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芍药钙依赖性蛋白激酶基因PlCDPK24的鉴定及表达分析
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作者 贺丹 尤啸龙 +5 位作者 周平西 华超 郭浩楠 张明星 王警琨 何松林 《河南农业大学学报》 北大核心 2025年第4期602-613,共12页
【目的】在芍药中克隆钙离子(Ca^(2+))响应基因PlCDPK24并进行表达分析,为探究CDPK基因调控芍药远缘杂交花粉管生长的机制奠定基础。【方法】利用已有芍药转录组RNA-seq数据库对钙依赖性蛋白基因家族进行鉴定,以芍药‘粉玉奴’柱头为试... 【目的】在芍药中克隆钙离子(Ca^(2+))响应基因PlCDPK24并进行表达分析,为探究CDPK基因调控芍药远缘杂交花粉管生长的机制奠定基础。【方法】利用已有芍药转录组RNA-seq数据库对钙依赖性蛋白基因家族进行鉴定,以芍药‘粉玉奴’柱头为试验材料克隆PlCDPK24基因,对其基因结构及蛋白的理化性质进行生信分析;通过亚细胞定位确定其在细胞内作用的位置;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析PlCDPK24在芍药柱头内花粉管生长过程中的表达模式,及其对Ca^(2+)以及Ca^(2+)抑制剂乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)的响应。【结果】鉴定筛选出15个在杂交不亲和组合中高表达的PlCDPK基因,基因编码区均含有STKc-CAMK结构域、EF-hand手性结构域以及motif 1~10,其中芍药PlCDPK24与在拟南芥中已报道花粉管生长相关AtCDPK24同源,其基因序列完整,长1599 bp,编码532个氨基酸,理论等电点为5.69,是一种带负电荷的亲水性蛋白。PlCDPK24定位在细胞核,且与牡丹PsCDPK24蛋白同源性最高。实时荧光定量结果表明,相比于芍药其他部位,PlCDPK24在芍药柱头高表达;相比于自交组合,PlCDPK24在杂交后期(24和36 h)表达量显著上调,显著高于自交后期的表达;Ca^(2+)以及Ca^(2+)抑制剂EGTA处理后的杂交柱头,PlCDPK24的表达量相对于自交柱头显著上调,Ca^(2+)及EGTA处理均会不同程度降低PlCDPK24的表达量。【结论】PlCDPK24可能参与调控了花粉在柱头的萌发和花粉管的生长过程。 展开更多
关键词 芍药 远缘杂交不亲和 依赖蛋白激酶 基因克隆 花粉生长
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小麦钙依赖蛋白激酶基因TaCDPK17的克隆及其抗逆功能初步分析 被引量:2
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作者 甘露 谢美娟 +5 位作者 卢振华 李明 丁博 邱丽娜 谢晓东 王俊斌 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第5期1-8,共8页
为探究钙依赖蛋白激酶(CDPK)在小麦生长和逆境应答中的作用,从普通小麦中克隆了TaCDPK17基因,并对其进行了序列结构、表达模式和抗逆功能初步分析。结果表明,TaCDPK17基因编码区长1701 bp,编码566个氨基酸,具有CDPK家族的典型结构特征,... 为探究钙依赖蛋白激酶(CDPK)在小麦生长和逆境应答中的作用,从普通小麦中克隆了TaCDPK17基因,并对其进行了序列结构、表达模式和抗逆功能初步分析。结果表明,TaCDPK17基因编码区长1701 bp,编码566个氨基酸,具有CDPK家族的典型结构特征,包括1个保守的丝氨酸/苏氨酸激酶结构域和4个EF手型结构域。对TaCDPK17与其他12种植物的CDPK17进行进化树分析表明,TaCDPK17与禾本科作物,特别是节节麦、大麦的CDPK17序列有较高同源性。TaCDPK17基因启动子区域富含与激素调控、光照响应,以及非生物应答胁迫相关的顺式调控元件,其中,脱落酸(ABA)响应元件(ABRE)和茉莉酸甲酯响应元件(CGTCA)数量较多。基于实时荧光定量PCR的表达分析结果显示,TaCDPK17受100μmol/L ABA、100μmol/L茉莉酸甲酯、20%PEG6000和250 mmol/L NaCl诱导后,表达量有不同程度升高。在2μmol/L ABA和100 mmol/L NaCl胁迫处理条件下,过表达TaCDPK17的拟南芥种子萌发率显著高于野生型对照。同时,过表达TaCDPK17缓解了ABA或渗透胁迫处理对幼苗根生长的抑制作用。在气孔关闭过程中,过表达TaCDPK17的转基因植物对ABA更敏感,与野生型植物相比,表现出更强的气孔关闭趋势。这些结果表明,TaCDPK17在小麦逆境胁迫和激素信号应答中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 小麦 依赖蛋白激酶 基因克隆 表达分析 抗逆
