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桃钙调磷酸酶B类似蛋白基因家族鉴定与分析 被引量：2
1
作者 张杰伟 吴婷 +2 位作者 任飞 谢华 魏建华 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期511-516,共6页
为了研究桃钙调磷酸酶B类似蛋白(CBLs)基因家族在桃中如何发挥作用。利用桃基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定桃CBL家族基因的基因结构、染色体定位和编码蛋白,通过序列比对进行进化和分类分析。结果表明,桃基因组中含有8个CBL家族... 为了研究桃钙调磷酸酶B类似蛋白(CBLs)基因家族在桃中如何发挥作用。利用桃基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定桃CBL家族基因的基因结构、染色体定位和编码蛋白,通过序列比对进行进化和分类分析。结果表明,桃基因组中含有8个CBL家族基因,分布于桃的5条染色体上。MEME和Pfam保守结构域分析显示,桃CBL蛋白均含有4个保守的EF结构域。进化树分析表明CBLs可分为4个亚家族。TMHMM 2.0Server分析显示仅PpCBL1含有1个跨膜区。PlantsPFeatureScan分析显示PpCBL2、3和5均含有1个N-豆蔻酰化位点。NetPhos 2.0 Server结果显示PpCBLs存在着大量的丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)及酪氨酸(Tyr)潜在磷酸化位点。以上结果将为今后揭示桃CBL的功能提供重要的理论基础。 展开更多
关键词 钙调磷酸酶b类似蛋白 桃 基因家族 进化分析 序列特征
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桃钙调磷酸酶B类似蛋白互作蛋白激酶基因家族鉴定与分析
2
作者 张杰伟 杨育峰 +2 位作者 任飞 谢华 魏建华 《科学技术与工程》 北大核心 2016年第24期127-131,共5页
钙调磷酸酶B类似蛋白互作蛋白激酶(CIPKs)在植物生长发育和抗逆过程中发挥着重要作用。为了对桃中CIPK家族基因进行系统分析,利用桃基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定桃CIPK家族基因的基因结构、染色体定位和编码蛋白,通过序列比对... 钙调磷酸酶B类似蛋白互作蛋白激酶(CIPKs)在植物生长发育和抗逆过程中发挥着重要作用。为了对桃中CIPK家族基因进行系统分析,利用桃基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定桃CIPK家族基因的基因结构、染色体定位和编码蛋白,通过序列比对进行进化和分类分析。结果表明,桃基因组中含有18个CIPK基因,分布于桃的6条染色体上。MEME和Pfam保守结构域分析显示,桃CIPK蛋白均含有2个保守的PKinase和NAF结构域。进化树分析表明CIPKs可分为2个亚家族。Net Phos 2.0 Server结果显示Pp CIPKs存在着大量的丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)及酪氨酸(Tyr)潜在磷酸化位点。以上结果将为今后揭示桃CIPK蛋白的功能提供重要的理论基础。 展开更多
关键词 钙调磷酸酶b类似蛋白互作蛋白激酶 桃 基因家族 进化分析
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杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白PbCBL10基因的克隆和表达特性研究 被引量：9
3
作者 李慧 丛郁 +2 位作者 常有宏 蔺经 盛宝龙 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期550-556,共7页
【目的】为了探明杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白（CalcineurinB—likeprotein，CBL）基因的序列特征和表达特点，【方法】以杜梨幼苗为试材，运用同源克隆和半定量RT—PCR对PbCBLIO基因进行克隆和表达分析。【结果】结果表明．PbCBLIO基因... 【目的】为了探明杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白（CalcineurinB—likeprotein，CBL）基因的序列特征和表达特点，【方法】以杜梨幼苗为试材，运用同源克隆和半定量RT—PCR对PbCBLIO基因进行克隆和表达分析。【结果】结果表明．