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钙磷脂结合蛋白Ⅱ在人肝细胞癌中的表达 被引量：1
1
作者 朱晓静 张建平 +6 位作者 刘悦芳 徐凛峰 张慧林 李玉华 陈汐敏 冯振卿 管晓虹 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期663-666,731,F0006,共6页
目的:应用抑制差减杂交技术(supressionsubtractivehybridization,SSH)结合cDNA芯片筛选人肝细胞癌中差异表达基因。进一步探讨所筛选出的钙磷脂结合蛋白(annexinⅡ)在肝细胞中的表达及作用。方法:以肝癌组织和非肿瘤肝组织进行SSH,构... 目的:应用抑制差减杂交技术(supressionsubtractivehybridization,SSH)结合cDNA芯片筛选人肝细胞癌中差异表达基因。进一步探讨所筛选出的钙磷脂结合蛋白(annexinⅡ)在肝细胞中的表达及作用。方法:以肝癌组织和非肿瘤肝组织进行SSH,构建正、反向差减杂交文库,差减片断的PCR产物制备cDNA芯片,筛选出肝癌组织中差异表达基因。进一步应用荧光实时定量技术验证芯片结果,免疫组化方法分析annexinⅡ在肝细胞癌和正常肝组织中的表达。结果:成功构建了肝细胞癌差减杂交文库。芯片结果显示annexinⅡ在肝细胞癌中高表达并经荧光实时定量技术证实。免疫组化结果表明annexinⅡ在肝细胞癌和癌旁肝硬化组织中高表达,在正常肝组织中不表达(P<0.05)。在低分化肝细胞癌中annexinⅡ的表达有增高趋势。结论:SSH方法构建的肝细胞癌差减杂交文库富含肝细胞癌差异表达基因。肝细胞癌中高表达基因annexinII可能与肝细胞的恶性转化,肝癌细胞的转移和侵袭能力有关。 展开更多
关键词 肝细胞癌 抑制差减杂交技术 CDNA芯片 钙磷脂结合蛋白 免疫组化
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人重组钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ在大肠杆菌中的高效表达、纯化及细胞凋亡检测 被引量：2
2
作者 狄春辉 施群 +4 位作者 张颖妹 赵辰 钟英成 黄大无 马大龙 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期167-169,共3页
目的 :为细胞凋亡研究提供快速可靠的实验方法。方法 :利用RT PCR技术从人外周血单核细胞系U937cDNA文库中扩增出编码钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ (AnnexinⅤ )cDNA ,并克隆到大肠杆菌表达载体中 ,在大肠杆菌中表达含凝血酶识别序列的MS2Ann... 目的 :为细胞凋亡研究提供快速可靠的实验方法。方法 :利用RT PCR技术从人外周血单核细胞系U937cDNA文库中扩增出编码钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ (AnnexinⅤ )cDNA ,并克隆到大肠杆菌表达载体中 ,在大肠杆菌中表达含凝血酶识别序列的MS2AnnexinⅤ融合蛋白。表达产物经凝血酶消化 ,可除去MS2细菌蛋白 ,再经离子交换层析纯化 ,可得成熟的AnnexinⅤ纯品 ,FITC标记后的AnnexinⅤ可用于细胞凋亡的检测。结果 :在大肠杆菌表达的人重组AnnexinⅤ占菌体蛋白的 5 6 % ,经纯化获得 99%纯度的非融合型AnnexinⅤ ,FITC标记的An nexinⅤ能有效地检测凋亡细胞。结论 :成功地建立了批量获取AnnexinⅤ的技术路线 。 展开更多
关键词 重组钙依赖性磷脂结合蛋白V 大肠杆菌 表达 纯化 细胞凋亡
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白细胞介素12诱导T细胞凋亡对Bcl-2表达和信号分子的影响 被引量：2
3
作者 郭秋野 范洪涛 +3 位作者 李雅兰 张宁 郭秀枝 邓列华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期180-185,共6页
目的 :了解和探讨白细胞介素 12 (IL - 12 )作用于T细胞 ,活化T细胞表面的IL - 12受体 β ,诱导T细胞凋亡对Bcl- 2表达和信号转导的作用。方法 :用AnnexinV流式细胞仪检测细胞凋亡率和半定量PCR的方法测定在不同抑制剂作用下对Bcl- 2信... 目的 :了解和探讨白细胞介素 12 (IL - 12 )作用于T细胞 ,活化T细胞表面的IL - 12受体 β ,诱导T细胞凋亡对Bcl- 2表达和信号转导的作用。方法 :用AnnexinV流式细胞仪检测细胞凋亡率和半定量PCR的方法测定在不同抑制剂作用下对Bcl- 2信号转导表达的影响。结果 :IL - 12在高浓度下诱导人的白血病T细胞株TIB- 15 2和人的淋巴瘤T细胞株HTB - 176及正常人T细胞的凋亡。在IL - 12处理 6h后Bcl- 2的表达明显升高 ,表达的高峰值在 2 4h ,Bcl- 2的升高不能抑制和阻碍T细胞的凋亡 ;IL - 12诱导上调T细胞Bcl- 2mRNA表达。HA10 0能促进T细胞的凋亡 ,PKC是IL - 12诱导T细胞凋亡信号转导的负性调节因子 ;AG4 90不抑制IL - 12上调的Bcl- 2mRNA表达作用 ,AG4 90阻断的Jak2通路不参与IL - 12诱导T细胞mRNA表达的信号转导及其调节 ;HA10 0 4不影响T细胞表达mRNA ,PKA通路不影响IL - 12诱导T细胞表达Bcl- 2mRNA的信号传递。结论 :Bcl- 2是凋亡介导分子之一 ,但是Bcl- 2不能阻断Fas-FasL介导的T细胞凋亡。 展开更多
关键词 白细胞介素12 细胞凋亡 钙磷脂结合蛋白V 信号转导
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