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甘蔗钙依赖蛋白激酶基因克隆与序列分析 被引量:3
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作者 曹辉庆 蒋胜理 +7 位作者 黄诚梅 邓智年 吴凯朝 徐林 陆珍 陈丽君 李秋凤 魏源文 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期574-580,共7页
【目的】克隆甘蔗钙依赖蛋白激酶基因(ScCDPK1),为其功能解析和育种利用打下基础。【方法】根据甘蔗cDNA文库中的CDPK基因序列信息设计引物,利用RT-PCR克隆ScCDPK1基因,并采用在线生物信息学分析软件对其推导蛋白的理化性质、跨膜结构... 【目的】克隆甘蔗钙依赖蛋白激酶基因(ScCDPK1),为其功能解析和育种利用打下基础。【方法】根据甘蔗cDNA文库中的CDPK基因序列信息设计引物,利用RT-PCR克隆ScCDPK1基因,并采用在线生物信息学分析软件对其推导蛋白的理化性质、跨膜结构、信号肽及保守结构域等进行预测分析。【结果】克隆获得的ScCDPK1基因完整编码区大小1650 bp,编码549个氨基酸,相对分子量61.971 kD,等电点(pI)6.78,不稳定指数35.63。同源性和遗传进化树分析结果显示,ScCDPK1基因与小麦TaCPK7基因亲缘关系最近,同源性达88%;ScCDPK1蛋白与其他已知CDPK蛋白一致,具有CDPKs家族特有的4个保守区域(可变区、蛋白激酶区、自抑制区和钙离子结合区),其二级结构主要由α螺旋(42.80%)和无规则卷曲(32.97%)构成;蛋白功能分类预测结果显示,ScCDPK1蛋白是一种阳离子通道蛋白,可能参与植物胁迫应答、信号转导和翻译调控等生物反应。【结论】ScCDPK1基因编码的蛋白与其他已知CDPK蛋白一致,具有CDPKs家族特有的4个保守区域,是一种阳离子通道蛋白。 展开更多
关键词 甘蔗 依赖蛋白激酶基因(cdpk) 克隆 序列分析 生物信息学预测
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油菜钙依赖蛋白激酶BnCDPK1的克隆和表达分析 被引量:10
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作者 张秋平 文李 +4 位作者 王峰 廖志强 李慧 刘睿洋 官春云 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1320-1326,共7页
根据转录组测序获得的钙依赖蛋白激酶基因的EST序列设计特异引物,利用RT-PCR和RACE技术从油菜中克隆获得Bn CDPK1基因全长序列,NCBI登录号为KF740477,其c DNA和g DNA全长分别为2115 bp和2857 bp,含有11个内含子和12个外显子。生物信息... 根据转录组测序获得的钙依赖蛋白激酶基因的EST序列设计特异引物,利用RT-PCR和RACE技术从油菜中克隆获得Bn CDPK1基因全长序列,NCBI登录号为KF740477,其c DNA和g DNA全长分别为2115 bp和2857 bp,含有11个内含子和12个外显子。生物信息学分析表明其开放阅读框为1581 bp,编码527个氨基酸,具有CDPKs家族典型的特征,含有1个激酶区域和4个钙离子手型结构域,与拟南芥At CDPK28同源性最高,属于第Ⅳ亚家族。Bn CDPK1在油菜的根、茎、叶、花、种子中均有表达,但表达丰度存在差异,叶片中表达量最高,其次为茎、根和种子,花中的表达量最低;在高抗和高感油菜品种中,菌核菌胁迫均能够诱导Bn CDPK1上调表达,但是高抗品种比高感品种反应更迅速,表达量更高。接种前、接种后12 h、接种后24 h,高抗品种的表达量相比高感品种分别提高1.4倍、4倍和3倍,推测其可能参与油菜的生长发育以及油菜对菌核菌侵染的应答和防御反应。 展开更多
关键词 油菜 依赖蛋白激酶 基因克隆 基因表达 抗病
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植物中的钙依赖蛋白激酶(CDPK)的结构特征和功能研究进展 被引量:12
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作者 姜珊珊 张丹 +2 位作者 孔祥培 周严 李德全 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期12-19,共8页
