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钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ质粒的构建和表达及其与Ca_(V)1.2通道结合的鉴定
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作者 王红梅 王祥卉 +4 位作者 张文竹 何蕊 廖天佐 高青华 郝丽英 《中国医科大学学报》 北大核心 2025年第1期1-4,11,共5页
目的构建钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)长片段的融合蛋白质粒,表达、提取、纯化,并鉴定其与Ca_(V)1.2通道蛋白的结合。方法将提取的pGEX-6p-1/CaMKⅡ长片段质粒转化到原核大肠杆菌BL21感受态细胞,摇床培养箱中培养12 h,添加异丙... 目的构建钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)长片段的融合蛋白质粒,表达、提取、纯化,并鉴定其与Ca_(V)1.2通道蛋白的结合。方法将提取的pGEX-6p-1/CaMKⅡ长片段质粒转化到原核大肠杆菌BL21感受态细胞,摇床培养箱中培养12 h,添加异丙基-β-D-硫代半乳糖苷,促进GST融合蛋白的表达。采用DTT联合超声破碎法,谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B(GS-4B)分离、纯化GST-CaMKⅡ长片段后,经过PreScission蛋白酶处理,切除GST标签,得到CaMKⅡ长片段蛋白。采用15%SDS-PAGE鉴定CaMKⅡ长片段蛋白的分子量和相对纯度;采用Bradford方法测定纯化后蛋白的浓度;采用pull-down结合Western blotting鉴定其与Ca_(V)1.2通道蛋白的结合能力。结果测序结果表明,CaMKⅡ长片段构建成功。通过DTT联合超声破碎法,得到了较高纯度和浓度的长片段CaMKⅡ蛋白,并能够与心肌Ca_(V)1.2钙通道末端CT1蛋白结合。结论本研究成功构建了CaMKⅡ长片段钙调蛋白激酶融合蛋白质粒,提取、纯化了能够与Ca_(V)1.2通道蛋白结合并具有生物活性的CaMKⅡ长片段蛋白,为深入研究CaMKⅡ蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 钙/蛋白依赖性蛋白激酶 质粒构建 分离 纯化 pull-down
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芍药钙依赖性蛋白激酶基因PlCDPK24的鉴定及表达分析
2
作者 贺丹 尤啸龙 +5 位作者 周平西 华超 郭浩楠 张明星 王警琨 何松林 《河南农业大学学报》 北大核心 2025年第4期602-613,共12页
【目的】在芍药中克隆钙离子(Ca^(2+))响应基因PlCDPK24并进行表达分析,为探究CDPK基因调控芍药远缘杂交花粉管生长的机制奠定基础。【方法】利用已有芍药转录组RNA-seq数据库对钙依赖性蛋白基因家族进行鉴定,以芍药‘粉玉奴’柱头为试... 【目的】在芍药中克隆钙离子(Ca^(2+))响应基因PlCDPK24并进行表达分析,为探究CDPK基因调控芍药远缘杂交花粉管生长的机制奠定基础。【方法】利用已有芍药转录组RNA-seq数据库对钙依赖性蛋白基因家族进行鉴定,以芍药‘粉玉奴’柱头为试验材料克隆PlCDPK24基因,对其基因结构及蛋白的理化性质进行生信分析;通过亚细胞定位确定其在细胞内作用的位置;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析PlCDPK24在芍药柱头内花粉管生长过程中的表达模式,及其对Ca^(2+)以及Ca^(2+)抑制剂乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)的响应。【结果】鉴定筛选出15个在杂交不亲和组合中高表达的PlCDPK基因,基因编码区均含有STKc-CAMK结构域、EF-hand手性结构域以及motif 1~10,其中芍药PlCDPK24与在拟南芥中已报道花粉管生长相关AtCDPK24同源,其基因序列完整,长1599 bp,编码532个氨基酸,理论等电点为5.69,是一种带负电荷的亲水性蛋白。PlCDPK24定位在细胞核,且与牡丹PsCDPK24蛋白同源性最高。实时荧光定量结果表明,相比于芍药其他部位,PlCDPK24在芍药柱头高表达;相比于自交组合,PlCDPK24在杂交后期(24和36 h)表达量显著上调,显著高于自交后期的表达;Ca^(2+)以及Ca^(2+)抑制剂EGTA处理后的杂交柱头,PlCDPK24的表达量相对于自交柱头显著上调,Ca^(2+)及EGTA处理均会不同程度降低PlCDPK24的表达量。【结论】PlCDPK24可能参与调控了花粉在柱头的萌发和花粉管的生长过程。 展开更多
关键词 芍药 远缘杂交不亲和 依赖性蛋白激酶 基因克隆 花粉生长
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钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN-93加重大鼠离体心脏钙超载损伤 被引量:10
3
作者 孔令恒 顾晓明 +4 位作者 南瑛 张建英 孙娜 朱娟霞 周京军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期832-836,共5页
