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硒代二半胱氨酸对白血病细胞系cAMP、cGMP及Ca^(++)的影响
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作者 张俊德 郑景熙 黄平 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1994年第4期391-394,共4页
本实验观察了硒代二半胱氨酸对白血病细胞系(U937和K562)第二信使的影响,旨在探讨其抑制白血病细胞生长和有丝分裂的机制。结果表明,经3.0μmol/L(半数抑制浓度)的硒代二半胱氨酸作用3天后,白血病细胞内cGMP和Ca^(++)含量明显降低,cAMP... 本实验观察了硒代二半胱氨酸对白血病细胞系(U937和K562)第二信使的影响,旨在探讨其抑制白血病细胞生长和有丝分裂的机制。结果表明,经3.0μmol/L(半数抑制浓度)的硒代二半胱氨酸作用3天后,白血病细胞内cGMP和Ca^(++)含量明显降低,cAMP含量显著增高,CAMP/cGMP比值增大,从而抑制白血病细胞DNA合成期所需的胸腺嘧啶核苷酸合成酶活性,抑制有丝分裂期微管蛋白的解聚,干扰有丝分裂过程,造成白血病细胞生长和增殖障碍。 展开更多
关键词 硒代二 白血病 环磷腺苷 环磷鸟苷 离子
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半胱氨酰白三烯受体2拮抗剂筛选方法的建立及化合物初筛 被引量:4
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作者 蔡蓓蕾 黄雪琴 +5 位作者 董晓武 方三华 卢韵碧 张纬萍 胡永洲 魏尔清 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期598-604,共7页
目的:建立半胱氨酰白三烯受体2(CysLT2受体)拮抗剂筛选的细胞模型及方法,初筛系列合成化合物。方法:选用高表达CysLT2受体的大鼠C6胶质瘤细胞,激动剂LTD4攻击后检测细胞内钙浓度变化,作为CysLT2受体拮抗剂的筛选方法,初步筛选有拮抗剂... 目的:建立半胱氨酰白三烯受体2(CysLT2受体)拮抗剂筛选的细胞模型及方法,初筛系列合成化合物。方法:选用高表达CysLT2受体的大鼠C6胶质瘤细胞,激动剂LTD4攻击后检测细胞内钙浓度变化,作为CysLT2受体拮抗剂的筛选方法,初步筛选有拮抗剂活性的化合物。采用CysLT1/CysLT2受体非选择性拮抗剂Bay u9773和CysLT2受体选择性拮抗剂AP-100984作为参照。结果:RT-PCR鉴定表明C6细胞高表达CysLT2受体。LTD41μmol/L能显著升高C6细胞内钙,其作用约为阳性对照ATP的37.5%。CysLT2受体拮抗剂抑制LTD4诱导的C6细胞内钙升高,CysLT1受体选择性拮抗剂无抑制作用。化合物中DXW-1、2、13、23、29、30能抑制LTD4诱导的细胞内钙升高。结论:LTD4诱导的C6细胞的钙信号变化可作为CysLT2受体拮抗剂的筛选方法;化合物DXW-1、2、13、23、29、30具有CysLT2受体拮抗活性。 展开更多
关键词 /遗传 受体 白三烯/遗传 酰白三烯 CysLT2受体 受体拮抗剂 离子 C6细胞
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黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元钙调蛋白表达的影响 被引量:3
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作者 闫凤霞 钱涛 +4 位作者 高维娟 叶冬青 任立群 张雅丽 侯志平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1708-1714,共7页
目的:观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元钙调蛋白(CaM)表达的影响,探讨黄芪注射液抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的机制。方法:取原代培养8 d的大鼠海马神经元,随机分为4组:正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组... 目的:观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元钙调蛋白(CaM)表达的影响,探讨黄芪注射液抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的机制。方法:取原代培养8 d的大鼠海马神经元,随机分为4组:正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪注射液溶剂对照组和黄芪注射液组。除正常对照组外均进行缺氧缺糖0.5 h再复氧复糖。各组于复氧复糖后0 h、0.5 h、2 h、6 h、24 h、48 h、72 h和120 h采用免疫组织化学染色法检测caspase-3的表达,采用Western blotting和RT-PCR方法检测CaM的表达。结果:与正常对照组相比,除0 h和0.5 h之外,缺氧缺糖/复氧复糖组各时点海马caspase-3蛋白阳性神经元数目、占神经元总数的百分率及平均吸光度值均明显增多(P<0.05),于24 h达到高峰。