Ca2+是植物中重要的第二信使,细胞中的钙信号经钙传感蛋白(CaMs、CaMLs、CBLs和CDPKs)传递到下游组分(转录因子,NADPH氧化酶基因等),引起相关基因的表达,使植物对生物或非生物胁迫作出响应。钙依赖蛋白激酶(CDPKs)是在植物及原生动物中... Ca2+是植物中重要的第二信使,细胞中的钙信号经钙传感蛋白(CaMs、CaMLs、CBLs和CDPKs)传递到下游组分(转录因子,NADPH氧化酶基因等),引起相关基因的表达,使植物对生物或非生物胁迫作出响应。钙依赖蛋白激酶(CDPKs)是在植物及原生动物中发现的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在Ca2+介导的信号途径中起重要作用。CDPKs是由多基因家族编码,分属4个亚家族,各亚族成员具有相同或不同的表达模式、亚细胞定位、底物特异性、功能各异或冗余等特性。综述CDPKs的结构特征、表达模式、定位、调控、体内外底物、抑制剂,以及在响应生物及非生物胁迫中的作用等方面的研究进展,旨在探讨CDPKs的功能及其调控机制。 展开更多
关键词 依赖蛋白激酶(cdpks) 结构特征 调控机制 生物学功能
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茶树花发育相关的一个钙依赖蛋白激酶基因的克隆与表达分析 被引量:5
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作者 陈暄 汤茶琴 +4 位作者 邹中伟 杨亦扬 房婉萍 王玉花 黎星辉 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期47-52,共6页
应用cDNA-AFLP(Amplified Fragment Length Polymorphism)技术分析了结实率差异显著的龙井43和大叶乌龙两个茶树品种在花蕾发育过程中基因表达的差异。从获得的差异图谱中,克隆得到一个与茶树花发育相关的钙依赖蛋白激酶基因片段,然后用... 应用cDNA-AFLP(Amplified Fragment Length Polymorphism)技术分析了结实率差异显著的龙井43和大叶乌龙两个茶树品种在花蕾发育过程中基因表达的差异。从获得的差异图谱中,克隆得到一个与茶树花发育相关的钙依赖蛋白激酶基因片段,然后用RCAE方法扩增获得其cDNA全长序列,命名为茶树TCK(Camellia sinensis calcium-dependent protein kinase)基因,GenBank登录号EU732607。该基因cDNA序列全长2281bp,编码760个氨基酸。用RT-PCR方法进一步研究该基因的功能,检测其表达特异性,结果表明该基因只在茶树花蕾发育后期特异表达,在叶、花蕾发育早期均无表达,提示TCK基因可能在茶树花发育过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 茶树 花发育 依赖蛋白激酶基因 克隆 特异表达
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钙依赖型蛋白激酶(CDPKs)在植物中的生理功能 被引量:12
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作者 倪天华 魏幼璋 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2002年第6期241-246,共6页
 简要介绍了钙依赖型蛋白激酶(Calcium-dependentProteinKinases,CDPKs)的结构特点及家族成员,重点对CDPKs在植物环境胁迫、防御反应、生长发育、离子通道调节和激素信号等方面的生理功能研究进展进行了综述和讨论,并展望了该领域的研...  简要介绍了钙依赖型蛋白激酶(Calcium-dependentProteinKinases,CDPKs)的结构特点及家族成员,重点对CDPKs在植物环境胁迫、防御反应、生长发育、离子通道调节和激素信号等方面的生理功能研究进展进行了综述和讨论,并展望了该领域的研究前景。 展开更多
关键词 依赖蛋白激酶 生理功能 植物 cdpkS 激素信号
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小麦应答低磷的钙依赖蛋白激酶基因TaCPK1A和TaCPK10的克隆和表达 被引量:3
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作者 路文静 李瑞娟 +3 位作者 李小娟 郭程瑾 谷俊涛 肖凯 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1749-1754,共6页