目的观察钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)抑制剂KN-93对大鼠离体心脏钙超载损伤的影响。方法采用Langendorff装置进行离体心脏灌流,利用钙反常现象诱发胞内钙超载。32只SD♂大鼠随机分为正常对照组、药物KN-93对照组、钙反常组和KN... 目的观察钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)抑制剂KN-93对大鼠离体心脏钙超载损伤的影响。方法采用Langendorff装置进行离体心脏灌流,利用钙反常现象诱发胞内钙超载。32只SD♂大鼠随机分为正常对照组、药物KN-93对照组、钙反常组和KN-93处理组。实验全程记录左心室内压的变化,以左心室舒张末压(LVEDP)和发展压(LVDP)评价心功能,于不同时间点收集冠脉流出液,并测定乳酸脱氢酶(LDH)的含量。实验结束后,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色检测心肌梗死面积的变化。结果与正常对照组相比,KN-93(2.5μmol·L^(-1))对正常心脏的左室功能、冠脉流量和心肌梗死面积没有明显影响(P>0.05);与正常对照组相比,钙反常组在复钙灌注结束时LVEDP抬升、LVDP降低,梗死面积达(18±7.2)%,冠脉流量减少,LDH含量增加(P<0.01);KN-93(2.5μmol·L^(-1))处理组与钙反常组相比,心肌梗死面积为(90±4.8)%,LVEDP进一步升高,LVDP消失,冠脉流量明显减少,LDH含量明显增多(P<0.01)。结论 CaMKⅡ抑制剂KN-93加重急性钙超载引起的心肌损伤,这一作用可能与影响CaMKⅡ活性有关。 展开更多
关键词 超载 钙/蛋白依赖性蛋白激酶1I KN-93 离子 心脏 心肌损伤
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尼莫地平对癫痫大鼠海马Ca^(2+)浓度及Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ_α表达的影响 被引量:4
4
作者 王佩 王海祥 +3 位作者 刘瑞春 王维平 范月辉 胡华伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期226-228,共3页
目的探讨尼莫地平(nimodipin,NIM)对戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)、Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡα,CaMKⅡα)蛋... 目的探讨尼莫地平(nimodipin,NIM)对戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)、Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡα,CaMKⅡα)蛋白表达的影响。方法将动物分为正常对照组、PTZ组和NIM+PTZ组,采用PTZ慢性点燃癫痫模型,应用Mor-ris水迷宫观察各组大鼠空间学习记忆能力,运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca2+]i变化,Western blot方法测定CaMKⅡα蛋白的表达。结果PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马细胞内[Ca2+]i明显升高(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平较正常对照组减少(P<0.05);与PTZ组比较,NIM+PTZ组大鼠空间学习记忆能力好转,其海马细胞内[Ca2+]i下降(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平升高(P<0.05)。结论PTZ点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKⅡα的表达异常,由此引起大鼠空间学习记忆能力受损;NIM可以降低细胞内[Ca2+]i,提高CaMKⅡα的表达,改善癫痫大鼠的学习记忆能力。 展开更多
关键词 尼莫地平 癫痫 空间学习记忆 Ca^2+/钙蛋白依赖性蛋白激酶α
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慢性染铅对小鼠海马Ca^(2+)-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响 被引量:4
5
作者 文涛 孙黎光 +2 位作者 宗志宏 邢伟 刘素媛 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期393-395,共3页
