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热疗对人Tca8113细胞侵袭能力及基质金属蛋白酶-13和钙离子结合蛋白S100A4表达的抑制作用 被引量:2
1
作者 何丽明 边莉 +1 位作者 唐睿珠 何永文 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期655-659,共5页
目的研究热疗对Tca8113细胞的侵袭能力及侵袭转移相关蛋白——基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及钙离子结合蛋白S100A4(S100A4)表达的影响。方法 Tca8113细胞分别经43℃加热0、40、80、120 min及37、41、43、45℃加热80 min,用体外侵袭实验... 目的研究热疗对Tca8113细胞的侵袭能力及侵袭转移相关蛋白——基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及钙离子结合蛋白S100A4(S100A4)表达的影响。方法 Tca8113细胞分别经43℃加热0、40、80、120 min及37、41、43、45℃加热80 min,用体外侵袭实验评价各组细胞的侵袭能力;Tca8113细胞爬片经43℃分别加热0、40、80、120 min,用免疫细胞化学染色法检测各组细胞MMP-13及S100A4的表达变化;Tca8113细胞分别经43℃加热0、40、80、120 min及37、41、43、45℃加热80 min,Western blot法检测各组细胞MMP-13及S100A4的表达变化。结果随加热时间延长或加热温度升高,Tca8113细胞侵袭率(即侵袭细胞数占全部细胞的百分比)依次递减,除43℃加热40、80 min组之间及41、43℃加热80 min组之间的差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各组间的差异均有统计学意义(P<0.05);随着加热时间延长,Tca8113细胞的细胞浆内MMP-13及S100A4的表达强度呈现递减趋势;随着加热时间延长或加热温度升高,Tca8113细胞的MMP-13及S100A4含量逐渐降低,除43℃加热40、80 min组之间及41、43℃加热80 min组之间外,其余各组间的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论热疗能抑制Tca8113细胞的侵袭能力,其机制可能与热疗抑制了细胞内MMP-13及S100A4的表达有关。 展开更多
关键词 热疗 TCA8113细胞 侵袭 基质金属蛋白酶-13 离子结合蛋白S100A4
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钙离子结合蛋白S100A16对胃癌细胞生物学行为的影响 被引量:4
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作者 蔡宏伟 洪晔 苏东明 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期892-897,共6页
目的:探讨钙结合蛋白S100A16在胃癌组织和细胞中的表达,及其对胃癌细胞SGC-7901增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法:应用免疫组织化学染色法检测S100A16在胃癌和相应癌旁组织中的差异表达。应用Western blot检测正常胃上皮细胞GES-1以及... 目的:探讨钙结合蛋白S100A16在胃癌组织和细胞中的表达,及其对胃癌细胞SGC-7901增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法:应用免疫组织化学染色法检测S100A16在胃癌和相应癌旁组织中的差异表达。应用Western blot检测正常胃上皮细胞GES-1以及胃癌细胞MGC-803和SGC-7901中S100A16的表达水平。将S100A16高表达质粒和干扰质粒分别转染至人胃癌细胞株SGC-7901中,用Western blot检测各组细胞中S100A16的表达。采用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)比色法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力。采用划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果:在胃癌组织及胃癌细胞中,S100A16的表达量明显高于相应癌旁组织及正常胃上皮细胞。SRB染色和克隆形成实验显示,过表达S100A16会增加SGC-7901细胞的增殖能力,敲低S100A16后增殖能力降低。划痕实验Transwell实验显示,过表达S100A16会增加SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力,敲低S100A16则会降低。免疫共沉淀实验显示在胃癌细胞SGC-7901中,S100A16与YBX-1存在结合。结论:胃癌组织及细胞中S100A16的表达明显上调,S100A16在胃癌中的异常表达可能是由于与YBX-1的相互结合,进而促进胃癌细胞增殖、迁移、侵袭从而影响胃癌的发生发展。 展开更多
关键词 胃癌 结合蛋白S100A16 增殖 YBX-1
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甲基-CpG结合蛋白1缺失小鼠抑制背根神经节与脊髓背角降钙素基因相关肽生成缓解炎性疼痛 被引量:2