黄芪注射液组除0 h和0.5 h之外,各时点以上指标比缺氧缺糖/复氧复糖组显著减少(P<0.05)。黄芪注射液溶剂对照组以上指标与缺氧缺糖/复氧复糖组无差异(P>0.05)。各时点缺氧缺糖/复氧复糖组海马神经元CaM蛋白表达均较正常对照组明显升高(P<0.05);与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪注射液溶剂对照组各时点CaM蛋白表达无明显变化(P>0.05),而黄芪注射液组在各个时点CaM蛋白表达明显降低(P<0.05)。各时点缺氧缺糖/复氧复糖组海马神经元CaM mRNA表达均较正常对照组明显降低(P<0.05);与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪注射液溶剂对照组各时点CaM mRNA表达无明显变化(P>0.05),而黄芪注射液组在各个时点CaM mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论:黄芪注射液抑制CaM表达,可能是其减轻缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的机制之一。 展开更多
关键词 海马 神经元 黄芪注射液 缺氧缺糖/复氧复糖 细胞凋亡 天冬蛋白酶3 蛋白
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灵芝孢子粉对2型糖尿病大鼠附睾组织Cyt-C和半胱天冬酶的影响 被引量:2
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作者 马小茹 王淑秋 +7 位作者 刘月霞 张士岭 周成福 王芳芳 梁衍峰 王淑湘 张建华 李永毅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期2460-2462,共3页
目的:观察和探讨灵芝孢子粉对2型糖尿病大鼠附睾组织中细胞色素C(Cyt-C)、半胱天冬酶(caspase)的影响。方法:50只青春期大鼠随机分为模型组、灵芝治疗组和对照组组,模型组和灵芝治疗组大鼠经尾静脉1次性注射2%链脲佐菌素(STZ)制备2型糖... 目的:观察和探讨灵芝孢子粉对2型糖尿病大鼠附睾组织中细胞色素C(Cyt-C)、半胱天冬酶(caspase)的影响。方法:50只青春期大鼠随机分为模型组、灵芝治疗组和对照组组,模型组和灵芝治疗组大鼠经尾静脉1次性注射2%链脲佐菌素(STZ)制备2型糖尿病大鼠模型,分别给以高脂高糖饮食、高脂高糖+灵芝孢子粉(250mg·kg-1.d-1),对照组给予柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液尾静脉注射,正常饮食。10周后,取双侧附睾,用张均田法检测附睾细胞Cyt-C含量、免疫组化检测附睾体部细胞caspase酶活力。结果:2型糖尿病模型制备成功,模型组附睾细胞线粒体Cyt-C含量明显少于对照组(P<0.05),胞质Cyt-C含量明显高于对照组(P<0.01);灵芝治疗组线粒体Cyt-C含量高于模型组,但差异无显著(P>0.05),胞质Cyt-C含量明显低于模型组(P<0.05),与对照组比较无显著差异(P>0.05);模型组caspase-3、8、9平均吸光度值明显高于对照组(P<0.01),灵芝治疗组caspase-3、8、9平均吸光度值明显高于对照组(P<0.05),明显低于模型组(P<0.05)。结论:2型糖尿病大鼠附睾细胞线粒体有损伤,附睾细胞存在细胞凋亡过度。在糖尿病状态下,灵芝孢子粉对附睾组织有保护作用。 展开更多
关键词 糖尿病 非胰岛素依赖 灵芝孢子粉 附睾 细胞色素C 天冬蛋白酶
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谷氨酸损伤体外培养大鼠螺旋神经元中凋亡诱导因子的表达与分布 被引量:2
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作者 丁忠家 唐晓旭 +5 位作者 陈鑫 宋勇莉 米文娟 王剑 陈福权 邱建华 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期620-624,共5页
目的观察不同浓度谷氨酸(Glu)损伤螺旋神经元中凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)的表达与分布变化,探讨利用谷氨酸损伤体外培养螺旋神经元是否与AIF凋亡途径相关。方法取40只出生后0~3天SD仔鼠螺旋神经元行体外培养,所... 目的观察不同浓度谷氨酸(Glu)损伤螺旋神经元中凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)的表达与分布变化,探讨利用谷氨酸损伤体外培养螺旋神经元是否与AIF凋亡途径相关。方法取40只出生后0~3天SD仔鼠螺旋神经元行体外培养,所得培养细胞平均分为正常组和10mM、20mM、40mM Glu组,正常组仅给予正常SGNs培养液培养,其余三组分别加入相应浓度谷氨酸和SGNs培养液,培养48h后,应用光学显微镜、免疫荧光染色及实时荧光定量PCR方法观察四组中SGN细胞形态、SGN中AIF的分布及AIF、钙蛋白酶(calpain)、半胱氨酸天冬氨酸3(caspase 3)的表达变化;用TUNEL法观察细胞凋亡。结果 20mM和40mM Glu组SGNs细胞形态改变和细胞凋亡明显,并伴有AIF核转位;不同浓度Glu组AIF和calpain基因表达明显高于正常组(P〈0.05),但caspase 3表达无明显升高(P〉0.05)。结论谷氨酸损伤体外培养的螺旋神经元过程中,AIF凋亡途径参与了细胞凋亡,calpain的高表达也促进了兴奋性神经递质对SGNs的损伤,但caspase3途径无明显作用。 展开更多
