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香蕉钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白基因MaCBL1的克隆及序列分析 被引量:3
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作者 李美英 徐碧玉 +3 位作者 杨小亮 刘菊华 张建斌 金志强 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第26期11257-11259,共3页
[目的]为香蕉钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白基因MaCBL1调控机理的研究奠定基础。[方法]根据在香蕉果实抑制缩减文库中获得的一个CBL基因片段,采用PCR方法克隆了MaCBL1基因全长cDNA序列并对其进行了初步的生物信息学分析。[结果]MaCBL1基因c... [目的]为香蕉钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白基因MaCBL1调控机理的研究奠定基础。[方法]根据在香蕉果实抑制缩减文库中获得的一个CBL基因片段,采用PCR方法克隆了MaCBL1基因全长cDNA序列并对其进行了初步的生物信息学分析。[结果]MaCBL1基因cDNA序列全长1 078 bp,编码213个氨基酸残基。多重序列比对结果显示,MaCBL1推导的氨基酸序列与其他植物来源的CBL基因的氨基酸序列同源性较高。遗传进化分析表明MaCBL1与其他植物如杨树、甘蓝、沙冬青、棉花和水稻的CBL基因的亲缘关系较近,并在同一个进化枝上。[结论]该研究为进一步研究香蕉钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白对香蕉生长发育、果实的成熟调控及对各种逆境反应的调控提供了依据。 展开更多
关键词 香蕉 钙调神经磷酸酶b亚基样蛋白基因 克隆 序列分析
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杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白PbCBL10基因的克隆和表达特性研究 被引量:9
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作者 李慧 丛郁 +2 位作者 常有宏 蔺经 盛宝龙 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期550-556,共7页
【目的】为了探明杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白(CalcineurinB—likeprotein,CBL)基因的序列特征和表达特点,【方法】以杜梨幼苗为试材,运用同源克隆和半定量RT—PCR对PbCBLIO基因进行克隆和表达分析。【结果】结果表明.PbCBLIO基因... 【目的】为了探明杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白(CalcineurinB—likeprotein,CBL)基因的序列特征和表达特点,【方法】以杜梨幼苗为试材,运用同源克隆和半定量RT—PCR对PbCBLIO基因进行克隆和表达分析。【结果】结果表明.PbCBLIO基因编码区cDNA长度为801bp,编码的多肽由266个氨基酸组成。该多肽预测的等电点为4.56,估计的相对分子质量为30.45ku。其对应基因组DNA序列长1983bp,包括9个外显子和8个内含子。通过PSORT进行亚细胞定位分析发现PbCBLl0蛋白位于质膜上的几率最大。PbCBLIO基因编码的多肽具有4个钙离子结合域EF手形结构和1个钙调磷酸酶A亚基结合位点。PbCBLl0与番茄S1CBLIO(NP_001239045)和拟南芥AtCBLl0(NP_195026)蛋白间的同源性较高,分别为82%和77%,并与AtCBL10亲缘关系最近。PbCBL10基因在杜梨幼苗根、茎和叶片中均为诱导型表达,50~200mmol·L^(-1)CaCl2、20μmol·L^(-1)ABA、100mmol·L^(-1)NaCl、10%(w/v)PEG6000或180mmol·L^(-1)甘露醇处理后其表达量明显上调。【结论】PbCBLIO基因具备植物CBL基因家族的固有特征,能够响应胞内钙浓度变化,对ABA、盐碱、干旱和渗透胁迫均存在转录响应。 展开更多
关键词 杜梨 磷酸酶b亚基蛋白 基因克隆 表达特性
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类钙调磷酸酶B亚基蛋白GhCBL3-A01调控棉花黄萎病抗性的功能分析 被引量:1
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作者 高升旗 邵武奎 +3 位作者 赵准 邵盘霞 胡文冉 黄全生 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2023年第6期447-458,共12页