PbCBLIO基因编码区cDNA长度为801bp，编码的多肽由266个氨基酸组成。该多肽预测的等电点为4．56，估计的相对分子质量为30．45ku。其对应基因组DNA序列长1983bp，包括9个外显子和8个内含子。通过PSORT进行亚细胞定位分析发现PbCBLl0蛋白位于质膜上的几率最大。PbCBLIO基因编码的多肽具有4个钙离子结合域EF手形结构和1个钙调磷酸酶A亚基结合位点。PbCBLl0与番茄S1CBLIO（NP_001239045）和拟南芥AtCBLl0（NP_195026）蛋白间的同源性较高，分别为82％和77％，并与AtCBL10亲缘关系最近。PbCBL10基因在杜梨幼苗根、茎和叶片中均为诱导型表达，50～200mmol·L^（-1）CaCl2、20μmol·L^（-1）ABA、100mmol·L^（-1）NaCl、10％（w／v）PEG6000或180mmol·L^（-1）甘露醇处理后其表达量明显上调。【结论】PbCBLIO基因具备植物CBL基因家族的固有特征，能够响应胞内钙浓度变化，对ABA、盐碱、干旱和渗透胁迫均存在转录响应。 展开更多
关键词 杜梨 类钙调磷酸酶b亚基蛋白 基因克隆 表达特性
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葡萄类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因VvCBL4的克隆与表达分析 被引量：4
4
作者 余义和 李秀珍 +4 位作者 郭大龙 杨英军 李桂荣 李学强 张国海 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期385-392,共8页
【目的】在京秀(Vitis vinifera‘Jingxiu’)葡萄中克隆类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因Vv CBL4及其启动子,分析Vv CBL4的表达特性与逆境胁迫的关系。【方法】用RACE技术克隆Vv CBL4的全长,实时荧光定量PCR检测Vv CBL4在不同逆境下的表达;用... 【目的】在京秀(Vitis vinifera‘Jingxiu’)葡萄中克隆类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因Vv CBL4及其启动子,分析Vv CBL4的表达特性与逆境胁迫的关系。【方法】用RACE技术克隆Vv CBL4的全长,实时荧光定量PCR检测Vv CBL4在不同逆境下的表达;用同源克隆技术获得Vv CBL4的启动子,在烟草叶片中瞬时表达分析Vv CBL4启动子的活性。【结果】Vv CBL4全长为959 bp,ORF为642 bp,编码213个氨基酸,具有3个EF手钙结合结构域。Vv CBL4在根部表达量最高,其次是果实。Vv CBL4的转录本能对干旱、低温和盐胁迫处理快速做出响应。Vv CBL4启动子富含与逆境响应相关的顺式作用元件。干旱、低温和盐胁迫处理能够增强启动子活性。【结论】获得Vv CBL4及其启动子序列,Vv CBL4的表达能对逆境胁迫做出响应,Vv CBL4启动子的活性受逆境胁迫诱导,说明Vv CBL4在葡萄逆境胁迫反应中具有重要的作用。 展开更多
关键词 葡萄 类钙调磷酸酶b亚基蛋白 VvCbL4 逆境 表达分析
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香蕉钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白基因MaCBL1的克隆及序列分析 被引量：3
5
作者 李美英 徐碧玉 +3 位作者 杨小亮 刘菊华 张建斌 金志强 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第26期11257-11259,共3页
[目的]为香蕉钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白基因MaCBL1调控机理的研究奠定基础。[方法]根据在香蕉果实抑制缩减文库中获得的一个CBL基因片段,采用PCR方法克隆了MaCBL1基因全长cDNA序列并对其进行了初步的生物信息学分析。[结果]MaCBL1基因c... [目的]为香蕉钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白基因MaCBL1调控机理的研究奠定基础。[方法]根据在香蕉果实抑制缩减文库中获得的一个CBL基因片段,采用PCR方法克隆了MaCBL1基因全长cDNA序列并对其进行了初步的生物信息学分析。[结果]MaCBL1基因cDNA序列全长1 078 bp,编码213个氨基酸残基。多重序列比对结果显示,MaCBL1推导的氨基酸序列与其他植物来源的CBL基因的氨基酸序列同源性较高。遗传进化分析表明MaCBL1与其他植物如杨树、甘蓝、沙冬青、棉花和水稻的CBL基因的亲缘关系较近,并在同一个进化枝上。[结论]该研究为进一步研究香蕉钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白对香蕉生长发育、果实的成熟调控及对各种逆境反应的调控提供了依据。 展开更多