采用构建富集磷胁迫特异表达基因cDNA差减文库、序列分析和cDNA-AFLP技术,鉴定了2个应答低磷胁迫的钙依赖蛋白激酶(CDPK)基因的表达序列标签。克隆、测序和比对结果表明,上述基因分别为TaCPK1A和TaCPK10。其cDNA长度分别为2129bp和1696... 采用构建富集磷胁迫特异表达基因cDNA差减文库、序列分析和cDNA-AFLP技术,鉴定了2个应答低磷胁迫的钙依赖蛋白激酶(CDPK)基因的表达序列标签。克隆、测序和比对结果表明,上述基因分别为TaCPK1A和TaCPK10。其cDNA长度分别为2129bp和1696bp,开放阅读框分别为1599bp和1281bp,分别编码532和426个氨基酸;具有CDPK的典型结构特征。系统进化分析表明,上述基因的核苷酸序列同源性低,分别来自不同的祖先。在对低磷胁迫的响应上,TaCPK1A在磷胁迫1~24h范围内根系内的表达水平不断增强,叶内表达水平在1h内明显被诱导,以后保持稳定;TaCPK10在相应磷胁迫时间范围根叶内的表达水平均呈低—高—低变化,在磷胁迫1h的表达被诱导,以后又逐渐降至胁迫前水平。TaCPK1A和TaCPK10对氮、钾胁迫没有应答响应。结果表明,CDPK在介导小麦低磷胁迫的信号转导中具有重要作用,小麦中存在两种或多种CDPK介导的磷酸化过程参与低磷信号的转导。 展开更多
关键词 小麦(Triticum AESTIVUM L.) 依赖蛋白激酶 克隆 低磷胁迫 基因表达
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苹果钙依赖型蛋白激酶基因家族的进化研究 被引量:4
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作者 陈飞 尹欢 +1 位作者 梁英海 蔡斌 《江西农业学报》 CAS 2013年第9期15-20,共6页
在全基因组水平挖掘了26个苹果的CDPK基因,并通过基因结构和结构域组织的比较得到各成员之间的异同点,再通过蛋白质三级结构的分析,获得了苹果CDPK在重要的关键位点的突变,而这可能引起结构的自抑制和激活的重大差别。结合多个物种CDPK... 在全基因组水平挖掘了26个苹果的CDPK基因,并通过基因结构和结构域组织的比较得到各成员之间的异同点,再通过蛋白质三级结构的分析,获得了苹果CDPK在重要的关键位点的突变,而这可能引起结构的自抑制和激活的重大差别。结合多个物种CDPK的挖掘,并与苹果CDPK各成员建立的系统发育树进行分析,得到了苹果26个CDPK的起源和21次扩增历史。借助于苹果CDPK表达的EST数据了解了苹果CDPK的初步表达情况,这些完善的苹果CDPK成员间复杂的进化历史对于开展后续验证成员间彼此的功能联系以及基因的利用奠定了基础。 展开更多
关键词 苹果 依赖蛋白激酶 进化历史 基因复制
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玉米钙依赖蛋白激酶全基因组鉴定及抗旱表达分析 被引量:1
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作者 陈果 郝晓燕 +3 位作者 高升旗 胡文冉 赵准 黄全生 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期857-864,共8页
【目的】分析研究玉米钙依赖蛋白激酶全基因组鉴定及抗旱表达。【方法】使用NCBI Blast、DNAMAN和MotifScan等程序分析玉米钙依赖蛋白激酶CDPK的蛋白结构域和系统发育。采用Real-time RT-PCR方法分析CDPK基因在干旱胁迫处理玉米幼苗中... 【目的】分析研究玉米钙依赖蛋白激酶全基因组鉴定及抗旱表达。【方法】使用NCBI Blast、DNAMAN和MotifScan等程序分析玉米钙依赖蛋白激酶CDPK的蛋白结构域和系统发育。采用Real-time RT-PCR方法分析CDPK基因在干旱胁迫处理玉米幼苗中的表达,评价CDPK基因对玉米干旱胁迫反应能力。【结果】鉴定出了在玉米中含有39个CDPK基因。将CDPK基因分为4个组。每个群体中的成员有共同的蛋白质基序和外显子及内含子结构,共同的进化起源。39个玉米CDPK基因根据它们的系统发育关系分组,并锚定在特定的玉米染色体上。多数CDPK基因在玉米干旱胁迫中的表达水平发生改变,CDPK基因参与对干旱胁迫的响应。【结论】从玉米基因组数据库中鉴定出了39个CDPK基因,大多数玉米CDPK基因在不同组织和不同发育阶段表现出不同的表达水平,CDPK基因在玉米发育中发挥不同的作用。多数CDPK基因在干旱胁迫下的表达量均发生变化。 展开更多