目的通过检测海马Ca2+钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)基因表达来探讨慢性铅中毒影响学习记忆的分子机制。方法小鼠交配后,通过饮水饲以2.4,4.8和9.6mmol·L-1醋酸铅。小鼠子代自胚胎期始即暴露于醋酸铅。幼鼠出生后,先通过哺乳... 目的通过检测海马Ca2+钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)基因表达来探讨慢性铅中毒影响学习记忆的分子机制。方法小鼠交配后,通过饮水饲以2.4,4.8和9.6mmol·L-1醋酸铅。小鼠子代自胚胎期始即暴露于醋酸铅。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。6周后用逆转录聚合酶链反应法观察各组小鼠海马CaMKⅡmRNA的表达。结果3个染铅组小鼠CaMKⅡmRNA水平均明显降低,并具有浓度效应关系。结论铅致CaMKⅡ基因表达水平下降。 展开更多
关键词 Ca^2+-蛋白依赖性蛋白激酶 海马
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钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ在大鼠胚胎心肌肥大细胞中调控血管紧张素Ⅱ诱导的细胞自噬 被引量:11
6
作者 罗敏 张慧蓉 赵玲 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第12期1917-1922,共6页
目的:探讨钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^(2+)/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMK Ⅱ)与细胞自噬在胚胎心肌细胞肥大发展过程中的相互作用。方法:使用血管紧张素Ⅱ作用于大鼠胚胎心肌细胞株H9c2细胞,建立体外心肌细胞肥... 目的:探讨钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^(2+)/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMK Ⅱ)与细胞自噬在胚胎心肌细胞肥大发展过程中的相互作用。方法:使用血管紧张素Ⅱ作用于大鼠胚胎心肌细胞株H9c2细胞,建立体外心肌细胞肥大模型,通过药物抑制和基因过表达及敲除等方法分析细胞自噬通路AMPK-LC3 Ⅱ。结果:血管紧张素Ⅱ可快速诱导CaMKⅡ及细胞自噬相关通路AMPK磷酸化以及细胞自噬标记蛋白LC3 Ⅱ表达,CaMKⅡ抑制剂以及基因敲除和药物抑制CaMK Ⅱ下游因子组蛋白乙酰转移酶4(HDAC4)可显著阻断血管紧张素Ⅱ诱导的LC3 Ⅱ蛋白表达(P<0.05)。结论:CaMK Ⅱ作为心肌肥大病理过程的中心调控子,可以通过AMPK或其下游HDAC4直接或间接调控细胞自噬,进而调节心肌肥大的发生发展。 展开更多
关键词 心肌细胞肥大 细胞自噬 离子/钙依赖性蛋白激酶 AMPK LC3II
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心力衰竭家兔心肌细胞核及肌浆网钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的变化 被引量:3
7
作者 曲辅政 张晓录 +12 位作者 孙经武 王秀花 曲爱燕 路新磊 周红霞 程林 康浩飞 衣晓蕊 王青海 刘静 史孟松 魏静 张明哲 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2015年第10期1000-1003,共4页
目的:探讨家兔慢性心力衰竭(心衰)时心肌细胞核、肌浆网钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)蛋白表达及活性的改变。方法:16只家兔随机分为两组,假手术组、心衰组各8只,通过超容量负荷联合压力负荷建立家兔心衰模型,于术后7周观察... 目的:探讨家兔慢性心力衰竭(心衰)时心肌细胞核、肌浆网钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)蛋白表达及活性的改变。方法:16只家兔随机分为两组,假手术组、心衰组各8只,通过超容量负荷联合压力负荷建立家兔心衰模型,于术后7周观察左心室结构、血液动力学的变化及心肌细胞核、肌浆网CaMKⅡ的表达和活性的改变。结果:与假手术组比较,心衰组左心室重量指数[(132±0.06)g/kg vs(3.61±0.09)g/kg]、左心室舒张末压[(-1.50±0.50)mmHg vs(23.00±2.37)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)]显著升高(P均<0.05),左心室短轴缩短率(37.83%±3.58%vs 17.38%±3.13%)及左心室射血分数(71.92%±4.56%vs 38.50%±6.07%)明显降低(P均<0.05);心衰组心肌细胞核和肌浆网的CaMKⅡ蛋白表达及活性均显著高于假手术组(P均<0.05)。结论:心肌细胞核及肌浆网CaMKⅡ蛋白表达及活性增加可能是心衰发生的机制之一。 展开更多
关键词 心力衰竭 离子/钙蛋白依赖性蛋白激酶
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钙/钙调素依赖性蛋白激酶-Ⅱ及其生物学作用 被引量:5
8
作者 王全保 王建枝 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1300-1302,共3页