关键词 螺旋神经元 凋亡诱导因子 蛋白酶 天冬3
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钙调蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN62对肝星状细胞增殖、凋亡的影响及机制 被引量:5
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作者 王路广 戴琳玉 +1 位作者 闫宇 肖永红 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第2期152-157,共6页
目的研究钙调蛋白激酶Ⅱ(calmodulin kinaseⅡ,CaMKⅡ)抑制剂KN62对转化生长因子-β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)刺激的LX2肝星形细胞(LX2 hepatic stellate cells,LX2⁃HSCs)增殖、凋亡的影响及可能的机制。方法取1、5、1... 目的研究钙调蛋白激酶Ⅱ(calmodulin kinaseⅡ,CaMKⅡ)抑制剂KN62对转化生长因子-β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)刺激的LX2肝星形细胞(LX2 hepatic stellate cells,LX2⁃HSCs)增殖、凋亡的影响及可能的机制。方法取1、5、10、20μmol/L KN62作用于LX2,各培养1、3、6、12、24 h,CCK⁃8法检测细胞增殖并依据其结果分为5个实验组:空白对照组,5 ng/mL TGF⁃β1组,低、中、高浓度KN62(1、5、10μmol/L)+TGF⁃β1组。TUNEL法检测细胞凋亡,Western Blot检测CaMK II、Bcl⁃2、Bax及caspase⁃12蛋白表达。结果KN62作用6 h后不同时间点,各浓度组OD值比较差异均有统计学意义(P<0.05),但20μmol/L与10μmol/L比较差异均无统计学意义(P>0.05);低、中、高浓度KN62+TGF⁃β1组细胞增殖率分别为82.3%、67.4%、50.1%,凋亡率分别为(30.8±6.1)%、(54.5±4.5)%、(75.7±5.6)%,差异均有统计学意义(F=80.070,P<0.001;F=73.199,P<0.001);各浓度KN62组均能降低CaMKII(F=84.355,P<0.001)及Bcl⁃2蛋白表达(F=110.896,P<0.001),增加Bax蛋白表达(F=156.086,P<0.001),致Bcl⁃2/Bax比值降低;随KN62浓度增加,procaspase⁃12和cleaved caspase⁃12蛋白表达均升高(P<0.001)。结论CaMKⅡ抑制剂KN62能够抑制LX2增殖并诱导其凋亡,可能与caspase⁃12依赖性内质网应激凋亡途径有关。 展开更多
关键词 肝星状细胞 蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN62 增殖 凋亡 天冬蛋白酶12
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钙敏感受体表达增加诱发内质网应激在缺氧复氧性心肌损伤中的作用 被引量:6
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作者 孙智睿 王艳丽 +4 位作者 杜丽娟 赵雅君 王丽娜 徐长庆 张伟华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1249-1253,共5页
目的:观察钙敏感受体表达增加诱发内质网应激在缺氧复氧性心肌损伤中的作用。方法:乳鼠原代心肌细胞培养4-5d后,随机分为5组:正常对照组(N组)、缺氧/复氧组(H/Re组)、阻断剂(NiCl2,CdCl2)组、激动剂(GdCl3,NiCl2,CdCl2)组和caffeine组... 目的:观察钙敏感受体表达增加诱发内质网应激在缺氧复氧性心肌损伤中的作用。方法:乳鼠原代心肌细胞培养4-5d后,随机分为5组:正常对照组(N组)、缺氧/复氧组(H/Re组)、阻断剂(NiCl2,CdCl2)组、激动剂(GdCl3,NiCl2,CdCl2)组和caffeine组。采用饱和氮气pH6.8的D-Hands液培养细胞3h,再用含20%新生牛血清的DMEM液培养细胞9h,复制心肌缺氧/复氧模型。检测血清LDH活力,MTT检测细胞存活率,心肌细胞caspase-12和CaSR蛋白表达水平Western blotting检测,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)测定心肌细胞内游离钙的变化。结果:缺氧/复氧组和激动剂组LDH活力、细胞内游离钙浓度均高于对照组;同时,caspase-12和CaSR的表达也明显高于对照组。反之,细胞存活率低于对照组。结论:心肌缺氧/复氧过程中,钙敏感受体表达增多,从而破坏了细胞内钙稳态诱发过度的内质网应激,通过caspase-12等凋亡蛋白表达的增多等途径引起心肌细胞凋亡。 展开更多