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作者 盛恒炜 磨凯 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第4期445-450,共6页
目的探讨甲基-CpG结合蛋白1(methyl-CpG-binding domain protein 1,MBD1)缺失小鼠缓解弗氏完全佐剂(CFA)诱导的炎性疼痛是否通过抑制神经传导通路中的降钙素基因相关肽(CGRP)来实现的,为MBD1调控炎性疼痛的神经生物学机制提供新的思路... 目的探讨甲基-CpG结合蛋白1(methyl-CpG-binding domain protein 1,MBD1)缺失小鼠缓解弗氏完全佐剂(CFA)诱导的炎性疼痛是否通过抑制神经传导通路中的降钙素基因相关肽(CGRP)来实现的,为MBD1调控炎性疼痛的神经生物学机制提供新的思路。方法(1)取8周龄雄性MBD1敲除小鼠(KO)和与KO小鼠年龄、性别和体质量配对C57BL6小鼠(WT),按随机数字表法分为4组,分别为做足底注射生理盐水(NS)、CFA的WT小鼠组和注射NS、CFA的KO小鼠组(每组7只)。观察药物前1天(-1 d)、注射后2 h、1、3、7和14 d 4组小鼠机械缩足反应频率(PWF)和热缩足反应潜伏期(PWL)行为改变;(2)另取CFA注射后1 d(疼痛最明显点)上述组小鼠(每组3只),分别提取患侧背根神经节(DRG)和脊髓背角组织行ELISA法检测CGRP含量,比较4组含量变化。结果(1)与WT小鼠比较,KO小鼠CFA注射前明显降低双侧后爪基础PWF和延长PWL;与注射生理盐水的WT小鼠组比较,CFA注射后2 h、1、3、7和14 d WT小鼠患侧PWF增加(P<0.05)、PWL降低(P<0.05),而注射CFA的KO小鼠患侧PWF无明显差异(P>0.05)、PWL仅在CFA注射后1 d有差异(P<0.05),其余差异无统计学意义(P>0.05);(2)CFA注射后1天,与注射生理盐水的WT小鼠组比较,WT小鼠DRG和脊髓背角内CGRP显著增加(P<0.05),注射生理盐水的KO小鼠DRG和脊髓背角内CGRP显著降低(P<0.05),而注射CFA的KO小鼠DRG和脊髓背角内CGRP无明显变化(P>0.05)。结论MBD1敲除缓解CFA诱导的机械和热刺激痛觉过敏,机制可能与抑制DRG和脊髓背角内CGRP生成和释放有关。 展开更多
关键词 甲基-CpG结合蛋白1 背根神经节 脊髓背角 素基因相关 炎性疼痛
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血清维生素K2、补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3和核心结合因子a1与冠状动脉钙化的相关性研究 被引量:6
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作者 刘海玲 徐炳柱 +1 位作者 郭兆文 冯景辉 《中国心血管杂志》 2019年第2期143-147,共5页
目的探讨人血清中维生素K2(VK2)、补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)和核心结合因子a1(Cbfa1)水平与冠状动脉钙化(CAC)的关系。方法选取2016年6~12月就诊哈尔滨医科大学附属第一医院,因胸痛行冠状动脉64排CT造影检查的患者100例,根... 目的探讨人血清中维生素K2(VK2)、补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)和核心结合因子a1(Cbfa1)水平与冠状动脉钙化(CAC)的关系。方法选取2016年6~12月就诊哈尔滨医科大学附属第一医院,因胸痛行冠状动脉64排CT造影检查的患者100例,根据结果分为CAC组60例和非冠状动脉钙化组(NCAC组)40例。CAC组根据冠状动脉钙化积分又分为轻度组23例、中度组19例和重度组18例。采用酶联免疫吸附法测定各组患者血清CTRP3、Cbfa1和VK2水平,其他各项指标来源于病例资料,比较两组患者的血清CTRP3、Cbfa1、VK2和其他各项指标水平。分析血清VK2、CTRP3和Cbfa1之间以及与其他变量的相关性,多因素回归分析载脂蛋白A、载脂蛋白B/载脂蛋白A、同型半胱氨酸、VK2与CAC之间的关系。结果与NCAC组比较,CAC组年龄偏大、合并高血压和糖尿病较多,CAC组血清总胆固醇、空腹血糖、同型半胱氨酸、钙离子水平和载脂蛋白B/载脂蛋白A比值均升高,高密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白A水平均降低(均为P<0.05)。两组患者血清CTRP3和Cbfa1水平比较,差异无统计学意义(均为P>0.05),但CAC组血清VK2水平较NCAC组明显降低[(2.92±0.80)μg/L比(3.57±0.59)μg/L,P=0.012]。Pearson相关性分析显示,血清VK2水平与糖尿病呈负相关(r=-0.317,P=0.046),血清CTRP3水平与空腹血糖呈负相关(r=-0.561,P=0.048),血清Cbfa1与ALP呈负相关(r=-0.673,P=0.023)。Logistic回归分析显示,VK2是CAC的独立影响因素(OR:0.251,95%CI:0.074~0.844,P=0.025)。结论血清CTRP3、Cbfa1水平与CAC无相关性,VK2水平与CAC呈负相关,可作为CAC的独立预测因子。 展开更多
关键词 冠状动脉 维生素K2 补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3 核心结合因子A1