关键词 香蕉 钙调神经磷酸酶b亚基样蛋白基因 克隆 序列分析
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黑鲷钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)基因克隆及表达差异 被引量：1
6
作者 陈淑吟 张志勇 +5 位作者 孙瑞健 贾超峰 孟乾 祝斐 张志伟 吴国均 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期661-669,共9页
钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)为参与细胞内pH及细胞增殖调控的关键因子。用RACE末端PCR方法得到黑鲷CHP2(AsCHP2)基因全长cDNA,并利用生物信息学方法分析该基因的序列特征与同源性;同时利用实时荧光定量PCR方法检测AsCHP2的mRNA在黑鲷整... 钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)为参与细胞内pH及细胞增殖调控的关键因子。用RACE末端PCR方法得到黑鲷CHP2(AsCHP2)基因全长cDNA,并利用生物信息学方法分析该基因的序列特征与同源性;同时利用实时荧光定量PCR方法检测AsCHP2的mRNA在黑鲷整体仔鱼,90d、180d黑鲷,杂交F_(2)(真鲷♂×黑鲷♀)及回交F_(1)(黑鲷♂×杂交F_(1)♀)的脑、心脏、肌肉、肝脏和性腺等组织中的表达。研究结果表明:(1)AsCHP2cDNA序列全长1722bp,5'-非编码区(UTR)长度69bp,3'-UTR长度1069bp,开放阅读框长度为585bp,编码194个氨基酸;其结构域包含2个EF-hand结构及1个核输出信号;其蛋白分子质量为21.87ku,理论等电点为4.89;同源建模获得了CHP2的二级与三维结构。AsCHP2基因的核苷酸序列与其他鱼类的相似性为86%~81%,编码的氨基酸序列与其他鱼类的相似性为80%~72%。邻接系统树显示了黑鲷CHP2氨基酸序列与其他鱼类的进化关系。序列比对与结构分析表明,AsCHP2基因具有典型的CHP2基因结构。(2)AsCHP2的mRNA在黑鲷的仔鱼期(5~35d)及大规格个体的脑、肝脏及肌肉组织中均有表达,在90d个体各组织中的表达量均高于在180d个体各组织中的表达量;在180d黑鲷、杂交F_(2)及回交F_(1)的个体中,基因在脑、肝脏、肌肉及性腺等不同组织中均有表达,且均在心脏中高表达、在性腺中低表达。这些结果显示,CHP2基因在海水鱼类的生长、发育过程中发挥功能。 展开更多
关键词 黑鲷 钙调磷酸酶b同源蛋白2基因 基因克隆 MRNA表达
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卡托普利对高血压心脏钙调蛋白磷酸酶与核因子κBp65蛋白表达的影响 被引量：1
7
作者 陈金星 惠汝太 +2 位作者 张芊 郑翼 付春燕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期40-43,共4页
目的:探讨卡托普利对高血压大鼠心脏钙调蛋白磷酸酶(calcineurin)、核因子κBp65(NFκBp65)蛋白表达影响及其机制。方法:建立腹主动脉缩窄高血压大鼠模型,术后1周用卡托普利治疗,连续10周。以尾动脉测压法观察血压变化,用免疫组织化学... 目的:探讨卡托普利对高血压大鼠心脏钙调蛋白磷酸酶(calcineurin)、核因子κBp65(NFκBp65)蛋白表达影响及其机制。方法:建立腹主动脉缩窄高血压大鼠模型,术后1周用卡托普利治疗,连续10周。以尾动脉测压法观察血压变化,用免疫组织化学和形态计量学方法,观察calcineurin、NF-κBp65在心脏表达和心脏系数的变化。结果:经卡托普利治疗,高血压大鼠血压降低(mmHg,P<0.01),心脏系数显著减小(g/100g,P<0.01),心脏calcineurin和NF-κBp65蛋白高表达下调,阳性表达面积和面积百分比缩小(μm2,P<0.01,或P<0.01)。结论:卡托普利能通过调控信号转导通路calcineurin-NFAT-NF-κBp65关键蛋白表达,逆转高血压心血管重构。 展开更多
关键词 高血压 钙调蛋白磷酸酶 NF—κb 卡托普利 信号转导
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类钙调磷酸酶B亚基蛋白GhCBL3-A01调控棉花黄萎病抗性的功能分析 被引量：1
8