关键词 缺氧 受体 敏感 内质网 应激 天冬蛋白酶12 心肌细胞
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吡格列酮对淀粉样β蛋白片段1-42引起的大鼠海马神经细胞凋亡相关蛋白表达的影响 被引量:6
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作者 姜艳 金英 +4 位作者 王世兴 李亚男 闫恩志 齐志敏 魏佳 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期355-361,共7页
目的研究吡格列酮(Pio)对淀粉样β蛋白片段1-42(Aβ1-42)所致大鼠海马神经细胞凋亡的抑制作用及作用机制。方法大鼠随机分为5组,即正常对照组,Aβ1-42损伤组,Aβ1-42+Pio20,40及80mg·kg-1组。于d1和2,Pio处理组大鼠灌胃给予Pio,正... 目的研究吡格列酮(Pio)对淀粉样β蛋白片段1-42(Aβ1-42)所致大鼠海马神经细胞凋亡的抑制作用及作用机制。方法大鼠随机分为5组,即正常对照组,Aβ1-42损伤组,Aβ1-42+Pio20,40及80mg·kg-1组。于d1和2,Pio处理组大鼠灌胃给予Pio,正常对照组和Aβ1-42损伤组灌胃给予0.2%二甲亚砜。d2给药处理后,Aβ1-42损伤组及Pio处理组大鼠左侧脑室内单次注射Aβ1-425μL(2.0mmol·L-1)制备大鼠痴呆模型,正常对照组注射等量的生理盐水。再连续给药6d后,取海马CA1区,用Western蛋白印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3,caspase7,caspase9及μ-钙蛋白酶和多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)蛋白表达水平的变化。结果脑室内注射Aβ1-42可使大鼠海马CA1区活化的caspase3,caspase7,caspase9蛋白及μ-钙蛋白酶表达水平明显增高,分子质量116kuPARP表达明显减少,而分子质量89ku劈切PARP表达明显增加。Pio40及80mg·kg-1可明显抑制Aβ1-42所致海马CA1区活化的caspase9和μ-钙蛋白酶表达增加,也可明显抑制Aβ1-42所致的PARP表达的改变。但Pio20mg·kg-1对Aβ1-42所致海马caspase9,μ-钙蛋白酶和PARP表达无明显作用。Pio20,40及80mg·kg-1均可抑制Aβ1-42所致海马CA1区活化的caspase3和caspase7表达增加。结论Pio对Aβ1-42引起的海马神经细胞凋亡具有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 吡格列酮 天冬蛋白酶 过氧化物酶增殖物活化受体γ 蛋白酶
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caspase-3抑制药和钙拮抗药联合应用对氧糖剥夺性神经元缺血损害的保护作用
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作者 张拥波 董为伟 王得新 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2007年第1期57-60,共4页
目的探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)抑制药Ac-DEVD-CHO与钙拮抗药尼莫地平对神经元缺血性损害的协同保护作用。方法利用新生(<24 h)Wistar大鼠皮质基底节神经元进行原代分散培养,建立氧糖剥夺离体神经元“缺血”模型,采用... 目的探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)抑制药Ac-DEVD-CHO与钙拮抗药尼莫地平对神经元缺血性损害的协同保护作用。方法利用新生(<24 h)Wistar大鼠皮质基底节神经元进行原代分散培养,建立氧糖剥夺离体神经元“缺血”模型,采用乳酸脱氢酶测定法评价培养神经元的损害程度;并通过荧光免疫吸附酶法检测caspase-3活性,观察caspase-3抑制药Ac-DEVD-CHO(0.50μg/ml)、钙拮抗药尼莫地平(20μmol/L)及二者联合应用对氧糖剥夺4 h神经元损害和caspase-3活性的影响。结果Ac-DEVD-CHO、尼莫地平及二者联合用药均可显著减轻氧糖剥夺4h后的神经元损害,并可抑制caspase-3活性的升高,与氧糖剥夺对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);两药联合应用具有明显协同作用。结论caspase-3抑制药与钙拮抗药对缺血性神经元具有协同保护作用。 展开更多
关键词 神经元 细胞 培养的 蛋白酶 蛋白酶抑制剂 尼莫地平
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柞蚕传染性软腐病病毒(Iflavirus)功能蛋白的基因克隆和结构分析 被引量:2