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DNA结合分化抑制蛋白1和基质金属蛋白酶9在结直肠癌中的表达及与微血管密度的相关性 被引量:5
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作者 武雪亮 薛军 +6 位作者 王立坤 杨东东 屈明 郭飞 孙光源 韩磊 杨瑞敏 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期696-701,共6页
目的探讨结直肠癌组织中DNA结合分化抑制蛋白1(Id-1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达及其与肿瘤微血管生成、临床病理指标的相关性。方法应用免疫组织化学染色法检测50例结直肠癌组织和50例癌旁正常组织中Id-1和MMP-9的表达,以及CD34标... 目的探讨结直肠癌组织中DNA结合分化抑制蛋白1(Id-1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达及其与肿瘤微血管生成、临床病理指标的相关性。方法应用免疫组织化学染色法检测50例结直肠癌组织和50例癌旁正常组织中Id-1和MMP-9的表达,以及CD34标记的微血管密度(MVD)情况。结果 Id-1和MMP-9在结直肠癌组织中阳性表达为72.00%(36/50)、78.00%(39/50),显著高于癌旁正常组织的24.00%(12/50)、28.00%(14/50)(P=0.000);结直肠癌组织中MVD值为17.22±2.08,明显高于癌旁正常组织5.36±2.17(P=0.000);Id-1、MMP-9和MVD均与肿瘤浆膜浸润、TNM分期、癌胚抗原(+)、脉管浸润、淋巴结转移及肝转移相关(P均<0.05),而与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度无关(P均>0.05);癌组织中Id-1和MMP-9阳性表达组MVD值显著高于阴性组(P均=0.000);结直肠癌组织中Id-1与MMP-9呈明显正相关性(r=0.429,P=0.000);生存分析显示:Id-1与MMP-9表达与结直肠癌患者预后关系密切,二者高表达提示预后不良。结论 Id-1、MMP-9高表达与结直肠癌的发生演进高度相关,并与MVD呈正相关,二者可能共同参与了肿瘤微血管的生成、肿瘤的浸润及血行转移。 展开更多
关键词 结直肠癌 DNA结合分化抑制蛋白1 基质金属蛋白酶9 微血管密度 相关
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6-羟多巴损伤黑质导致弓状核离子钙接头蛋白1和阿片-促黑素皮质素原表达的变化 被引量:7
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作者 张毅敏 连辉 +3 位作者 宋海岩 周立 蔡君艳 王志勇 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期975-980,共6页
目的:观察6-羟多巴(6-OHDA)损伤大鼠黑质(SN)后下丘脑弓状核(Arc)中酪氨酸羟化酶(TH)、离子钙接头蛋白1(Iba1)和阿片-促黑素皮质素原(POMC)的表达变化,为帕金森病(PD)患者消瘦的发生机制提供线索。方法:20只SD大鼠随机分为6-OHDA大鼠组... 目的:观察6-羟多巴(6-OHDA)损伤大鼠黑质(SN)后下丘脑弓状核(Arc)中酪氨酸羟化酶(TH)、离子钙接头蛋白1(Iba1)和阿片-促黑素皮质素原(POMC)的表达变化,为帕金森病(PD)患者消瘦的发生机制提供线索。方法:20只SD大鼠随机分为6-OHDA大鼠组(双侧SN内注射6-OHDA)和对照组(注射等体积生理盐水)。免疫荧光染色和Western blot检测SN内TH,以及Arc内TH、Iba1和POMC的表达。结果:与对照组比较,6-OHDA大鼠组体重无明显变化,但腹膜后脂肪重量从(7.550±0.670)g减少到(3.895±0.465)g(P<0.01)。SN内TH阳性细胞数量从56±5减少至14±2(P<0.05);蛋白表达水平从0.75±0.11降低至0.41±0.09(P<0.01)。Arc中TH阳性细胞数量从21±2减少到10±3(P<0.05);Iba1阳性细胞数量从12±2增加到30±5(P<0.05);POMC阳性细胞数量从16±4增加到31±2(P<0.05)。下丘脑内TH蛋白的表达水平从0.35±0.05降低到0.21±0.02(P<0.01);Iba1蛋白的表达水平从0.23±0.06增加至0.51±0.04(P<0.01);POMC的蛋白表达水平从0.37±0.05增加至0.65±0.03(P<0.01)。结论:Arc中TH、Iba1和POMC表达变化可能与PD脂肪减少存在一定的联系。 展开更多
关键词 6-羟多巴 弓状核 酪氨酸羟化酶 离子接头蛋白1 阿片-促黑素皮质素原
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肝细胞癌相关抗原编码基因HCA520与钙离子的结合分析 被引量:2
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作者 杨美香 韩克军 +2 位作者 曲迅 马道新 陈慰峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期145-147,共3页