作者 高升旗 邵武奎 +3 位作者 赵准 邵盘霞 胡文冉 黄全生 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2023年第6期447-458,共12页
【目的】解析类钙调磷酸酶B亚基蛋白(calcium B-like protein,CBL)基因GhCBL3-A01在棉花抗黄萎病反应中的功能,为棉花抗病育种提供基因资源。【方法】从棉花基因组数据库获得GhCBL3-A01基因的同源序列,进行生物信息学分析。采用实时荧... 【目的】解析类钙调磷酸酶B亚基蛋白(calcium B-like protein,CBL)基因GhCBL3-A01在棉花抗黄萎病反应中的功能,为棉花抗病育种提供基因资源。【方法】从棉花基因组数据库获得GhCBL3-A01基因的同源序列,进行生物信息学分析。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)、茉莉酸甲酯(methyl jasminate,MeJA)和H2O2处理的棉株中GhCBL3-A01基因的表达量变化。利用病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术研究GhCBL3-A01在棉花抗黄萎病中的功能。通过检测活性氧积累以及相关基因的表达量,初步分析GhCBL3-A01的作用机制。【结果】陆地棉中GhCBL3-A01及其3个同源蛋白均含有3个CBL家族典型的EF-hand结构域。大丽轮枝菌、MeJA和H2O2处理后,GhCBL3-A01的表达量显著升高。VIGS沉默GhCBL3-A01导致病株率和病情指数显著降低,茎秆维管束褐变程度减轻,有病菌繁殖的茎段数量明显减少,增强了棉株对黄萎病的抗性。GhCBL3-A01基因沉默棉株叶片中活性氧积累增多,防御相关基因PR1、NPR1、PR4和PDF1.2以及茉莉酸信号通路关键基因AOS1、OPR3、MYC2和LOX2的表达量增加。【结论】GhCBL3-A01通过调控防御相关基因、茉莉酸信号通路基因的表达和活性氧积累负调控棉花对黄萎病的抗性,是提高棉花黄萎病抗性的候选基因。 展开更多
关键词 棉花 黄萎病 类钙调磷酸酶b亚基蛋白 GhCbL3-A01 抗病基因 病毒诱导的基因沉默
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大麦类钙调磷酸酶B互作蛋白激酶基因克隆及表达分析
9
作者 方伏荣 金平 +5 位作者 王峰 聂石辉 王仙 杜卫军 张金汕 吴志明 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1079-1084,共6页
采用RT-PCR法从大麦抗旱品种‘甘啤7号’中克隆了1个类钙调磷酸酶B互作蛋白激酶(CIPK)基因HvCIPK1(GenBank登录号为JX679077)。序列分析表明,该基因全长1 359bp,编码的蛋白含有452个氨基酸,分子量为51.05kD,等电点为9.13。推断具有植物C... 采用RT-PCR法从大麦抗旱品种‘甘啤7号’中克隆了1个类钙调磷酸酶B互作蛋白激酶(CIPK)基因HvCIPK1(GenBank登录号为JX679077)。序列分析表明,该基因全长1 359bp,编码的蛋白含有452个氨基酸,分子量为51.05kD,等电点为9.13。推断具有植物CIPK家族典型的功能结构域,在N端有一特异的催化结构域,该结构域在保守的氨基酸DFG和APE之间含有一个催化所需的活性环;同时C端区域存在一个独特的24个氨基酸组成的调节域,即NAF结构域。荧光定量分析结果表明,在PEG、NaCl和ABA处理下,HvCIPK1基因在大麦幼苗叶片中表达显著上调。推测HvCIPK1基因参与多种逆境信号的转导,可能在大麦的多种非生物胁迫响应中起着重要的作用。 展开更多
关键词 大麦 类钙调磷酸酶b互作蛋白激酶(CIPK) 克隆 非生物胁迫 实时定量PCR
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大豆类钙调磷酸酶B亚基GmCBL1互作候选蛋白的筛选 被引量：4
10
作者 李林蔚 张双喜 +6 位作者 周永斌 裴丽丽 陈明 李连城 马有志 刘生祥 徐兆师 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期359-363,共5页
Ca2+是非生物胁迫信号转导途径中的重要信号分子,植物类钙调磷酸酶B亚基蛋白(CBL,calcineurin B-like proteins)是一类重要的钙信号受体蛋白,主要通过与其他蛋白的特异结合传递信号,使植物形成对非生物胁迫的响应。本实验室已经获得大豆... Ca2+是非生物胁迫信号转导途径中的重要信号分子,植物类钙调磷酸酶B亚基蛋白(CBL,calcineurin B-like proteins)是一类重要的钙信号受体蛋白,主要通过与其他蛋白的特异结合传递信号,使植物形成对非生物胁迫的响应。本实验室已经获得大豆Gm CBL1基因,功能鉴定显示Gm CBL1增强了转基因拟南芥对非生物胁迫的耐性。为了进一步研究Gm CBL1的作用机理,本研究构建诱饵载体p GBKT7::Gm CBL1,利用酵母双杂交技术筛选大豆Gm CBL1的互作蛋白。通过对筛选获得的106个蛋白基因测序和Blast比对分析,并根据其可能的生理功能对这些候选蛋白归类,整理得到4类蛋白:能量代谢相关蛋白、修饰蛋白、防御蛋白、钙信号转导相关蛋白。筛选得到候选蛋白的功能预测初步表明,大豆Gm CBL1参与多条信号途径,为进一步研究探索大豆CBL介导的抗逆信号转导途径奠定了基础。 展开更多