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作者 耿鹏 周倩 +2 位作者 安利佳 OLLE Terenius 李文利 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期843-850,共8页
从患柞蚕吐白水软化病的病蚕体内分离到一株传染性软腐病病毒属(Iflavirus)病毒。研究柞蚕传染性软腐病病毒基因组结构及主要功能蛋白的结构域,为确定该病毒株的分类学地位和阐释其侵染机制提供基础信息。克隆了编码柞蚕传染性软腐病病... 从患柞蚕吐白水软化病的病蚕体内分离到一株传染性软腐病病毒属(Iflavirus)病毒。研究柞蚕传染性软腐病病毒基因组结构及主要功能蛋白的结构域,为确定该病毒株的分类学地位和阐释其侵染机制提供基础信息。克隆了编码柞蚕传染性软腐病病毒功能蛋白的RNA解旋酶基因(423 bp)、3C半胱氨酸蛋白酶基因(405 bp)以及RNA依赖性的RNA聚合酶基因(882 bp)。通过同源模建方法,构建了柞蚕传染性软腐病病毒3个功能蛋白的三维结构模型,并采用拉氏图和Profile 3D等方法验证了模型的可靠性。将柞蚕传染性软腐病病毒中RNA依赖性的RNA聚合酶序列与另外16个小RNA病毒同源序列进行比对并构建系统发育树,显示柞蚕传染性软腐病病毒与蜜蜂残翅病病毒和蜜蜂瓦螨虫病毒的亲缘关系十分相近。 展开更多
关键词 柞蚕吐白水软化病 传染性软腐病病毒属 RNA解旋酶 3C蛋白酶 RNA依赖性的RNA聚合酶
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Calpain抑制剂ALLN对酵母多糖足底炎性疼痛模型大鼠的镇痛作用及其对脊髓背角环氧化酶-2表达水平的影响 被引量:1
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作者 王静捷 陈广俊 +3 位作者 陈雯 杜金 罗爱伦 黄宇光 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期25-31,共7页
目的评价calpain抑制剂ALLN对酵母多糖足底炎性疼痛模型大鼠的镇痛作用及其对脊髓背角环氧化酶-2(COX-2)表达水平的影响,探讨calpain在炎性疼痛中的作用机制。方法 SD大鼠48只,随机分为对照组、假手术组和酵母多糖组,按Meller方法制作... 目的评价calpain抑制剂ALLN对酵母多糖足底炎性疼痛模型大鼠的镇痛作用及其对脊髓背角环氧化酶-2(COX-2)表达水平的影响,探讨calpain在炎性疼痛中的作用机制。方法 SD大鼠48只,随机分为对照组、假手术组和酵母多糖组,按Meller方法制作酵母多糖足底炎性疼痛模型。分别于制模前和制模后0.5、1、2、4、8、24和48 h测定各组大鼠左侧后足机械刺激缩足阈值(MWT)和左侧后足最大厚度,并在指定时间点处死取制模侧腰段脊髓背角,采用Western印迹方法测定calpain的活性。另取SD大鼠64只,随机分为假手术组、二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组和ALLN治疗组。分别于制模前和制模后0.5、1、2、4、8、24和48 h测定各组大鼠左侧后足MWT和左侧后足最大厚度,并在指定时间点处死取制模侧腰段脊髓背角,采用Western印迹方法测定COX-2的含量变化。结果与对照组和假手术组相比,酵母多糖组大鼠制模侧后足MWT显著降低(P<0.05),最大厚度显著增加(P<0.01),制模后4、24和48 h calpain活化水平明显增强(P<0.01)。与DMSO溶剂对照组大鼠比较,ALLN治疗组大鼠制模后相应时间点MWT显著增高(P<0.05),左足最大厚度显著减小(P<0.05),脊髓背角COX-2表达水平明显下降(P<0.01)。结论酵母多糖足底炎性疼痛模型大鼠脊髓背角calpain活化增强。Calpain抑制剂ALLN可以显著缓解酵母多糖足底炎性疼痛模型大鼠的炎性疼痛和炎性水肿,并显著降低模型大鼠脊髓背角COX-2的表达水平,提示calpain活化后可能通过促进脊髓水平COX-2表达增加,参与炎性疼痛的形成。 展开更多
关键词 酵母多糖 炎性疼痛 环氧化酶-2 脊髓背角 钙离子依赖半胱氨酸蛋白酶 抑制剂
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桂枝茯苓胶囊通过调控NF-κB通路抑制卵巢癌细胞的迁移和诱导卵巢癌细胞的凋亡 被引量:7
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作者 郭晓娟 陈丽平 +5 位作者 吕芹 杜瑞娟 罗琴 张阳 卞华 韩立 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1315-1321,共7页