关键词 依赖蛋白激酶 基因组鉴定 干旱胁迫 表达分析 玉米
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miRNA-219介导氯胺酮引起的N2a细胞中精神分裂症断裂基因1及钙/钙调素依赖性蛋白激酶2γ的变化 被引量:1
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作者 杨春 石金云 +4 位作者 王楠 李晓敏 周志强 杨建军 徐建国 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1097-1099,共3页
目的观察miRNA-219介导氯胺酮引起的N2a细胞中精神分裂症断裂基因1(DISC1)及钙/钙调素依赖性蛋白激酶2γ(CaMK2γ)的变化,探讨氯胺酮诱发精神分裂症样不良反应的相关机制。方法采用随机数字表法将N2a细胞分为三组,分别加入DMEM培养液(C... 目的观察miRNA-219介导氯胺酮引起的N2a细胞中精神分裂症断裂基因1(DISC1)及钙/钙调素依赖性蛋白激酶2γ(CaMK2γ)的变化,探讨氯胺酮诱发精神分裂症样不良反应的相关机制。方法采用随机数字表法将N2a细胞分为三组,分别加入DMEM培养液(C组),1μmol/L氯胺酮(K组),1μmol/L氯胺酮+anti-miRNA-219转染(KA组)培养。定量分析miRNA-219,检测DISC1和CaMK2γ。结果与C组相比,K组miRNA-219及DISC1表达显著下调,CaMK2γ显著上调(P<0.01);与K组相比,KA组miRNA-219及DISC1表达显著上调,CaMK2γ显著下调(P<0.01)。结论 miRNA-219下调可介导氯胺酮引起的N2a细胞中DISC1下调及CaMK2γ上调。 展开更多
关键词 氯胺酮 miRNA-219 精神分裂症断裂基因1 调素依赖蛋白激酶 精神 分裂症
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蓖麻钙依赖蛋白激酶29基因克隆与表达分析 被引量:1
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作者 王莹 王晓宇 +4 位作者 孙德慧 霍红雁 刘海臣 徐惠 张继星 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期85-92,共8页
为探讨蓖麻钙依赖蛋白激酶29基因(RcCDPK29)在蓖麻耐盐中的作用,以蓖麻叶片为材料,设计特异性引物,克隆蓖麻钙依赖蛋白激酶29基因(RcCDPK29),并对所得序列进行生物信息学分析。结果表明,蓖麻钙依赖蛋白激酶29基因(RcCDPK29)序列全长1590... 为探讨蓖麻钙依赖蛋白激酶29基因(RcCDPK29)在蓖麻耐盐中的作用,以蓖麻叶片为材料,设计特异性引物,克隆蓖麻钙依赖蛋白激酶29基因(RcCDPK29),并对所得序列进行生物信息学分析。结果表明,蓖麻钙依赖蛋白激酶29基因(RcCDPK29)序列全长1590 bp;编码528个氨基酸;蛋白分子量为59.74 ku;等电点(pI)值6.21;是典型的非跨膜蛋白;亲水性数值为负值,属于亲水性蛋白;RcCDPK29蛋白α-螺旋占比最高有228个;RcCDPK29与拟南芥CDPK(SMTL ID:3q5i.1)相似度为40.41%,具有较高可信度(>30%)。将木薯、麻枫树、巴西橡胶树、柑橘、石榴、毛果杨与蓖麻RcCDPK29氨基酸序列进行同源性比对。其中,与麻枫树的同源性最高,为82.29%。RcCDPK29蛋白包含1个Ser/Thr蛋白激酶催化结构域和4个与Ca^(2+)结合的EF-hand型结构域。通过qRT-PCR技术,分析RcCDPK29在不同水平盐胁迫下蓖麻不同组织中的表达,结果表明,RcCDPK29基因主要在茎中表达,盐处理12 h表达量最高。随着盐处理时间的延长,RcCDPK29基因根的表达量逐渐下降,分别在2,8,24 h达到最低,与0 h差异显著;叶的表达量在2 h的表达量最低且与0 h相比差异显著。根据RcCDPK29全长设计带有SmaⅠ和XbaⅠ酶切位点的引物扩增出序列全长,用SmaⅠ和XbaⅠ进行双酶切后与表达载体pCG-3300连接。成功构建了CRcCDPK29的表达载体。因此,RcCDPK29在蓖麻受到盐胁迫时起重要作用。 展开更多
关键词 蓖麻 依赖蛋白激酶 基因克隆 生物信息学分析 表达载体
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烟草重要基因篇:4.烟草钙依赖蛋白激酶基因 被引量:1
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作者 刘贯山 《中国烟草科学》 CSCD 2014年第4期109-111,共3页