关键词 大豆 类钙调磷酸酶b亚基 GmCbL1 酵母双杂交 互作蛋白
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饲粮蛋白质水平对肥育猪肌肉嫩度及背最长肌钙调磷酸酶-活化T细胞核因子信号途径的影响 被引量：6
11
作者 张勇 陶亮 +4 位作者 崔岩 朱宇旌 邓科 孙璀 邵彩梅 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1153-1160,共8页
本试验旨在研究饲粮理想蛋白质水平对背最长肌嫩度及钙调磷酸酶-活化T细胞核因子(CaN-NFAT)信号途径相关蛋白和钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)mRNA表达量的影响。选择初始重约50kg的杜洛克×长白×大白三元杂交猪90头,随机分配到3个处... 本试验旨在研究饲粮理想蛋白质水平对背最长肌嫩度及钙调磷酸酶-活化T细胞核因子(CaN-NFAT)信号途径相关蛋白和钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)mRNA表达量的影响。选择初始重约50kg的杜洛克×长白×大白三元杂交猪90头,随机分配到3个处理,每个处理3个重复,每个重复10头,公母各占1/2。3个处理分别采用12%、16%、20%理想蛋白质水平的饲粮,饲粮能量水平相同。正试期58d,结束后屠宰取样,测定肌肉剪切力并利用实时定量PCR法测定猪背最长肌CAST、CaN、钙调蛋白(CaM)和NFAT mRNA表达量。结果表明:1)饲粮高蛋白质水平显著提高背最长肌剪切力(P<0.05)、极显著提高CAST和CaN mRNA表达量(P<0.01)。2)背最长肌剪切力与CAST mRNA表达量正相关(相关系数为0.713,P<0.01);CaN、CaM与CAST mRNA表达量正相关(相关系数分别为0.594、0.596,P<0.05);NFAT、CaM与CaN mRNA表达量正相关(相关系数分别为0.536、0.546,P<0.05);CaM与NFAT mRNA表达量正相关(相关系数为0.623,P<0.05)。结果提示,饲粮高蛋白质水平显著降低背最长肌嫩度、提高CAST和CaN mRNA表达量;背最长肌嫩度与CAST mRNA表达量正相关,与CaN-NFAT信号途径无相关性。 展开更多
关键词 蛋白质水平 钙蛋白酶抑制蛋白 钙调磷酸酶 活化 T细胞核因子 钙调蛋白 肌肉嫩度
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日本血吸虫钙调神经磷酸酶B基因的获得和分析 被引量：4
12
作者 张愉快 肖建华 +5 位作者 王可耕 刘传爱 曾桥 万志刚 杨胜 杨秋林 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第5期410-412,共3页
目的　从日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)成虫cDNA文库中获得并分析日本血吸虫新的蛋白基因 ,为日本血吸虫病的防治提供侯选疫苗和药物靶点。方法　构建日本血吸虫成虫cDNA文库 ,挑取重组阳性克隆进行测序 ,对部分序列进行步移... 目的　从日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)成虫cDNA文库中获得并分析日本血吸虫新的蛋白基因 ,为日本血吸虫病的防治提供侯选疫苗和药物靶点。方法　构建日本血吸虫成虫cDNA文库 ,挑取重组阳性克隆进行测序 ,对部分序列进行步移法测序获取全长cDNA ,并进行生物信息学分析和登录。结果　获得了 1个日本血吸虫新基因 -钙调神经磷酸酶 (Calcineurin ,CaN)基因B(AY2 2 0 75 1) ,长 12 6 6bp ,编码 16 9个氨基酸 ,含有 2个“EF -hand”Ca+2 结合区域 ,与曼氏血吸虫CalcineurinB有 84 %的同源性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 CDNA文库 步移法 生物信息学 钙调神经磷酸酶b 基因
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HPLC和MALDI-TOF-MS法分析重组人钙调磷酸酶B亚基的纯度和肽图谱 被引量：3