目的研究桂枝茯苓胶囊(GFC)抑制人卵巢癌转移的作用和潜在机制。方法60只Wistar大鼠随机分为4组,15只/组:给药组分别灌胃给予4、8、16 g·kg^(-1)·d^(-1)剂量的GFC悬液5 d,分别制备GFC低、中、高剂量含药血清,空白组给予相同... 目的研究桂枝茯苓胶囊(GFC)抑制人卵巢癌转移的作用和潜在机制。方法60只Wistar大鼠随机分为4组,15只/组:给药组分别灌胃给予4、8、16 g·kg^(-1)·d^(-1)剂量的GFC悬液5 d,分别制备GFC低、中、高剂量含药血清,空白组给予相同体积的生理盐水制备空白血清;卵巢癌耐顺铂SKOV3/DDP细胞分为空白血清组、不同剂量GFC含药血清组和NF-κB抑制剂SN50阳性对照组。采用划痕实验检测含药血清对迁移的影响,采用流式细胞术检测含药血清对凋亡的影响,采用RT-qPCR和Westernblot检测含药血清对细胞中上皮表型E-钙粘蛋白(CDH1)、间质表型N-钙黏蛋白(CDH2)、caspase 3和NF-κB mRNA和蛋白表达的影响。采用ATAC-seq检测染色质开放区域CDH1、CDH2、caspase 3和NF-κB基因表达差异。结果GFC含药血清可剂量依赖性地抑制SKOV3/DDP细胞迁移,增加细胞凋亡(P<0.05,P<0.01)。随着含药血清剂量增加,其对CDH2和NF-κB的抑制作用,及其对CDH1和caspase 3的诱导作用均逐渐增强(P<0.05,P<0.01)。高剂量含药血清抑制SKOV3/DDP细胞迁移,诱导凋亡、caspase 3 mRNA和蛋白以及CDH1 mRNA表达,抑制CDH2和NF-κB mRNA和蛋白表达的作用与SN50相当(P>0.05),但诱导CDH1蛋白表达的作用弱于SN50(P<0.01)。含药血清可减弱染色质开放区域NF-κB、CDH2基因表达,增强CDH1表达,但对caspase 3无影响。结论GFC含药血清抑制SKOV3/DDP迁移作用可能与其诱导凋亡、caspase 3和CDH1表达,抑制CDH2和NF-κB表达,调控染色质开放区域NF-κB、CDH2和CDH1表达有关。 展开更多
关键词 卵巢癌 桂枝茯苓胶囊 核因子κB E-蛋白 N-蛋白 上皮间质转化 蛋白酶-3
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己酮可可碱对NOD小鼠胰岛β细胞caspases表达的影响 被引量:4
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作者 顾丽萍 吴艺捷 +2 位作者 王煜非 施念玮 董维平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1574-1577,共4页
目的:观察己酮可可碱(PTX)对NOD小鼠1型糖尿病的早期干预作用及探讨其可能的机制。方法:用环磷酰胺加速发病的NOD小鼠1型糖尿病动物模型,腹腔注射PTX后监测血糖、糖尿病发病率,TUNEL法检测胰岛细胞凋亡,免疫组化观察胰岛β细胞caspase-... 目的:观察己酮可可碱(PTX)对NOD小鼠1型糖尿病的早期干预作用及探讨其可能的机制。方法:用环磷酰胺加速发病的NOD小鼠1型糖尿病动物模型,腹腔注射PTX后监测血糖、糖尿病发病率,TUNEL法检测胰岛细胞凋亡,免疫组化观察胰岛β细胞caspase-3的表达,半定量逆转录RT-PCR法检测胰腺caspase-8mRNA的表达。结果:PTX组实验结束时糖尿病发病率(40.63%)低于对照组(69.70%),P<0.05;胰岛β细胞凋亡显著少于对照组(P<0.01);胰岛β细胞caspase-3的表达显著少于对照组;胰腺caspase-8 mRNA的表达亦低于对照组(P<0.01)。结论:PTX可预防NOD鼠糖尿病的发生,其机制可能与下调胰腺caspase-3和caspase-8的表达及减少胰岛β细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 己酮可可碱 糖尿病 胰岛素依赖 细胞凋亡 天冬蛋白酶
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刚地弓形虫培养上清对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的作用 被引量:3
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作者 黄开顺 黄天利 +1 位作者 葛璞 叶彬 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期98-99,101,共3页
目的:研究刚地弓形虫RH株培养上清对体外培养的肝癌细胞HepG2增值的影响,并探讨其可能的影响机制。方法:取对数生长期的HepG2细胞,分别接种于96孔细胞培养板及50mL培养瓶中,加入200μL不同数量(3×107/mL、6×107/mL、12×1... 目的:研究刚地弓形虫RH株培养上清对体外培养的肝癌细胞HepG2增值的影响,并探讨其可能的影响机制。方法:取对数生长期的HepG2细胞,分别接种于96孔细胞培养板及50mL培养瓶中,加入200μL不同数量(3×107/mL、6×107/mL、12×107/mL)弓形虫RH株速殖子培养上清孵育24、48、36、72h后,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测其对HepG2细胞增殖抑制作用;不同浓度弓形虫培养上清作用HepG2细胞48 h后,DAPI染色,荧光显微镜观察细胞核形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度(〔Ca2+〕i),Western-blot检测凋亡HepG2细胞内Caspase-3的表达。结果弓形虫培养上清能抑制HepG2细胞株增殖和诱导其凋亡,且呈时间剂量依赖性,各实验组与对照组比较有统计学意义(P<0.05);HepG2细胞凋亡率和〔Ca2+〕i随浓度增加逐渐增加,12×107/mL时凋亡率和〔Ca2+〕i分别达到41.46%、128.4(荧光计数单位);Caspase-3的表达随上清浓度增加表达增强。结论:刚地弓形虫培养上清能够抑制肝癌HepG2细胞增殖,其诱导HepG2细胞凋亡可能与细胞内钙离子浓度上调和Caspase-3的表达增强相关。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 肝癌细胞HEPG2 细胞凋亡 细胞内离子浓度 蛋白酶-3