目的 :分析肝细胞癌相关抗原编码基因HCA52 0与钙离子的关系。方法 :通过PCR获得目的基因 ,构建至原核表达载体pGEX 4T 3中。在大肠杆菌中诱导表达后 ,用亲和层析法进行纯化。Westernblot对所获蛋白进行鉴定 ,Dotblot分析GST HCA52 0融... 目的 :分析肝细胞癌相关抗原编码基因HCA52 0与钙离子的关系。方法 :通过PCR获得目的基因 ,构建至原核表达载体pGEX 4T 3中。在大肠杆菌中诱导表达后 ,用亲和层析法进行纯化。Westernblot对所获蛋白进行鉴定 ,Dotblot分析GST HCA52 0融合蛋白与钙离子的关系。结果 :琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定表明 ,重组原核表达载体pGEX 4T 3中 ,HCA52 0基因的插入方向及序列完全正确。Westernblot分析显示 ,纯化的蛋白均含有GST部分 ,是所需的目的蛋白。HCA52 0融合蛋白能够以剂量依赖的方式与钙离子结合。结论 :HCA52 0基因原核表达的蛋白能够与钙离子结合 。 展开更多
关键词 HCA520 原核表达载体 离子结合蛋白
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胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1抑制视网膜血管新生的实验研究 被引量:2
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作者 孙涛 曹晖 +3 位作者 许迅 顾青 许琳 朱弼珺 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期113-117,共5页
背景寻求有效的血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂是治疗和预防新生血管性眼病的关键。胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1(IGFBP—rP1)是一种新发现的抑血管新生因子,推测其在眼内有抑制VEGF的作用。目的探讨IGFBP—rP1对VEGF体外诱... 背景寻求有效的血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂是治疗和预防新生血管性眼病的关键。胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1(IGFBP—rP1)是一种新发现的抑血管新生因子,推测其在眼内有抑制VEGF的作用。目的探讨IGFBP—rP1对VEGF体外诱导视网膜新生血管形成的抑制作用及其机制。方法使用含质量分数10%FBS的DMEM对猕猴视网膜/脉络膜血管内皮细胞株(RF/6A)进行扩增培养,利用免疫荧光细胞化学染色法观察RF/6A细胞表达IGFBP—rP1的情况。RF/6A细胞血清饥饿法培养24h后分为对照组、10mg/LVEGF组,50、100、200mg/LIGFBP—rP1+10mg/L VEGF组进行干预,分别利用MTS比色法、Transwell实验和流式细胞术比较IGFBP—rP1(0、50、100、200mg/L)联合VEGF(10mg/L)作用后,RF/6A细胞在增生、移行和凋亡等生物学行为方面的变化。结果RF/6A细胞用不同质量浓度的IGFBP—rP1培养后细胞质呈FITC激发后的绿色荧光,细胞核呈PI激发后的红色荧光,而对照组细胞仅见细胞核的红色荧光。10mg/LVEGF组RF/6A细胞的A490值、移行细胞数与对照组相比明显增加,差异均有统计学意义(t=-15.191,P=0.000;t=-21.274,P=0.000),细胞凋亡率明显下降,差异有统计学意义(t=10.228,P=0.000)。与10mg/LVEGF组相比,IGFBP—rP1(50、100、200mg/L)+10mg/LVEGF组RF/6A细胞的A490值、移行细胞数明显下降(均P〈0.05)。50、100、200113geLIGFBP—rPl+10mg/LVEGF组RF/6A细胞的细胞凋亡率分别提高了(1.26±0.04)%、(1.50±0.07)%和(1.93±0.27)%,各组的总体差异有统计学意义(F=274.273,P=0.000)。结论IGFBP—rP1作为一种内源性因子,通过促细胞凋亡机制抑制VEGF诱导的视网膜血管的生成。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1 血管内皮细胞生长因子 视网膜 血管内皮细胞血管新生
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饲粮阴阳离子差水平对小鼠血钙浓度及胃肠道组织钙结合蛋白-D9k mRNA相对表达水平的影响 被引量:1
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作者 吴文旋 吴佳海 +3 位作者 张吉鹍 莘海亮 杨艺 朱伦琴 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1726-1734,共9页