Ca 2+/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ (CaMKⅡ) is a member of a family of Ca 2+/calmodulin-regulated protein kinases which also includes Ca 2+/calmodulin-dependent protein kinases Ⅰ and Ⅲ, myosin light chain ... Ca 2+/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ (CaMKⅡ) is a member of a family of Ca 2+/calmodulin-regulated protein kinases which also includes Ca 2+/calmodulin-dependent protein kinases Ⅰ and Ⅲ, myosin light chain kinases and phosphorylase kinase. Unlike the other members of this family, CaMKⅡ is multifunctional protein kinase and distributes in a variety of tissues. It is especially abundant in neuronal system. In hippocampus, CaMKⅡ is about 2% of the total protein. Studies have shown that CaMKⅡ plays an important role in a variety of biological processes, such as regulation of gene transcription, synthesis of neurotransmitter, phosphorylation of cytoskeletonal protein, hippocampal learning and memory formation. 展开更多
关键词 蛋白 蛋白激酶 学习 记忆
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钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ参与多柔比星导致的心肌细胞毒性反应 被引量:3
9
作者 秦瑶 赵鸿彦 +1 位作者 张文航 王冬梅 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2015年第10期1004-1007,共4页
目的:探讨钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)在多柔比星导致的心肌细胞毒性反应中的作用。方法:用多柔比星处理大鼠心肌细胞,检测细胞增殖情况、CaMKⅡδ基因的表达情况和活性变化。利用常间回文重复序列丛集(CRISPR)技术敲... 目的:探讨钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)在多柔比星导致的心肌细胞毒性反应中的作用。方法:用多柔比星处理大鼠心肌细胞,检测细胞增殖情况、CaMKⅡδ基因的表达情况和活性变化。利用常间回文重复序列丛集(CRISPR)技术敲除大鼠心肌细胞CaMKⅡδ基因表达,检测CaMKⅡδ基因敲除后的大鼠心肌细胞对多柔比星诱导凋亡的应答变化。检测CaMKⅡδ基因敲除大鼠心肌细胞经多柔比星处理后核因子(NF)-κB活化的变化以及miR-146a表达情况的变化。结果:多柔比星处理抑制大鼠心肌细胞增殖,CaMKⅡδ基因的表达变化不明显,但活性显著上升。利用CRISPR技术可有效敲除CaMKⅡδ基因表达。敲除CaMKⅡδ基因后的大鼠心肌细胞对多柔比星的敏感度降低。相对于正常细胞,敲除CaMKⅡδ基因后的大鼠心肌细胞在多柔比星处理时NF-κB活化程度降低,miR-146a表达上调程度降低。结论:CaMKⅡδ参与多柔比星对心肌细胞的毒性作用,这一过程涉及NF-κB以及miR-146a。 展开更多
关键词 离子/钙蛋白依赖性蛋白激酶δ 多柔比星 心肌细胞毒性
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TNF-α和钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在大鼠心肌缺血后适应中的作用 被引量:1
10
作者 刘敏 张家明 +2 位作者 李超 郝海菊 李景东 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1330-1334,共5页
目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)和肌浆网钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在大鼠心肌缺血后适应发生机制中的作用。方法:SD大鼠随机分为5组(各组n=16),包括假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后适应组(IP组)、重组人肿... 目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)和肌浆网钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在大鼠心肌缺血后适应发生机制中的作用。