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诊断超声对HEK-293细胞凋亡的影响及其机制 被引量:1
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作者 徐晓红 罗毅 《中国医学影像技术》 CSCD 北大核心 2008年第11期1678-1680,共3页
目的探讨诊断超声照射对体外培养的HEK-293细胞凋亡的影响。方法采用HEK-293细胞,构建超声照射模型,采用4个超声照射剂量浓度(0min、10min、20min和30min),每个浓度设3个平行瓶,重复三次。处理后行An-nexin V-FITC/PI双染,流式细胞仪行... 目的探讨诊断超声照射对体外培养的HEK-293细胞凋亡的影响。方法采用HEK-293细胞,构建超声照射模型,采用4个超声照射剂量浓度(0min、10min、20min和30min),每个浓度设3个平行瓶,重复三次。处理后行An-nexin V-FITC/PI双染,流式细胞仪行凋亡细胞计数;免疫细胞化学检测Caspase-3凋亡蛋白表达水平的变化。结果An-nexin V-FITC/PI双染色显示,随着超声照射剂量的增加,流式计数的细胞凋亡率增加,20min组具有统计学意义(P<0.05),30min组具有显著统计学意义(P<0.01);同时可使凋亡蛋白酶Caspase-3表达水平增加。结论特定剂量的超声聚焦照射可引起部分细胞凋亡改变,并具有一定量效关系。 展开更多
关键词 超声检查 凋亡 磷酯结合蛋白 荧光素-5-异硫氰 天冬蛋白酶3
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细胞色素C与植物细胞编程性死亡 被引量:6
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作者 刘根林 《江苏林业科技》 2007年第5期34-39,共6页
目前普遍认为:细胞色素C(Cyt c)从植物线粒体内向胞浆的释放与植物细胞编程性死亡(PCD)关系密切。与动物PCD过程相似,植物线粒体内Cyt c的释放通过线粒体通透性转换孔(MPTP)或直接通过线粒体外膜的孔蛋白——电位依赖型阴离子通道进行... 目前普遍认为:细胞色素C(Cyt c)从植物线粒体内向胞浆的释放与植物细胞编程性死亡(PCD)关系密切。与动物PCD过程相似,植物线粒体内Cyt c的释放通过线粒体通透性转换孔(MPTP)或直接通过线粒体外膜的孔蛋白——电位依赖型阴离子通道进行。活性氧(ROS)诱导MPTP的形成,释放Cyt c,导致呼吸电子传递链阻断,ATP合成解偶联,产生ROS,ROS反过来再刺激Cyt c的释放;细胞浆内高水平的Ca2+会触发MPTP的形成以及Cytc的释放。作为植物PCD的早期事件,Cyt c的释放激活了特异性半胱氨酸蛋白酶类的信号级联放大途径,最后产生以核小体DNA长度为基数的DNA片段。在植物中,已经鉴定了几个具有与动物细胞凋亡蛋白酶活化因子-1相同序列的植物基因产物;Cyt c的释放对PCD的激活作为细胞凋亡的古老机制,从多细胞生物的单细胞祖先继承并进化而来。 展开更多
关键词 细胞色素C 细胞编程性死亡 线粒体通透性转换孔 电位依赖型阴离子通道 特异性蛋白酶 级联 放大途径
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大鼠急性肾损伤导致肝细胞凋亡的实验研究
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作者 包翠芬 刘玉玲 邵佑之 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2233-2237,共5页
目的:观察大鼠急性肾损伤(AKI)引起肝细胞凋亡的细胞学特点。方法:建立AKI(包括缺血性和非缺血性)大鼠模型后应用免疫印迹法、免疫组织化学染色法和光学、电子显微镜技术对AKI大鼠的肾脏和肝脏进行观察。结果:(1)缺血性AKI肾小管出现了... 目的:观察大鼠急性肾损伤(AKI)引起肝细胞凋亡的细胞学特点。方法:建立AKI(包括缺血性和非缺血性)大鼠模型后应用免疫印迹法、免疫组织化学染色法和光学、电子显微镜技术对AKI大鼠的肾脏和肝脏进行观察。结果:(1)缺血性AKI肾小管出现了大面积细胞坏死和细胞凋亡的表现。不论是缺血性还是非缺血性AKI的动物都发生了急性肾功能损伤和急性肝功能受损。(2)免疫印迹法测定结果显示AKI动物肝脏的肿瘤坏死因子受体α(TNFRα)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达增强。从caspase-3免疫组化染色的结果可以看出阳性细胞均出现在AKI动物肝脏内。(3)电子显微镜观察发现AKI动物肝脏中确有细胞凋亡和副凋亡的表现。(4)缺血性与非缺血性AKI诱导肝细胞凋亡的表现相同。结论:AKI可引起肝细胞凋亡和副凋亡,其中经TNFRα启动的caspase依赖的细胞死亡构成了AKI引起的肝细胞凋亡。这种肝细胞凋亡是由肾功能损伤导致的血尿毒物质引起的。 展开更多