本试验在前期建立了动物胃肠道钙代谢相关基因表达水平检测体系与表达谱分析的基础上,旨在进一步确定饲粮阴阳离子差(DCAD)水平对动物血钙浓度和胃肠道组织钙结合蛋白-D9k(Ca BP-D9k)mRNA相对表达水平的影响,为揭示低DCAD水平防治动物... 本试验在前期建立了动物胃肠道钙代谢相关基因表达水平检测体系与表达谱分析的基础上,旨在进一步确定饲粮阴阳离子差(DCAD)水平对动物血钙浓度和胃肠道组织钙结合蛋白-D9k(Ca BP-D9k)mRNA相对表达水平的影响,为揭示低DCAD水平防治动物低血钙症的作用机制提供依据。将120只昆明小鼠随机分为3组,每组40只,自配种前3 d起分别饲喂DCAD水平为+300(高DCAD水平组,HD组)、+150(对照组,CON组)、-50(低DCAD水平组,LD组)的饲粮。检测母鼠产前20 d(-20 d)、产前5 d(-5 d)、产后当天(0 d)、产后3 d(+3 d)血钙浓度和胃肠道组织Ca BP-D9k mRNA相对表达水平。结果表明,与HD组相比,LD组显著提高了围产期内0 d、+3 d小鼠血钙浓度(P<0.05),显著上调了小肠肠段(十二指肠、空肠、回肠)与结肠Ca BP-D9k mRNA相对表达水平(P<0.05),这一效应在-5 d、0 d表现最为显著(P<0.05),并在+3 d提高了小鼠空肠与结肠的Ca BP-D9k mRNA相对表达水平(P<0.05)。统计结果显示,十二指肠、空肠与结肠3个位点的Ca BP-D9k mRNA相对表达水平与DCAD水平、血钙浓度具有显著的关联性(P<0.05)。由此可见,降低DCAD水平可上调动物小肠及结肠肠段Ca BP-D9k mRNA相对表达水平,同时伴随更高的血钙浓度。这可能是低DCAD水平有效维持动物围产期血钙稳恒,降低低血钙发生率的重要途径。 展开更多
关键词 饲粮阴阳离子 浓度 结合蛋白 胃肠道组织
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可溶性耐药相关钙结合蛋白的生物质谱分析与鉴定 被引量:1
10
作者 刘宁 齐静 +3 位作者 吕磊 刘志强 刘淑莹 杨纯正 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1046-1048,共3页
The protein profiles of the drug-resistant cell line K562/A02 and its sensitive parental cell line K562 were compared by using high resolution two-dimensional gel electrophoresis with IPG strip of pH 4\^7\5\^9. One pr... The protein profiles of the drug-resistant cell line K562/A02 and its sensitive parental cell line K562 were compared by using high resolution two-dimensional gel electrophoresis with IPG strip of pH 4\^7\5\^9. One protein spot was found to be differentially expressed, which was identified as the soluble resistance-related calcium binding protein(sorcin). Tandem mass spectrometric analysis of one tryptic peptide by a TOF-TOF analyzer as well as the western blot analysis substantiates the result derived from peptide mapping fingerprint data. 展开更多
关键词 可溶性耐药相关结合蛋白 基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱 二维凝胶电泳
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钙离子结合蛋白及其在神经系统疾病中的作用 被引量:7
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作者 朱运峰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期413-418,共6页
钙离子作为第二信使参与多种途径的调控,钙离子结合蛋白在此过程中起着重要的作用.通过对钙离子结合蛋白的分布特征、结构分析,新的成员以及新的功能不断地被发现.在疾病发生过程中,钙离子结合蛋白动态平衡的破坏与线粒体的异常、自由... 钙离子作为第二信使参与多种途径的调控,钙离子结合蛋白在此过程中起着重要的作用.通过对钙离子结合蛋白的分布特征、结构分析,新的成员以及新的功能不断地被发现.在疾病发生过程中,钙离子结合蛋白动态平衡的破坏与线粒体的异常、自由基的损害有密切的关系,并已在多种疾病特别是神经系统的疾病中得到了证实.本文就钙离子结合蛋白的特征以及在主要神经系统疾病中作用的研究进展进行简要综述. 展开更多
关键词 离子结合蛋白 线粒体 离子动态平衡 神经系统疾病
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离子交换高效液相法与乳胶黏着免疫抑制法测定糖化血红蛋白A_(1c)的相关性分析 被引量:1
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作者 朱宇 纪立农 +4 位作者 王虹 毛腾淑 郭晓蕙 钱荣立 邓正照 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期361-361,共1页
关键词 糖化血红蛋白A1C 免疫抑制法 高效液相法 离子交换 相关性分析 测定 乳胶 疗效评价指标 糖尿病患者
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乙型肝炎病毒PreS1蛋白与初期多肽相关复合体α亚单位特异性结合的研究 被引量:1
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作者 李丹 丁健 +1 位作者 林纳 王小众 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第23期2315-2318,共4页
