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题名柑桔钙离子结合蛋白基因克隆及植物表达载体构建
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作者
贝学军
钟广炎
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机构
西南大学园艺园林学院
广东省农业科学院果树研究所
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出处
《中国南方果树》
北大核心
2012年第3期6-11,共6页
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基金
重庆市科技攻关计划项目(CSTTC
2007AA1018)
现代农业(柑桔)产业技术体系建设专项资助
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文摘
以伏令夏橙叶片中分离的总RNA为模板,经RT-PCR扩增到一条约600bp、含钙离子结合蛋白基因(CsCaBP)的片段,将此片段克隆到pMD-19T中,经测序分析该片段与甜橙基因组中的对应序列完全吻合。设计2对带有限制性内切酶位点的特异性引物,以cDNA为模板扩增到2个CsCaBP片段,并连接到TA克隆载体pMD-19T上;经双酶切消化后,分别以正反2个方向插入到植物表达载体pFGC5941的查耳酮合成酶(CHSA)内含子两侧,构建成功CsCaBP的RNA干扰载体,但未获得转基因植株。将CsCaBP的正向片段定向克隆到具有CaMV35S启动子的pF-GC5941表达质粒上,构建成功CsCaBP过量表达载体。将构建好的表达载体导入根癌农杆菌LBA4404菌株,转化酸橙下胚轴,经PCR检测,获得9株过量表达转基因植株,荧光定量PCR验证发现目的基因在转基因植株中有不同程度的表达。
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关键词
柑桔
钙离子结合蛋白基因
基因克隆
遗传转化
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Keywords
citrus
calcium binding protein
gene cloning
genetic transformation
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分类号
S666
[农业科学—果树学]
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