关键词 急性肾损伤 肝细胞 细胞凋亡 天冬蛋白酶依赖的细胞死亡
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法匹拉韦抗新型冠状病毒的机制研究进 展 被引量:3
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作者 阿热依·巴哈提 王均琪 +6 位作者 祝娜 白颖璐 曹靖宜 张明烁 张严 李志勇 黄秀兰 《医药导报》 CAS 北大核心 2022年第11期1651-1659,共9页
新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是一种由严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)所致的传染病,自2019年末以来在全球迅速传播。当前科学界正进行前所未有的努力,研究该病毒感染的潜在机制并提出合理的临床应用药物,以降低COVID-19发病... 新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是一种由严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)所致的传染病,自2019年末以来在全球迅速传播。当前科学界正进行前所未有的努力,研究该病毒感染的潜在机制并提出合理的临床应用药物,以降低COVID-19发病率。法匹拉韦(favipiravir)是一种RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)抑制剂,在中国被批准用于治疗COVID-19。该文概述法匹拉韦通过结合SARS-CoV-23种关键病毒酶RdRp、3-胰凝乳蛋白酶样半胱氨酸蛋白酶(3CLpro)和木瓜蛋白酶样蛋白酶(PLpro)抑制SARS-CoV-2的机制,并综述法匹拉韦与上述病毒蛋白酶的分子对接数据。 展开更多
关键词 法匹拉韦 新型冠状病毒肺炎 RNA依赖性RNA聚合酶 3-胰凝乳蛋白酶蛋白酶 木瓜蛋白酶蛋白酶
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CaMKⅡ对多囊卵巢综合征模型小鼠颗粒细胞中Caspase-3表达的影响 被引量:3
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作者 谢贤国 马亚博 +4 位作者 徐娅秀 张燕 杜长征 徐金瑞 杨易 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期968-974,共7页
目的:探讨钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在正常小鼠卵巢和多囊卵巢综合征(PCOS)小鼠卵巢组织中的差异表达,阐明CaMKⅡ对PCOS小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法:用蓖麻油溶解脱氢表雄酮(DHEA)皮下注射诱导PCOS小鼠模型(PCOS组),对照... 目的:探讨钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在正常小鼠卵巢和多囊卵巢综合征(PCOS)小鼠卵巢组织中的差异表达,阐明CaMKⅡ对PCOS小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法:用蓖麻油溶解脱氢表雄酮(DHEA)皮下注射诱导PCOS小鼠模型(PCOS组),对照组小鼠注射等体积蓖麻油,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测2组小鼠血清中睾酮水平,阴道涂片监测2组小鼠发情周期变化,HE染色观察2组小鼠卵巢组织病理形态表现,免疫荧光染色法检测2组小鼠卵巢组织中CaMKⅡ蛋白定位和荧光强度,Western blotting法检测2组小鼠卵巢组织中CaMKⅡ和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)蛋白表达水平。采用短发夹RNA (sh-RNA)-CaMKⅡ慢病毒转染人卵巢颗粒细胞(KGN细胞)建立稳转体系,分为空白对照组、 sh-CaMKⅡ-1组和sh-CaMKⅡ-2组,Western blotting法检测各组KGN细胞中CaMKⅡ和Caspase-3蛋白表达水平。结果:与对照组比较,PCOS组小鼠血清中总睾酮和游离睾酮水平明显升高(P<0.01),发情周期紊乱,停滞于发情中期,卵巢组织中出现颗粒细胞层数较少的空泡状卵泡,表明PCOS小鼠模型建立成功。CaMKⅡ蛋白在小鼠卵巢组织的卵母细胞、颗粒细胞和间质细胞中均有表达;与对照组比较,PCOS组小鼠卵巢组织中CaMKⅡ荧光强度和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与空白对照组比较,sh-CaMKⅡ-1和sh-CaMKⅡ-2组KGN细胞中CaMKⅡ蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:PCOS小鼠卵巢组织中CaMKⅡ蛋白表达水平降低诱导Caspase-3蛋白表达水平升高,进而促进颗粒细胞凋亡。 展开更多
关键词 蛋白依赖蛋白激酶Ⅱ 多囊卵巢综合征 动物模型 的天冬蛋白水解酶3
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