目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)PreS1蛋白与人类初期多肽相关复合体α亚单位(nascent-polypeptide-asso-ciated complex alpha polypeptide,NACA)之间的结合作用。方法采用交合实验验证PreS1蛋白和NACA在酵母细胞内的结合作用,利用离体结合... 目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)PreS1蛋白与人类初期多肽相关复合体α亚单位(nascent-polypeptide-asso-ciated complex alpha polypeptide,NACA)之间的结合作用。方法采用交合实验验证PreS1蛋白和NACA在酵母细胞内的结合作用,利用离体结合实验证实二者在体外的结合作用,免疫共沉淀实验证实二者在哺乳动物细胞中的特异性结合。结果携带NACA基因的酵母同携带preS1基因的酵母交合后发生反应,LacZ活性检测菌落呈现蓝色,离体结合实验Western印迹中出现特异性结合活性反应条带,提示PreS1蛋白和NACA在体外存在直接相互作用,免疫共沉淀实验在13×103处出现蛋白条带,提示在哺乳动物细胞水平仍能检测到PreS1蛋白和NACA的特异结合。结论NACA与PreS1蛋白在酵母细胞和哺乳动物细胞中均存在特异性结合,推测NACA可能通过与PreS1蛋白的结合影响病毒黏附及反式激活等过程。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 PRES1蛋白 初期多肽相关复合体α亚单位 离体结合实验 免疫共沉淀实验
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可溶性耐药相关钙结合蛋白在MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞帕金森病模型中的表达及意义
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作者 解洪荣 常明 +4 位作者 张玉花 张继红 李雪松 孙丹 胡林森 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期626-630,共5页
目的:观察1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞帕金森病(PD)模型中可溶性抗药性相关钙结合蛋白(sorcin)表达的变化,寻求参与PD多巴胺能神经元细胞神经变性的蛋白质改变,为阐明PD的发病机制提供理论依据。方法:应用1.0mmol.L-1... 目的:观察1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞帕金森病(PD)模型中可溶性抗药性相关钙结合蛋白(sorcin)表达的变化,寻求参与PD多巴胺能神经元细胞神经变性的蛋白质改变,为阐明PD的发病机制提供理论依据。方法:应用1.0mmol.L-1 MPP+处理未分化的SH-SY5Y细胞24h,在体外建立PD细胞模型,应用荧光染色双向差异凝胶电泳(2D-DIGE)、图像分析、基质-辅助激光解析/电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和生物信息学的方法,对该模型的差异表达蛋白质进行研究。结果:蛋白质组学分析在对照组和MPP+处理组之间发现22个差异表达蛋白质,其中1个蛋白质点被确切的鉴定为sorcin。sorcin的表达明显上调,荧光丰度比值为1.97倍。该蛋白的最小肽片段覆盖率、最大概率期望值、相对分子质量和等电点分别为25.7、0.006、21 940和5.3。结论:sorcin在功能上与钙离子稳态和凋亡有关,可能参与了MPP+在SH-SY5Y细胞诱导的毒性,并可能与PD的发病机制有关。 展开更多
关键词 蛋白质组学 SH SY5Y细胞 1-甲基一4苯基一吡啶离子 可溶性抗药性相关结合蛋白 帕金森病
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胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1抑制视网膜血管新生的机制研究
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作者 孙涛 朱弼珺 +3 位作者 许迅 苏莉 顾青 许琳 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期133-136,142,共5页
目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1(IGFBP-rP1)抑制血管内皮细胞生长因子(VEGF)体外诱导视网膜新生血管形成的机制。方法猕猴视网膜/脉络膜血管内皮细胞株(RF/6A)扩增培养、血清饥饿培养24 h后,分为对照组及50、100、200 ng/m... 目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1(IGFBP-rP1)抑制血管内皮细胞生长因子(VEGF)体外诱导视网膜新生血管形成的机制。方法猕猴视网膜/脉络膜血管内皮细胞株(RF/6A)扩增培养、血清饥饿培养24 h后,分为对照组及50、100、200 ng/mL IGFBP-rP1干预组进行干预,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化;分为对照组,10 ng/mL VEGF干预组,50、100、200 ng/mL IGFBP-rP1+10 ng/mL VEGF干预组进行干预,免疫细胞化学染色检测细胞中B-Raf蛋白表达,分光光度法检测细胞中Caspase 3活性的变化。