【目的】解析类钙调磷酸酶B亚基蛋白(calcium B-like protein,CBL)基因GhCBL3-A01在棉花抗黄萎病反应中的功能,为棉花抗病育种提供基因资源。【方法】从棉花基因组数据库获得GhCBL3-A01基因的同源序列,进行生物信息学分析。采用实时荧... 【目的】解析类钙调磷酸酶B亚基蛋白(calcium B-like protein,CBL)基因GhCBL3-A01在棉花抗黄萎病反应中的功能,为棉花抗病育种提供基因资源。【方法】从棉花基因组数据库获得GhCBL3-A01基因的同源序列,进行生物信息学分析。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)、茉莉酸甲酯(methyl jasminate,MeJA)和H2O2处理的棉株中GhCBL3-A01基因的表达量变化。利用病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术研究GhCBL3-A01在棉花抗黄萎病中的功能。通过检测活性氧积累以及相关基因的表达量,初步分析GhCBL3-A01的作用机制。【结果】陆地棉中GhCBL3-A01及其3个同源蛋白均含有3个CBL家族典型的EF-hand结构域。大丽轮枝菌、MeJA和H2O2处理后,GhCBL3-A01的表达量显著升高。VIGS沉默GhCBL3-A01导致病株率和病情指数显著降低,茎秆维管束褐变程度减轻,有病菌繁殖的茎段数量明显减少,增强了棉株对黄萎病的抗性。GhCBL3-A01基因沉默棉株叶片中活性氧积累增多,防御相关基因PR1、NPR1、PR4和PDF1.2以及茉莉酸信号通路关键基因AOS1、OPR3、MYC2和LOX2的表达量增加。【结论】GhCBL3-A01通过调控防御相关基因、茉莉酸信号通路基因的表达和活性氧积累负调控棉花对黄萎病的抗性,是提高棉花黄萎病抗性的候选基因。 展开更多
关键词 棉花 黄萎病 磷酸酶b亚基蛋白 GhCbL3-A01 抗病基因 病毒诱导的基因沉默
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钙调神经磷酸酶B亚基高表达条件及产业化研究
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作者 靳风智 石太平 +1 位作者 王小萌 魏群 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期255-259,共5页
重组人CNB高表达大肠杆菌已由本室构建成功 ,摇瓶发酵液表达量可达 10 0mg·L- 1.通过改进培养基配方及摇瓶表达工艺 ,使CNB在摇瓶发酵液中表达量达到 5 0 0mg·L- 1以上 .在高表达量的基础上 ,又进行了产业化改进 ,以蒸馏水添... 重组人CNB高表达大肠杆菌已由本室构建成功 ,摇瓶发酵液表达量可达 10 0mg·L- 1.通过改进培养基配方及摇瓶表达工艺 ,使CNB在摇瓶发酵液中表达量达到 5 0 0mg·L- 1以上 .在高表达量的基础上 ,又进行了产业化改进 ,以蒸馏水添加无机盐取代了原配方中的自来水 ,并提高了表达量 . 展开更多
关键词 神经磷酸酶 亚基b 表达 基因工程 产业化
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两个菜心CBL基因的克隆、生物信息学分析及其表达特性分析 被引量:1
5
作者 朱云娜 符质 +4 位作者 冯慧敏 王斌 沈雪晴 汤婉君 刘建国 《山东农业科学》 北大核心 2023年第7期1-9,共9页
本研究以‘油绿501’菜心(Brassica campestris L.ssp.chinensis var.utilis Tsen et Lee)为材料,采用同源克隆方法对其CBL1、CBL9基因进行克隆,运用DNAMAN和MEGA软件对其编码蛋白序列进行同源性分析和系统进化分析,并利用qRT-PCR技术... 本研究以‘油绿501’菜心(Brassica campestris L.ssp.chinensis var.utilis Tsen et Lee)为材料,采用同源克隆方法对其CBL1、CBL9基因进行克隆,运用DNAMAN和MEGA软件对其编码蛋白序列进行同源性分析和系统进化分析,并利用qRT-PCR技术分析二者在菜心组织中及不同氮素形态条件下的表达模式。结果表明:菜心CBL1、CBL9基因的cDNA全长均为642 bp,编码213个氨基酸,分别命名为BcCBL1和BcCBL9,具有CBL蛋白结合Ca2+所必需的EF-hand型结构域(EFh)。BcCBL1、BcCBL9编码的氨基酸序列与拟南芥(Arabidopsis thaliana)、大白菜(Brassica rapa)等物种的同源性均达95%以上;二者分别与大白菜的BrCBL1、BrCBL9遗传距离最近,并与拟南芥AtCBL1、AtCBL9共同聚类为一支。BcCBL1和BcCBL9在菜心各组织器官中均有表达,前者在菜心叶片中表达水平较高,后者在菜心荚果等组织中表达水平较高;两者表达受氮素形态及水平影响,前者在低浓度NO_(3)^(-)或NH_(4)^(+)处理后上调表达,后者表达随NH_(4)^(+)浓度增加而上调表达。该研究结果可为进一步研究菜心CBL1和CBL9在氮素吸收利用过程中的功能及其调控机制提供一定理论基础。 展开更多
关键词 菜心 氮素形态 磷酸酶b亚基蛋白 基因克隆 生物信息学分析 表达分析
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