蛋白激酶(protein kinase)又称蛋白质磷酸化酶(protein phosphakinase),是一类催化蛋白质磷酸化反应的酶;它能把腺苷三磷酸(ATP)上的γ-磷酸转秲到蛋白质分子的氨基酸残基上。钙依赖蛋白激酶(calcium-dependent protein kinase... 蛋白激酶(protein kinase)又称蛋白质磷酸化酶(protein phosphakinase),是一类催化蛋白质磷酸化反应的酶;它能把腺苷三磷酸(ATP)上的γ-磷酸转秲到蛋白质分子的氨基酸残基上。钙依赖蛋白激酶(calcium-dependent protein kinase, CDPK)存在于植物、藻类及部分原生生物中,特别是在植物体内分布广泛,但在细菌、真菌、酵母、线虫和动物中尚未収现。CDPK在植物钙信号转导迆程中収挥着非常重要的作用。在植物体内,除了参与碳氮代谢、离子及水分跨膜运辒、细胞骨架调节、气孔运动调节、生长収育调节以外,CDPK广泛地参与胁迫应答反应[1]。 展开更多
关键词 蛋白激酶基因 依赖蛋白激酶 烟草 kinase 蛋白质分子 植物体内 cdpk 磷酸化酶
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钙依赖蛋白激酶CPK17在花粉管生长中的功能分析
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作者 周利明 任中慧 +1 位作者 刘格 房玮 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第S1期135-142,共8页
钙依赖蛋白激酶(CPK)是一类响应钙信号的蛋白激酶,参与调节植物繁殖中钙信号和细胞骨架精密控制的花粉管极性生长。为揭示拟南芥CPK在花粉管极性生长中的功能,利用生物信息学方法分析CPK家族成员的表达模式和进化关系,构建持续激活(CA)... 钙依赖蛋白激酶(CPK)是一类响应钙信号的蛋白激酶,参与调节植物繁殖中钙信号和细胞骨架精密控制的花粉管极性生长。为揭示拟南芥CPK在花粉管极性生长中的功能,利用生物信息学方法分析CPK家族成员的表达模式和进化关系,构建持续激活(CA)和显性抑制(DN)型CPK17突变体。基于基因枪技术,观察CA-CPK17和DN-CPK17过表达花粉管的表型变化,比较高钙和低钙胁迫对CPK17和CA-CPK17过表达花粉管生长的影响,分析CPK17与同源蛋白CPK34的共同表达情况。另外预测CPK17的互作蛋白网络,并对部分互作蛋白进行验证。结果显示,拟南芥中有7个花粉特异表达的CPKs,其中CPK17和CPK34具有高度的相似性(93%),并在成熟花粉中高表达,在其他组织中低表达或不表达。过量表达CPK17对花粉管生长没有显著影响,而CA-CPK17则导致花粉管去极化生长和顶端肿胀,DN-CPK17无明显效果。过量表达CPK34也引起类似的花粉管生长缺陷,而同时过表达CPK17和CPK34则使缺陷加重。钙胁迫试验显示,CPK17过表达花粉管对低钙条件不敏感,而对高钙条件敏感。而缺乏调控域的CA-CPK17过表达花粉管对高钙和低钙条件均不敏感。预测的CPK17互作蛋白主要是ROP负调节因子,但酵母双杂交试验未能证实存在互作关系。这些结果表明,CPK17的C端调控域在钙信号的响应中起重要作用。CPK17和CPK34在花粉管生长中具有协同作用,可能通过调控钙离子的内流,进而影响胞内的钙离子梯度。 展开更多
关键词 花粉管 极性生长 基因 依赖蛋白激酶 信号途径
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钙依赖蛋白激酶基因表达载体的构建及其对拟南芥的遗传转化
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作者 段金秀 郭丽 +3 位作者 李钢 徐柱文 伏显华 曹致中 《草业科学》 CAS CSCD 2007年第3期51-55,共5页
将钙依赖蛋白激酶(CDPK)基因插入到植物表达载体pBI121上,构建成特异性表达载体pBI121-CDPK,并采用农杆菌介导法将其转化进入拟南芥Arabidopsis thaliana Columbia生态型品种中,获得了卡那霉素筛选的抗性植株,通过PCR扩增验证,拟南芥基... 将钙依赖蛋白激酶(CDPK)基因插入到植物表达载体pBI121上,构建成特异性表达载体pBI121-CDPK,并采用农杆菌介导法将其转化进入拟南芥Arabidopsis thaliana Columbia生态型品种中,获得了卡那霉素筛选的抗性植株,通过PCR扩增验证,拟南芥基因组中含有此抗性基因。 展开更多
关键词 依赖蛋白激酶(cdpk) 表达载体构建 拟南芥 遗传转化
