稳态的变化目前仍存在一定的争议,但较为确定的是线粒体中存在着钙超载的现象,导致氧化磷酸化反应下调,活性氧的产量增加,进而引发细胞凋亡。本文主要介绍了神经元钙信号系统及其功能,简要梳理了阿尔茨海默病钙假说的相关研究,并对后续研究进行了展望。 展开更多
关键词 神经元 钙释放激活钙通道 阿尔茨海默病 钙假说
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CRAC通道在胰腺炎发病机制中作用的研究进展
6
作者 彭爽 孙泽林 +2 位作者 廖蝶 杨晓淋 柯路 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2351-2358,2366,共9页
钙释放激活钙(CRAC)通道是一种在非兴奋性细胞中广泛表达的非选择性钙离子通道。CRAC通道的开放是不同胰腺细胞和免疫细胞中钙内流的主要机制。因此,CRAC通道对于胰腺外分泌的钙稳态及其多种生理功能至关重要。大量研究表明,CRAC通道在... 钙释放激活钙(CRAC)通道是一种在非兴奋性细胞中广泛表达的非选择性钙离子通道。CRAC通道的开放是不同胰腺细胞和免疫细胞中钙内流的主要机制。因此,CRAC通道对于胰腺外分泌的钙稳态及其多种生理功能至关重要。大量研究表明,CRAC通道在急性和慢性胰腺炎的病理生理过程中发挥着关键作用。本文旨在回顾CRAC通道在急性和慢性胰腺炎发病机制中的最新发现,并讨论基于CRAC通道药物开发的当前应用和未来方向。 展开更多
关键词 钙释放激活钙通道 钙信号 钙超载 急性胰腺炎 慢性胰腺炎
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超氧阴离子对牛主动脉平滑肌细胞收缩性的影响
7
作者 承伟 小山澈野 大池正宏 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1215-1217,共3页
目的观察超氧阴离子对培养的牛动脉平滑肌细胞内钙及收缩性的影响。方法原代培养牛动脉平滑肌,使用数字荧光显微镜技术测定细胞内钙,采用胶原凝胶收缩方法分析收缩性。结果超氧阴离子对高钾溶液及A-23187诱导的钙内流无明显影响(P>0.... 目的观察超氧阴离子对培养的牛动脉平滑肌细胞内钙及收缩性的影响。方法原代培养牛动脉平滑肌,使用数字荧光显微镜技术测定细胞内钙,采用胶原凝胶收缩方法分析收缩性。结果超氧阴离子对高钾溶液及A-23187诱导的钙内流无明显影响(P>0.05),但可使凝胶收缩面积减小。超氧阴离子可使高钾诱导的胶原凝胶收缩面积从18.32%±2.11%减小至5.13%±0.45%(P<0.01),使A-23187诱导的胶原凝胶收缩面积从17.16%±1.10%减小至4.31%±0.04%(P<0.01)。结论超氧阴离子可明显抑制牛主动脉平滑肌细胞收缩性,但对电压依赖性钙通道引起的钙内流及A-23187诱导的细胞内钙变化无影响。 展开更多
关键词 动脉平滑肌细胞 收缩性 细胞内钙 超氧阴离子 钙释放激活钙通道 电压依赖性钙通道
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高车前素通过调控Orai1介导的Ca^(2+)内流对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的影响 被引量：3
8
作者 李光辉 王前进 +1 位作者 王俊杰 李明 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2023年第2期628-636,共9页
目的探讨高车前素(His)对IL^(-1)β诱导的软骨细胞凋亡的影响,并初步阐明其作用机制。方法分离大鼠膝骨关节软骨细胞,采用10 ng·mL^(-1)IL^(-1)β处理软骨细胞建立骨关节炎细胞模型,并采用不同浓度(5、10、20μmol·L^(-1))Hi... 目的探讨高车前素(His)对IL^(-1)β诱导的软骨细胞凋亡的影响,并初步阐明其作用机制。方法分离大鼠膝骨关节软骨细胞,采用10 ng·mL^(-1)IL^(-1)β处理软骨细胞建立骨关节炎细胞模型,并采用不同浓度(5、10、20μmol·L^(-1))His处理24 h。采用CCK-8检测细胞增殖活性;ELISA法检测细胞培养液中炎症因子IL-6和TNF-α水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平及细胞内Ca^(2+)浓度;Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3、钙释放激活钙通道调节分子1(Orai1)及内质网应激相关蛋白CHOP、GRP78表达水平。