方法:SD大鼠随机分为5组(各组n=16),包括假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后适应组(IP组)、重组人肿瘤坏死因子受体:Fc融合蛋白(rhTNFR:Fc)+缺血再灌注组(F+IR组)和rhTNFR:Fc+缺血后适应组(F+IP组)。结扎冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注损伤和缺血后适应模型,测量各组心肌梗死面积;RT-PCR及Western blotting测定心肌TNF-αmRNA和蛋白及CaMKⅡ含量和活性。结果:(1)与sham组比较,IR组梗死面积/缺血区面积及缺血区面积/总面积的比值均显著增加(P<0.01);与IR组比较,IP组、F+IR组和F+IP组这2个比值均显著减少(P<0.01),其中F+IP组减少更为明显。(2)与sham组比较,其余各组心肌组织TNF-αmRNA和蛋白均显著升高(P<0.01);与IR组比较,IP组、F+IR组和F+IP组TNF-α表达均显著降低(P<0.01);与IR组比较,IP组、F+IR组和F+IP组CaMKⅡ活性均明显升高(P<0.01),其中以F+IP组升高最为显著。(4)与sham组比较,IR组和IP组肌浆网CaMKⅡ活性显著降低(P<0.01),而F+IR组和F+IP组均明显升高;与IR组比较,IP组、F+IR组和F+IP组CaMKⅡ活性均明显升高(P<0.01),其中以F+IP组升高最为显著。结论:缺血后适应可通过降低缺血再灌注时心肌组织TNF-αmRNA和蛋白表达、增加CaMKⅡ含量和活性发挥心肌保护作用。 展开更多
关键词 缺血后适应 心肌 -蛋白依赖性蛋白激酶 肿瘤坏死因子
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钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的制备与活性测定 被引量:1
11
作者 郭庆民 孟爱民 +1 位作者 杨京 刘景生 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期228-231,共4页
目的 从牛心肌中提取纯化钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMKⅡ ),并测定其活性。方法 采用 DEAE- cellulose柱层析和 Sepharose 4B亲和层析分离纯化蛋白,用γ- 32P掺入法测定 CaMKⅡ及自磷酸化的 CaMKⅡ活性。 结果从牛心肌中提取到钙... 目的 从牛心肌中提取纯化钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMKⅡ ),并测定其活性。方法 采用 DEAE- cellulose柱层析和 Sepharose 4B亲和层析分离纯化蛋白,用γ- 32P掺入法测定 CaMKⅡ及自磷酸化的 CaMKⅡ活性。 结果从牛心肌中提取到钙调蛋白结合的蛋白组分,纯化后得到的 CaMKⅡ比较稳定,产量也较高。此过程比较简单,适合大量制备。经 SDS- PAGE检测,发现酶提取物均质,酶亚基的目的蛋白带相对分子质量为 56 000。在 syntide- 2为底物的反应中,纯化的 CaMKⅡ的特异性酶活性为 7.84 pmol· min- 1· mg- 1。 CaMKⅡ可自磷酸化,经过自磷酸化的酶在 Ca2+和钙调蛋白不存在时也保持活性。结论 通过凝胶层析与亲和层析可提纯 CaMKⅡ。 展开更多
关键词 蛋白依赖性蛋白激酶 活性测定 制备 凝胶层析 亲和层析
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钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ调控压力负荷心力衰竭小鼠心肌细胞肥大和凋亡的作用及机制 被引量:4
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作者 葛广全 赵峰 +6 位作者 陈道虎 石振塑 陈泽伦 王天光 王小啟 何书武 魏以桢 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1314-1321,共8页
目的探讨抑制钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)调控压力负荷心力衰竭小鼠心肌细胞肥大和凋亡的作用及机制。方法取6~8周雄性C57BL/6小鼠24只,随机分为4组:假手术组、假手术+KN-93组、主动脉缩窄术(TAC)组、TAC+KN-93组,每组6只。... 目的探讨抑制钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)调控压力负荷心力衰竭小鼠心肌细胞肥大和凋亡的作用及机制。方法取6~8周雄性C57BL/6小鼠24只,随机分为4组:假手术组、假手术+KN-93组、主动脉缩窄术(TAC)组、TAC+KN-93组,每组6只。称各组小鼠体重和心脏质量,计算心脏质量指数(HWI);通过超声心动图评价小鼠心脏结构和功能;WGA、Masson及TUNEL染色分别检测小鼠心肌细胞横截面积、纤维化程度和凋亡水平;qRT-PCR检测心房钠尿肽(ANP)mRNA表达,蛋白质印迹法检测ANP、脑钠肽(BNP)、β肌球蛋白重链(β-MHC)、活化的Caspase 3、活化的Caspase 9、Bcl-2、B淋巴细胞瘤2相关X蛋白(Bax)、磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)和沉默调节蛋白3(Sirt3)的表达。