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钙依赖蛋白激酶(CDPKs)介导植物信号转导的分子基础 被引量:9
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作者 王娇娇 韩胜芳 +3 位作者 李小娟 谷俊涛 路文静 肖凯 《草业学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期241-250,共10页
钙依赖蛋白激酶(CDPKs)是生长发育信号和逆境信号诱发的钙信号的重要信号传递体,在调控植物信号转导途径中下游基因的表达、生化代谢、离子和水分跨膜运输等生物学过程中具有重要作用。本研究对植物种属CDPK的结构特点、CDPK在植株体内... 钙依赖蛋白激酶(CDPKs)是生长发育信号和逆境信号诱发的钙信号的重要信号传递体,在调控植物信号转导途径中下游基因的表达、生化代谢、离子和水分跨膜运输等生物学过程中具有重要作用。本研究对植物种属CDPK的结构特点、CDPK在植株体内的分布特征、CDPK生理生化特性及生化反应调控特性、CDPK在信号转导中的作用,以及CDPK在植株体内的生物学功能进行了概述。旨在为今后牧草作物CDPK的鉴定及其介导的信号转导机制的研究提供参考依据。 展开更多
关键词 依赖蛋白激酶(cdpks) 结构 信号 信号转导 生物学功能
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陆地棉钙依赖蛋白激酶GhCDPK28-A10参与抗黄萎病的功能分析 被引量:3
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作者 邵武奎 赵准 +6 位作者 胡文冉 郝晓燕 高升旗 李建平 陈果 刘晓东 黄全生 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期17-28,共12页
【目的】解析GhCDPK28-A10在棉花黄萎病反应中的作用机制,并为棉花抗病育种提供基因资源。【方法】从棉花基因组数据库获得Gh CDPK28-A10基因同源序列,进行生物信息学分析。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative poly... 【目的】解析GhCDPK28-A10在棉花黄萎病反应中的作用机制,并为棉花抗病育种提供基因资源。【方法】从棉花基因组数据库获得Gh CDPK28-A10基因同源序列,进行生物信息学分析。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检测在经大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)、茉莉酸甲酯(methyl jasminate,MeJA)、水杨酸(salicylic acid,SA)或H_(2)O_(2)处理的棉株中GhCDPK28-A10基因的表达量变化。通过病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术验证GhCDPK28-A10在棉花抗黄萎病中的作用。【结果】进化树和基因结构分析表明,陆地棉中GhCDPK28-A10的6个同源蛋白具有相似数量的基序和CDPK家族典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶结构域;启动子区域的序列分析发现GhCDPK28-A10包含响应茉莉酸(jasmonic acid,JA)的顺式作用元件。组织特异性表达分析表明GhCDPK28-A10在根、茎和真叶中均表达,且在真叶中表达水平最高。在大丽轮枝菌、MeJA和H_(2)O_(2)胁迫下,GhCDPK28-A10的表达量显著升高。VIGS沉默Gh CDPK28-A10的棉株中抗病相关基因PR1、NPR1、PR4表达增强;JA合成负调控基因JAZ1表达量降低,说明随着CDPK28-A10表达水平的降低,JAZ1对JA合成的抑制作用减弱,活性氧富集,进而增强棉株的黄萎病抗性。【结论】GhCDPK28-A10通过调控防御相关基因的表达,负向调控棉花对黄萎病的抗性反应,是提高棉花黄萎病抗性的候选基因。 展开更多
关键词 棉花 黄萎病 依赖蛋白激酶 抗病基因 病毒诱导的基因沉默
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一种新的钙依赖性的蛋白激酶基因CP4的克隆及其表达研究
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作者 王世峰 罗松 +5 位作者 林海燕 赵晖 梁华 齐建国 王跃 王永潮 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第10期39-44,共6页