将Orai1过表达质粒(pcDNA-Orai1)转染至软骨细胞中,采用10 ng·mL^(-1)IL^(-1)β联合20μmol·L^(-1)His处理24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡水平;Fluo-4/AM荧光探针标记法检测细胞内Ca^(2+)浓度。结果10 ng·mL^(-1)IL^(-1)β可降低大鼠软骨细胞增殖活性,诱导软骨细胞凋亡,提高细胞培养液中IL-6和TNF-α水平以及细胞内Ca^(2+)浓度,上调细胞中Bax、cleaved-Caspase-3、Orai1、CHOP和GRP78等蛋白表达水平,下调Bcl-2蛋白表达水平。His可提高IL^(-1)β处理的软骨细胞增殖活性,抑制IL^(-1)β诱导的软骨细胞凋亡,并降低细胞培养液中IL-6和TNF-α水平以及细胞内Ca^(2+)浓度,下调细胞中Bax、cleaved-Caspase-3、Orai1、CHOP和GRP78等蛋白表达水平,上调Bcl-2蛋白表达水平。Orai1过表达可逆转His对IL^(-1)β诱导的软骨细胞凋亡及胞内Ca^(2+)浓度的影响。结论His可抑制IL^(-1)β诱导的软骨细胞凋亡,其作用机制可能与下调Orai1介导Ca^(2+)内流引起的内质网应激凋亡途径有关。 展开更多
关键词 高车前素 软骨细胞 钙释放激活钙通道调节分子1 细胞凋亡
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舌下含服免疫治疗对效应性T细胞和调节性T细胞功能的影响
9
作者 戴飞 魏瑾瑾 +2 位作者 汤欣玥 陈峥 蔺林 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期626-632,共7页
目的·研究舌下含服免疫治疗(sublingual immunotherapy,SLIT)对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)炎症反应中效应性T细胞(effector T cell,Teff)和调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)功能的影响。方法·选择复旦大学附属华... 目的·研究舌下含服免疫治疗(sublingual immunotherapy,SLIT)对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)炎症反应中效应性T细胞(effector T cell,Teff)和调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)功能的影响。方法·选择复旦大学附属华山医院北院耳鼻咽喉头颈外科招募的20例AR患者,分别在治疗前及治疗24个月和30个月时获取其外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),检测PBMC中Teff和Treg所占CD4+ T细胞百分比,并检测PBMC中2种细胞钙释放激活钙通道调节分子1(calcium release-activated calcium channel modulator 1,ORAI1)蛋白的浓度和Ca2+平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)。然后将治疗30个月时的2种细胞进行体外培养,检测2种细胞中ORAI1蛋白的表达以及培养基中白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)和IL-10浓度。制备含人ORAI1短发夹RNA的慢病毒并将其转染至2种细胞,再次检测2种细胞中Ca2+ MFI和培养基中IL-4和IL-10的浓度。结果·在治疗24个月和30个月时PBMC中Teff所占CD4+ T细胞百分比逐渐减少(P=0.000,P=0.027),而Treg所占CD4+ T细胞百分比逐渐增多(P=0.000,P=0.008);Teff中ORAI1蛋白表达量(P=0.000,P=0.003)和Ca2+ MFI(P=0.000,P=0.000)也逐渐减少,而Treg中ORAI1蛋白表达量(P=0.000,P=0.007)和Ca2+ MFI(P=0.000,P=0.000)随着治疗时间延长逐渐增多。体外培养的2种细胞均表达ORAI1蛋白,而且在慢病毒转染后,细胞中Ca2+ MFI降低(P=0.004,P=0.000),培养基中IL-4(P=0.009)和IL-10(P=0.000)的浓度均显著降低。结论·SLIT可以通过调节ORAI1蛋白的表达控制Teff和Treg细胞的功能。 展开更多
关键词 免疫治疗 变应性鼻炎 T细胞 钙释放激活钙通道调节分子1 细胞因子
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