13
作者 高锦 王艳丽 魏群 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期114-119,共6页
用反相高效液相色谱 (RP HPLC)法对重组人钙调磷酸酶B亚基 (rhCNB)的纯度和肽图谱进行了测定 ,以比较不同批次产品的纯度及其一级结构的一致性 ,对其进行质量控制 .并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)法进行验证 .结... 用反相高效液相色谱 (RP HPLC)法对重组人钙调磷酸酶B亚基 (rhCNB)的纯度和肽图谱进行了测定 ,以比较不同批次产品的纯度及其一级结构的一致性 ,对其进行质量控制 .并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)法进行验证 .结果表明 ,运用梯度洗脱RP HPLC法能对样品进行纯度检查和肽图谱分析 ,测得 3批样品纯度均达到 98%以上 ,肽图谱能达到批间一致 .同时用MALDI TOF MS法测定 ,纯度结果二者相符 ,质谱肽图经计算机辅助分析 ,确证rhCNB一级结构与天然CNB一致 .证明该方法灵敏、准确、可靠 . 展开更多
关键词 重组人钙调磷酸酶b亚基(rhCNb) 高效液相色谱法 基质辅肋激光解吸电离飞行时间质谱法 纯度 肽图谱
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亚洲牛带绦虫钙调神经磷酸酶B基因的原核表达和免疫学分析 被引量：1
14
作者 黄江 吴璇 +5 位作者 胡旭初 徐劲 余新炳 包怀恩 郎书源 廖兴江 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期398-401,共4页
【目的】对亚洲牛带绦虫钙调神经磷酸酶B基因(CaN)进行克隆、表达和免疫学初步研究。【方法】将亚洲牛带绦虫成虫钙调神经磷酸酶B基因克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚... 【目的】对亚洲牛带绦虫钙调神经磷酸酶B基因(CaN)进行克隆、表达和免疫学初步研究。【方法】将亚洲牛带绦虫成虫钙调神经磷酸酶B基因克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析。【结果】PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-30a(+)-Ta CaN构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因能在大肠杆菌BL-21/DE3中表达,经亲和层析得到了纯化重组蛋白。重组蛋白能被感染了亚洲牛带绦虫的猪和患者的血清识别。【结论】亚洲牛带绦虫成虫钙调神经磷酸酶B基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的表达。为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 亚洲牛带绦虫 钙调神经磷酸酶b基因 基因克隆 原核表达
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重组人钙调蛋白磷酸酶B亚基在大鼠体内的药动学和组织分布特征
15
作者 韩丽芳 张彩云 +3 位作者 刘莹 邵继平 谢学立 符健 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2020年第8期610-615,共6页
目的研究重组人钙调蛋白磷酸酶B亚基(rhCNB)在大鼠体内的药动学和组织分布特征。方法利用双抗体夹心ELISA法,对组织样本中rhCNB检测的选择性、线性范围、精密度、回收率和稳定性等进行方法学验证。SD大鼠单次iv给予rhCNB 5,10和20 mg... 目的研究重组人钙调蛋白磷酸酶B亚基(rhCNB)在大鼠体内的药动学和组织分布特征。方法利用双抗体夹心ELISA法,对组织样本中rhCNB检测的选择性、线性范围、精密度、回收率和稳定性等进行方法学验证。SD大鼠单次iv给予rhCNB 5,10和20 mg·kg^-1,多次iv给予rhCNB 20 mg·kg^-1,于给药前及给药后0.033,0.25,0.5,1,2,4,8和12 h采血,用ELISA法测定rhCNB浓度,用DAS3.0软件计算药动学参数。大鼠单次iv给予rhCNB 10 mg·kg^-1后,分别在0.25,1,2和8 h采集脑、心、肝、脾、肺、肾、全胃、睾丸或卵巢、体脂、骨骼肌、胸腺和血浆,用ELISA测定血浆和组织样品中rhCNB浓度。