结果与假手术组相比,TAC组小鼠HWI、左心室舒张末期直径(LVEDD)、左心室收缩末期直径(LVESD)均增加(P均<0.05),左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS)均降低(P均<0.05);心肌细胞横截面积增大(P<0.05),心肌组织ANP mRNA和蛋白及BNP、β-MHC蛋白表达均增加(P均<0.05),心肌纤维化和心肌细胞凋亡均增加(P均<0.05),心肌组织凋亡蛋白活化的Caspase 3、活化的Caspase 9和Bax相对表达量均增加(P均<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2相对表达量降低(P<0.05),p-CaMKⅡ/CaMKⅡ比值下降(P<0.05),Sirt3相对表达量增加(P<0.05)。而给予CaMKⅡ抑制剂KN-93后,TAC+KN-93组小鼠上述指标均被逆转,与TAC组相比差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论抑制CaMKⅡ能够减轻压力负荷心力衰竭小鼠的心功能不全,抑制心肌细胞肥大及凋亡,且其作用机制与Sirt3有关。 展开更多
关键词 心力衰竭 主动脉缩窄术 压力负荷 心肌肥厚 -依赖性蛋白激酶2型 沉默蛋白3
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不同G蛋白耦联受体激酶对β-肾上腺素受体诱导心肌钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活化的影响 被引量:1
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作者 李锐 柴慧娟 +3 位作者 屈扬扬 李丹丹 刘艳丽 张玲 《中国心血管杂志》 2014年第4期291-295,共5页
目的探讨不同G蛋白耦联受体激酶(GRK)对β-肾上腺素受体(β-AR)诱导的心肌钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活化的影响。方法雄性小鼠(体质量20~28 g)分为野生对照组(WT:SPF级C57BL/6小鼠,作为阳性对照)、GRK2,3,5,6基... 目的探讨不同G蛋白耦联受体激酶(GRK)对β-肾上腺素受体(β-AR)诱导的心肌钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活化的影响。方法雄性小鼠(体质量20~28 g)分为野生对照组(WT:SPF级C57BL/6小鼠,作为阳性对照)、GRK2,3,5,6基因敲除组(GRK2KO、GRK3KO、GRK5KO、GRK6KO)和β1、2-AR突变组[GRK(-):β-AR缺乏GRK磷酸化位点,作为阴性对照]。各组小鼠分别给予异丙基肾上腺素(ISO)刺激或等量生理盐水2周,断颈处死动物,切取左心室并剥离粘连组织,经液态氮处理后贮存于-80℃。Western blot用于检测有活性的CaMKⅡ(p-CaMKⅡThr286/T-CaMKⅡ)的表达变化;采用ELISA方法检测心肌匀浆CaMKⅡ活性;HE染色检测心肌细胞组织学变化。结果给予ISO刺激后,与阳性对照WT小鼠变化相同,GRK2KO,GRK3KO和GRK6KO小鼠心肌组织中p-CaMKⅡ表达水平明显增加(ISO刺激与非刺激小鼠比较,均为P〈0.05),而GRK5KO与阴性对照GRK(-)小鼠变化相同,ISO刺激组与非刺激组相比心肌组织中p-CaMKⅡ表达无明显增加;ELISA检测也发现,ISO刺激后WT及GRK2KO,GRK3KO,GRK6KO小鼠心肌组织匀浆的CaMKⅡ活性显著增加(ISO刺激与非刺激小鼠比较,均为P〈0.05),而GRK5KO及GRK(-)小鼠ISO的CaMKⅡ活性无明显增加。HE染色发现,WT小鼠ISO刺激与非刺激组相比心肌横截面积明显增大[(1388.2±270.3)μm^2比(825.5±414.9)μm^2,P〈0.05],GRK5KO小鼠ISO刺激组与非刺激组比较,心肌横截面积无明显差异[(837.1±112.8)μm^2比(883.5±235.9)μm^2,P〉0.05]。结论 GRK5对β-AR诱导的CaMKⅡ激活是必要的;GRK5基因敲除可能通过引起CaMKⅡ表达改变而改善β-AR持久兴奋诱导的心肌肥厚。 展开更多
关键词 G蛋白耦联受体激酶 Β-肾上腺素受体 蛋白依赖性蛋白激酶 心肌肥厚
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苄丙咯、尼莫地平和尼卡地平对小鼠脑钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活力的影响 被引量:1
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作者 唐放鸣 张光毅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第5期380-383,共4页