结果流式细胞仪检测显示,50、100、200 ng/mL IGFBP-rP1干预组RF/6A细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。免疫细胞化学染色检测与Caspase 3活性检测显示,与对照组比较,10 ng/mL VEGF干预组RF/6A细胞细胞质平均吸光度显著升高、D405值显著降低(均P<0.05);与10 ng/mL VEGF干预组比较,50、100、200 ng/mL IGFBP-rP1+10 ng/mL VEGF干预组RF/6A细胞细胞质平均吸光度显著降低、D405值显著升高(均P<0.05),且各组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 IGFBP-rP1通过干预B-Raf蛋白表达,上调细胞Caspase 3活性,对抗VEGF的促视网膜血管新生效应,发挥抑血管新生因子的负向调节作用。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1 血管内皮细胞生长因子 RF/6A细胞 B-RAF CASPASE3
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柑桔钙离子结合蛋白基因克隆及植物表达载体构建
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作者 贝学军 钟广炎 《中国南方果树》 北大核心 2012年第3期6-11,共6页
以伏令夏橙叶片中分离的总RNA为模板,经RT-PCR扩增到一条约600bp、含钙离子结合蛋白基因(CsCaBP)的片段,将此片段克隆到pMD-19T中,经测序分析该片段与甜橙基因组中的对应序列完全吻合。设计2对带有限制性内切酶位点的特异性引物,以cDNA... 以伏令夏橙叶片中分离的总RNA为模板,经RT-PCR扩增到一条约600bp、含钙离子结合蛋白基因(CsCaBP)的片段,将此片段克隆到pMD-19T中,经测序分析该片段与甜橙基因组中的对应序列完全吻合。设计2对带有限制性内切酶位点的特异性引物,以cDNA为模板扩增到2个CsCaBP片段,并连接到TA克隆载体pMD-19T上;经双酶切消化后,分别以正反2个方向插入到植物表达载体pFGC5941的查耳酮合成酶(CHSA)内含子两侧,构建成功CsCaBP的RNA干扰载体,但未获得转基因植株。将CsCaBP的正向片段定向克隆到具有CaMV35S启动子的pF-GC5941表达质粒上,构建成功CsCaBP过量表达载体。将构建好的表达载体导入根癌农杆菌LBA4404菌株,转化酸橙下胚轴,经PCR检测,获得9株过量表达转基因植株,荧光定量PCR验证发现目的基因在转基因植株中有不同程度的表达。 展开更多
关键词 柑桔 离子结合蛋白基因 基因克隆 遗传转化
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线粒体钙离子摄入蛋白1在血管紧张素Ⅱ诱导小鼠心肌肥大病理变化中的保护作用 被引量:4
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作者 杨怡 田玥 +5 位作者 沈阳 关美丽 陈莎 冯健 裴海峰 杨永健 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1051-1055,共5页
目的探讨线粒体钙离子摄入蛋白1(MICU1)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导小鼠心肌肥大病理变化中的作用及其相关机制。方法采用300nmol/L AngⅡ干预小鼠心肌细胞(MCM)48h以构建心肌肥大体外模型,然后以特异性siRNA转染技术敲低MCM中线粒体MICU... 目的探讨线粒体钙离子摄入蛋白1(MICU1)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导小鼠心肌肥大病理变化中的作用及其相关机制。方法采用300nmol/L AngⅡ干预小鼠心肌细胞(MCM)48h以构建心肌肥大体外模型,然后以特异性siRNA转染技术敲低MCM中线粒体MICU1水平;另采用腺病毒增加MCM中线粒体MICU1水平。通过qRT-PCR法检测心肌细胞中心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)mRNA的表达;JC-1及ATP试剂盒分别检测心肌细胞线粒体膜电位及ATP水平;qRT-PCR和Western blotting检测心肌细胞中的MICU1的表达;原子火焰吸收法检测心肌细胞线粒体中Ca^(2+)水平;细胞免疫荧光染色(α-actinin)检测心肌细胞大小。结果 AngⅡ所诱导的肥大心肌细胞中线粒体膜电位水平降低、ATP生成减少(P<0.05);心肌肥大导致MICU1表达下降,同时明显增加了细胞线粒体内Ca^(2+)含量(P<0.05)。通过基因沉默发现,MICU1的下调明显加重了线粒体Ca^(2+)超载(P<0.05),并导致心肌细胞横截面积增大和心肌细胞中BNP的表达增加(P<0.05)。相反,过表达MICU1则能明显减轻线粒体Ca^(2+)超载,使心肌细胞横截面积减小,ANP、BNP的表达降低。结论MICU1通过抵抗线粒体Ca^(2+)超载减轻了AngⅡ所诱导的心肌肥大。 展开更多
关键词 心肌肥大 线粒体离子摄入蛋白1 线粒体 超载
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可溶性耐药相关钙结合蛋白 被引量:2