结果rhCNB 5,10和20 mg·kg^-1单次给药,主要药动学参数为:消除半衰期(t1/2)分别为0.95±0.28,0.85±0.27和(0.91±0.32)h;药时曲线下面积(AUC0-12 h)分别为41.0±4.3,59.5±9.1和(150.6±18.9)mg·h·L^-1;血浆峰浓度(Cmax)分别为44.6±14.4,62.7±15.7和(160.1±27.3)mg·L^-1;在5~20 mg·kg^-1剂量范围内,rhCNB的Cmax和AUC0-12 h比值随着剂量增加而增大。rhCNB多次给药主要药动学参数为:t1/2为(1.16±0.46)h;AUC0-12 h为(94.9±11.0)mg·h·L^-1;Cmax为(121.2±18.9)mg·L^-1。单次给药和多次给药的主要药动学参数无显著性差异。不同组织中rhCNB的分布由高到低的顺序为体脂>肺>肾>脾>睾丸/卵巢>心>肝>胸腺>胃>脑>骨骼肌。结论rhCNB在大鼠体内呈现线性动力学特征,多次给药后大鼠体内无明显蓄积并广泛分布于各个组织。 展开更多
关键词 重组人钙调蛋白磷酸酶b亚基 药动学 组织分布
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血脑屏障对钙调神经磷酸酶B亚基及其降解肽段阻碍作用的研究
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作者 姜国华 魏群 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期387-390,共4页
应用 1,3,4 ,6 , 四氯 3α ,6α 二苯基苷尿 (Iodogen)法对钙调神经磷酸酶B亚基进行12 5I标记 ,获得了比活度为 74 0MBq·mg- 1,放化纯度为 95 7%的12 5I标记的钙调神经磷酸酶B亚基 ,标记率高达 85% .利用该标记物研究血脑屏障对... 应用 1,3,4 ,6 , 四氯 3α ,6α 二苯基苷尿 (Iodogen)法对钙调神经磷酸酶B亚基进行12 5I标记 ,获得了比活度为 74 0MBq·mg- 1,放化纯度为 95 7%的12 5I标记的钙调神经磷酸酶B亚基 ,标记率高达 85% .利用该标记物研究血脑屏障对其进入脑的阻碍作用 .结果显示血脑屏障能够阻止完整的钙调神经磷酸酶B亚基进入脑 ,但是它的降解肽段能够透过血脑屏障进入脑组织 . 展开更多
关键词 钙调神经磷酸酶 血脑屏障 脑 125I标记 阻碍作用 b亚基 降解肽段
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锌离子胁迫下青海湖裸鲤钙调蛋白磷酸酶的表达
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作者 张娅 王辰龙 +2 位作者 李航庆 丁照云 李长忠 《水产科技情报》 2017年第1期6-10,共5页
为检测在重金属胁迫下青海湖裸鲤钙调蛋白磷酸酶(Calcineurin,CN)的动态变化,确定CN是否可以作为生物标志物对水环境中的重金属污染进行早期诊断,通过检测Zn^(2+)胁迫后青海湖裸鲤CN表达量的变化,研究了Zn^(2+)对青海湖裸鲤生存状态的... 为检测在重金属胁迫下青海湖裸鲤钙调蛋白磷酸酶(Calcineurin,CN)的动态变化,确定CN是否可以作为生物标志物对水环境中的重金属污染进行早期诊断,通过检测Zn^(2+)胁迫后青海湖裸鲤CN表达量的变化,研究了Zn^(2+)对青海湖裸鲤生存状态的影响。结果表明,Zn^(2+)对青海湖裸鲤的致死率与胁迫时间和离子浓度成正相关;通过实时定量PCR发现,CN在鳃、肌肉、肾脏和肝脏中均有表达;在Zn^(2+)浓度为1 mg/L时,随着胁迫时间的逐渐延长,鳃中CNAα、CNAγ和CNB均有逐渐增加的趋势,96 h时表达量达到最高水平;随着胁迫浓度的逐渐增加,CNAα、CNAγ和CNB表达量呈先升高后降低的变化趋势,在Zn^(2+)浓度为2 mg/L时,三者表达量均达到最高水平。研究结果显示,青海湖裸鲤钙调蛋白磷酸酶对锌离子胁迫产生了明显应答,可以作为重金属污染的候选生物标志物。 展开更多
关键词 青海湖裸鲤 钙调蛋白磷酸酶 生物标志物 锌 实时定量PCR
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钙调磷酸酶结合蛋白1在5/6肾切除大鼠肾小管上皮细胞损伤时高表达 被引量：1
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作者 李辉远 周沛兰 +4 位作者 胡凯元 王迪晶 王泽彬 梁剑波 温跃强 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第17期2838-2842,共5页