体外实验发现,苄丙咯(bepridil.Bep)能显著抑制提纯的鼠脑钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaM—PKⅠ)的活力,其半抑制浓度约为0.3mmol·L^(-1),而尼莫地平(nimodinine,Nim)和尼卡地平(nicardipine;Nic)对该酶活力均无明显影响。实验结果表... 体外实验发现,苄丙咯(bepridil.Bep)能显著抑制提纯的鼠脑钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaM—PKⅠ)的活力,其半抑制浓度约为0.3mmol·L^(-1),而尼莫地平(nimodinine,Nim)和尼卡地平(nicardipine;Nic)对该酶活力均无明显影响。实验结果表明,Bep对CaM—PKⅡ的抑制是通过擂抗CaM而实现的。 展开更多
关键词 苄丙咯 蛋白 蛋白激酶
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钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ与记忆 被引量:4
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作者 廖素群 《生物学教学》 北大核心 2004年第7期1-3,共3页
钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ是突触后致密成分的重要蛋白质组分,它能感受突触后钙离子水平的变化,并能通过自磷酸化维持长时活性,在调节谷氨酸能突触可塑性和学习记忆中有重要作用。
关键词 钙/依赖性蛋白激酶 记忆 突触 自磷酸化 长时程增强
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钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ及其功能 被引量:1
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作者 崔宗杰 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期61-63,共3页
所有引起细胞内钙离子浓度升高的激素或神经递质都可通过不同的钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶达到调节细胞生理功能的作用。其中钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ在不同组织中的分布、基因表达不同,在神经元活动、细胞分泌。
关键词 蛋白激酶 离子 蛋白
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钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ与心血管疾病的研究进展 被引量:9
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作者 逯星竹 毕学苑 +1 位作者 于晓江 臧伟进 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期32-36,共5页
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)是一种主要表达于心脏的多功能丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,通过磷酸化和氧化调节心肌细胞的活性,广泛参与心血管系统生理活动及病理变化的信号转导,与多种... 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)是一种主要表达于心脏的多功能丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,通过磷酸化和氧化调节心肌细胞的活性,广泛参与心血管系统生理活动及病理变化的信号转导,与多种心血管疾病密切相关。新近研究表明,活性氧簇激活的CaMKⅡ在许多心血管疾病的发生发展中发挥关键作用,包括心律失常、缺血性心脏病、心肌肥大以及心力衰竭等。对氧化CaMKⅡ信号系统的研究可为临床心血管疾病的治疗提供重要策略和潜在靶点。 展开更多
关键词 蛋白依赖性蛋白激酶 活性氧簇 心血管疾病
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长期甲状腺素刺激对大鼠心肌Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的影响 被引量:5
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作者 李超 刘善红 +2 位作者 张家明 刘敏 李景东 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期147-151,共5页