在利用人ACA (Anti Centromere/KinetochoreAutoantibody)血清研究拟南芥ACA相关蛋白的过程中克隆了钙依赖性的蛋白激酶基因家族的一个不典型基因 ,称为CP4 ,GenBank注册号为AF130 2 5 2。Southern杂交结果表明 ,拟南芥基因组中至少存... 在利用人ACA (Anti Centromere/KinetochoreAutoantibody)血清研究拟南芥ACA相关蛋白的过程中克隆了钙依赖性的蛋白激酶基因家族的一个不典型基因 ,称为CP4 ,GenBank注册号为AF130 2 5 2。Southern杂交结果表明 ,拟南芥基因组中至少存在两种以上等位形式的CP4。原位杂交结果表明 ,CP4mRNA在拟南芥的花和根中高表达 ,在果实和叶片中没有表达。此外还构建了CP4的高效表达载体 ,为进一步研究CP4的功能打下了基础。 展开更多
关键词 CP4 cdpk 拟南芥基因 蛋白激酶基因 依赖 血清 研究 克隆
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植物中钙依赖蛋白激酶(CDPK)的研究进展 被引量:1
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作者 李苗苗 张蕾 《农业开发与装备》 2016年第7期33-33,共1页
Ca2+是植物中重要的第二信使,它与钙传感蛋白结合,将钙信号向下游传递并级联放大,从而调控植物的生长发育以及免疫反应和胁迫响应。钙依赖蛋白激酶(CDPKs)是典型的Ser/Thr蛋白激酶,在Ca2+介导的信号转导中起重要作用。
关键词 信号 依赖蛋白激酶(cdpks) 信号转导 生物学功能
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柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3在293T细胞中的表达研究 被引量:3
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作者 王晔 韩红玉 +6 位作者 董辉 姜连连 赵其平 朱顺海 薛璞 舒凡帆 黄兵 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第6期33-38,共6页
为构建柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3(Eimeria tenella calcium-dependent protein kinases 3,EtCDPK3)基因的重组质粒pCAGGS-EtCDPK3,并转染293T细胞进行表达,以柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA为模板,经PCR扩增其含完整开放阅读框的序... 为构建柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3(Eimeria tenella calcium-dependent protein kinases 3,EtCDPK3)基因的重组质粒pCAGGS-EtCDPK3,并转染293T细胞进行表达,以柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA为模板,经PCR扩增其含完整开放阅读框的序列,将其克隆至pGEM-T easy载体,构建pGEM-Teasy-EtCDPK3重组质粒,双酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建真核重组表达质粒pCAGGS-EtCDPK3。该重组质粒经酶切和测序鉴定正确后转染293T细胞进行表达,分别用免疫印迹和间接免疫荧光鉴定EtCDPK3基因的表达情况。结果显示所构建的真核重组表达质粒pCAGGSEtCDPK3经过双酶切鉴定,可见1条大小约为1302 bp的目的条带,测序结果与实验室已获得的EtCDPK3序列完全一致;Western blot结果可见大小约为49 kDa的目的蛋白条带,间接免疫荧光实验可以检测到红色荧光。这些研究结果表明已成功构建了EtCDPK3的真核重组表达质粒pCAGGS-EtCDPK3,并在真核细胞中获得表达,为深入研究EtCDPK3的功能和制备DNA疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 依赖蛋白激酶3基因 293T细胞 真核表达
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