目的探讨钙调磷酸酶结合蛋白1(calcineurin binding protein 1,Cabin1)在肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)损伤中的作用。方法雄性SD大鼠随机分成假手术组和5/6肾切除组,后者进一步分成术后4和8周组。肾切除后4和... 目的探讨钙调磷酸酶结合蛋白1(calcineurin binding protein 1,Cabin1)在肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)损伤中的作用。方法雄性SD大鼠随机分成假手术组和5/6肾切除组,后者进一步分成术后4和8周组。肾切除后4和8周检杀大鼠,取肾组织行Masson染色和肾小管-间质损伤评分(tubulointerstitial lesion score,TILS),电镜观察RTECs线粒体形态,WB检测肾组织中Cabin1表达。结果随造模时间延长,术后8周出现RTECs脱落、间质炎症细胞浸润及弥漫性纤维化;TILS逐渐升高,术后8周组与假手术组相比,差异具有统计学意义(7.16±0.52 vs.0.00±0.00,P<0.05)。术后4周RTECs线粒体肿胀、形状不规则,术后8周出现线粒体膜、线粒体嵴结构模糊甚至消失。残肾中Cabin1蛋白表达明显升高,术后8周与假手术组(0.97±0.09 vs.0.22±0.07)、术后8周与4周组相比(0.97±0.09 vs.0.45±0.03),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Cabin1在RTECs损伤时高表达,其可能是调控RTECs损伤的重要靶点。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 线粒体损伤 钙调磷酸酶结合蛋白1
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钙调磷酸酶结合蛋白1在足细胞线粒体损伤中的表达 被引量：1
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作者 陈洁茹 李辉远 温跃强 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第23期3864-3867,共4页
目的探讨钙调磷酸酶结合蛋白1(Cabin1)在足细胞线粒体损伤中的作用机制。方法采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激体外培养足细胞,分刺激后0、24和48 h组,行免疫荧光和WB检测Cabin1在足细胞线粒体损伤时的分布及表达。结果 0 h组,细胞骨架分子F... 目的探讨钙调磷酸酶结合蛋白1(Cabin1)在足细胞线粒体损伤中的作用机制。方法采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激体外培养足细胞,分刺激后0、24和48 h组,行免疫荧光和WB检测Cabin1在足细胞线粒体损伤时的分布及表达。结果 0 h组,细胞骨架分子F-actin呈强有力的丝状分布,Cabin1均匀分布于胞浆和胞核;24 h组,F-actin出现不连续分布,Cabin1在胞浆的分布减少,趋向胞核分布;48 h组,F-actin排列明显紊乱,Cabin1在胞核的聚集更显著。24 h和48 h组,线粒体功能指示分子-细胞色素C蛋白分别为0 h组的1.51和1.87倍,Cabin1则分别达0 h组的1.33和1.67倍(P<0.05)。结论 Cabin1在足细胞细胞骨架破坏和线粒体损伤时表达升高,可能是调控足细胞线粒体功能的重要分子。 展开更多
关键词 肾小球足细胞 线粒体损伤 细胞色素C 钙调磷酸酶结合蛋白1
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钙调神经磷酸酶B亚基高表达条件及产业化研究
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作者 靳风智 石太平 +1 位作者 王小萌 魏群 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期255-259,共5页
重组人CNB高表达大肠杆菌已由本室构建成功 ,摇瓶发酵液表达量可达 10 0mg·L- 1.通过改进培养基配方及摇瓶表达工艺 ,使CNB在摇瓶发酵液中表达量达到 5 0 0mg·L- 1以上 .在高表达量的基础上 ,又进行了产业化改进 ,以蒸馏水添... 重组人CNB高表达大肠杆菌已由本室构建成功 ,摇瓶发酵液表达量可达 10 0mg·L- 1.通过改进培养基配方及摇瓶表达工艺 ,使CNB在摇瓶发酵液中表达量达到 5 0 0mg·L- 1以上 .在高表达量的基础上 ,又进行了产业化改进 ,以蒸馏水添加无机盐取代了原配方中的自来水 ,并提高了表达量 . 展开更多
关键词 钙调神经磷酸酶 调节亚基b 表达 基因工程 产业化
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