目的:通过观察长期甲状腺素刺激对心肌Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)的影响,探讨CaMKII是否参与甲亢性心脏病的发生发展。方法:将20只SD大鼠随机分为甲状腺素刺激组和对照组,每组各10只。以0.2 mg.kg-1.d-1的剂量腹腔注射甲状... 目的:通过观察长期甲状腺素刺激对心肌Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)的影响,探讨CaMKII是否参与甲亢性心脏病的发生发展。方法:将20只SD大鼠随机分为甲状腺素刺激组和对照组,每组各10只。以0.2 mg.kg-1.d-1的剂量腹腔注射甲状腺素或等体积生理盐水3个月(每次给药前称体重),造模后3个月处死大鼠。以心重(HW)、心重与体重之比(HW/BW)、左心室重与体重之比(LVW/BW)及心肌细胞直径大小反映心肌肥厚;以心肌血管周围胶原面积(PVCA)/血管腔面积(VA)的比值反映心肌纤维化。用实时定量RT-PCR和Western blotting分别从mRNA水平和蛋白表达水平反映CaMKII的变化。结果:造模3个月后与对照组相比,甲状腺素刺激组的HW/BW、LVW/BW、心肌细胞直径大小和心肌纤维化程度(PVCA/VA)均明显高于对照组,分别是对照组的1.87、1.84、2.15和1.94倍,差异均显著(P<0.05,P<0.01);甲状腺素刺激组心肌细胞中CaMKIImRNA表达水平、蛋白含量与对照组相比均降低,分别是对照组的40%和79%,但CaMKII的活性较对照组增加1.58倍,其差异均显著(P<0.05)。结论:长期甲状腺素刺激诱导大鼠心肌肥厚模型中,甲状腺素降低心肌CaMKII的表达,但心肌CaMKII的活性增加,CaMKII可能参与甲状腺素诱导的甲亢性心脏病的发生发展。 展开更多
关键词 心肌肥大 甲状腺素 -蛋白依赖性蛋白激酶
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钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在突触可塑性和神经精神疾病中的作用 被引量:17
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作者 马婧 刘晓莉 乔德才 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1485-1488,共4页
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)是一种重要的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,参与脑内多种神经活动的调节,并被认为是一个"记忆分子",在突触可塑性和学习记忆中发挥关键作用。C... 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)是一种重要的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,参与脑内多种神经活动的调节,并被认为是一个"记忆分子",在突触可塑性和学习记忆中发挥关键作用。CaMKⅡ的功能正常对于大脑的正常生理活动是必需的。近年来研究发现,许多神经精神疾病的发生都与脑内CaMKⅡ的功能异常有关。该文对CaMKⅡ在突触可塑性以及神经精神疾病中的作用做一综述。 展开更多
关键词 钙/蛋白依赖性蛋白激酶 突触可塑性 长时程增强 长时程抑制 学习与记忆 神经精神疾病
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次声对大鼠海马区钙调依赖性蛋白激酶Ⅱ及Tau蛋白表达的影响 被引量:2
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作者 蔡丽 王晋 +4 位作者 崔尧 张鸽 武松艳 张文东 刘朝晖 《中国康复理论与实践》 CSCD 北大核心 2017年第3期298-303,共6页
目的探讨8 Hz、130 d B次声对大鼠海马区钙调依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)及tau蛋白表达的影响。方法 56只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组(n=8)、1 d组(n=8)、7 d组(n=8)、14 d组(n=32)。14 d组再分为照射后1 h、6 h、24 h、48 h亚... 目的探讨8 Hz、130 d B次声对大鼠海马区钙调依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)及tau蛋白表达的影响。方法 56只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组(n=8)、1 d组(n=8)、7 d组(n=8)、14 d组(n=32)。14 d组再分为照射后1 h、6 h、24 h、48 h亚组,每亚组8只。对照组每天次声仓内无次声作用放置2 h,其余各组8 Hz、130 d B次声照射2 h。免疫组织化学、Western blotting和ELISA方法检测各组大鼠海马区磷酸化Ca MKⅡ(p T286-Ca MKⅡ)及tau蛋白表达。结果 14 d组p T286-Ca MKⅡ水平最高(F>14.912,P<0.001),tau蛋白表达最多(F>36.229,P<0.001),7 d组次之(P<0.05)。14 d组中,次声后1 h、6 h,tau蛋白表达最高,24 h有所恢复,但仍较对照组高(P<0.05)。结论 8 Hz、130 d B次声作用后,大鼠海马区Ca MKⅡ磷酸化水平和tau蛋白表达及磷酸化水平增高,可能参与次声致大鼠学习记忆功能受损。 展开更多
关键词 次声 依赖性蛋白激酶 TAU蛋白 学习记忆 海马 大鼠
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