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作者 张蓓蓓 吴毓 李庆伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期942-946,共5页
可溶性耐药相关钙结合蛋白(sorcin)是一个21·6kD的胞浆蛋白,具有典型的EF手臂(EF-hand)钙结合位点,广泛存在于多种组织中,在心肌细胞中含量最丰富.Sorcin可与肌浆网钙离子通道RyR相互作用,影响心肌细胞兴奋——收缩偶联.另一方面,s... 可溶性耐药相关钙结合蛋白(sorcin)是一个21·6kD的胞浆蛋白,具有典型的EF手臂(EF-hand)钙结合位点,广泛存在于多种组织中,在心肌细胞中含量最丰富.Sorcin可与肌浆网钙离子通道RyR相互作用,影响心肌细胞兴奋——收缩偶联.另一方面,sorcin在肿瘤耐药细胞中大量表达,它可以与细胞中钙离子结合,引起细胞内游离钙离子浓度下降,然后导致钙离子所介导的磷酸酶活性降低,使得具有排药功能的P-gp糖蛋白磷酸化水平下降,最终导致耐药.一旦明确引发和维持细胞耐药的作用机制,就可为克服肿瘤耐药提供新的靶点.同时随着RyR活性抑制作用研究的深入,有望通过sorcin转基因技术治疗心力衰竭.本文主要对sorcin的结构特点和生物学特性进行综述,并初步分析其耐药机制. 展开更多
关键词 可溶性耐药相关结合蛋白 离子通道 多药耐药
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慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙离子和钙调蛋白的影响 被引量:3
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作者 赵良渊 侯晓敏 秦小江 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1306-1310,1316,共6页
目的:探讨慢病毒介导转染α1D-肾上腺素能受体(Adra1d)基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中Ca^(2+)浓度及钙调蛋白(Ca M)表达的影响。方法:Adra1d基因shRNA与GV248载体拼接得到重组载体,经包装... 目的:探讨慢病毒介导转染α1D-肾上腺素能受体(Adra1d)基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中Ca^(2+)浓度及钙调蛋白(Ca M)表达的影响。方法:Adra1d基因shRNA与GV248载体拼接得到重组载体,经包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度得到重组慢病毒载体。用得到的重组慢病毒载体转染大鼠VSMCs,通过RT-q PCR和Western blot鉴定干扰效果,然后激光共聚焦检测VSMCs内Ca^(2+)浓度变化,RT-q PCR和Western blot法检测VSMCs Ca M的mRNA和蛋白表达。结果:慢病毒载体构建成功;收集得到293T细胞分泌的病毒上清,测定病毒的滴度为3×1011TU/L。转染后大鼠主动脉VSMCs的Adra1d mRNA和蛋白表达量均显著下调。慢病毒Lv-shRNA4-Adr对目的基因Adra1d的干扰效率大于85%;Adra1d基因被靶向沉默后,与scrambled组相比,大鼠主动脉VSMCs的Ca^(2+)荧光强度显著升高,而且Ca M的mRNA和蛋白表达量也显著增加。结论:慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA可显著增加大鼠主动脉VSMCs中Ca^(2+)浓度和Ca M表达。 展开更多
关键词 Adra1d基因 血管平滑肌细胞 RNA干扰 离子 蛋白
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亚洲玉米螟中肠类钙黏蛋白Cry1A毒素结合区对Cry1Ac毒素杀虫活性的影响 被引量:2
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作者 靳婷婷 王振营 何康来 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期41-47,共7页
通过原核表达及亲和层析获得亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis中肠类钙黏蛋白Cry1A毒素结合区MPR及其在Cry1Ac抗性玉米螟中的突变体MPR-r2多肽片段。采用饲料混合法测定了MPR和MPR-r2及其分别与Cry1Ac毒素混合对亚洲玉米螟幼虫的杀虫效果... 通过原核表达及亲和层析获得亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis中肠类钙黏蛋白Cry1A毒素结合区MPR及其在Cry1Ac抗性玉米螟中的突变体MPR-r2多肽片段。采用饲料混合法测定了MPR和MPR-r2及其分别与Cry1Ac毒素混合对亚洲玉米螟幼虫的杀虫效果。结果表明,MPR和MPR-r2多肽片段对亚洲玉米螟幼虫都有一定的杀虫作用;当MPR多肽片段与Cry1Ac毒素混合时,杀虫活性具有加性效应,而MPR-r2多肽片段与Cry1Ac毒素混合的杀虫效果则没有显著提高。 展开更多
关键词 亚洲玉米螟 蛋白 毒素结合 Cry1Ac毒素 加性效应 等位基因突变
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