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金黄色葡萄球菌B型肠毒素的培养产毒与柱层析纯化 被引量:7
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作者 王小红 谢笔钧 +2 位作者 史贤明 孙科 李伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第5期88-91,共4页
本文采用玻璃纸覆盖琼脂平板法,在37℃培养金黄色葡萄球菌48h后,收集菌体,10000×g离心15min,上清液经聚乙二醇20000浓缩。浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32层析和葡聚糖凝胶SephadexG-75过滤纯化,获得电泳纯的金黄色葡萄球... 本文采用玻璃纸覆盖琼脂平板法,在37℃培养金黄色葡萄球菌48h后,收集菌体,10000×g离心15min,上清液经聚乙二醇20000浓缩。浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32层析和葡聚糖凝胶SephadexG-75过滤纯化,获得电泳纯的金黄色葡萄球菌B型肠毒素。实验证明,利用该简化的二步柱层析分离得到的金黄色葡萄球菌B型肠毒素完全能满足血清学检实验和鉴定的要求,方法简便易行,一般实验室均可使用。 展开更多
关键词 黄色葡萄球菌 B肠毒素 培养产毒 离子交换层析 凝胶过滤
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金黄色葡萄球菌新型肠毒素I双抗夹心-酶联免疫检测方法的建立 被引量:7
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作者 朱安妮 唐俊妮 +3 位作者 赵燕英 汤承 陈娟 刘骥 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第16期193-198,共6页
目的:建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素I(staphylococcal enterotoxin I,SEI)的双抗夹心酶联免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)。方法:利用DAS-ELISA检测程序确定单克隆抗体... 目的:建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素I(staphylococcal enterotoxin I,SEI)的双抗夹心酶联免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)。方法:利用DAS-ELISA检测程序确定单克隆抗体、抗血清、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的羊抗兔Ig G(Ig G/HRP)的最佳稀释度,再通过检测不同包被缓冲液、封闭时间、抗原包被时间、Ig G/HRP作用时间以及四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine,TMB)显色时间条件下的OD450 nm值对实验条件进行优化,最后用灵敏度、批内变异、批间变异和加标回收率指标对方法进行评价。结果:抗SEI单克隆抗体的最佳稀释质量浓度为2.89 mg/L,抗SEI兔血清稀释度1∶2 000,酶标二抗稀释度1∶6 000;1×磷酸缓冲盐溶液(p H 7.4)为最佳包被缓冲液;最佳封闭时间、抗原孵育时间、酶标二抗孵育时间和TMB显色时间分别为60、90、30 min和15 min。该方法的回归方程为y=0.040 9x+0.042 9,R2=0.993 3;灵敏度为0.5μg/L,精密度批内变异低于10%,批间变异低于15%,除巴氏杀菌牛乳外,对生理盐水、熟牦牛肉糜、大米饭和超高温瞬时灭菌牛乳回收率达90%以上。结论:本研究建立了一种快速检测SEI的双抗夹心方法。 展开更多
关键词 双抗夹心酶联免疫吸附 黄色葡萄球菌 黄色葡萄球菌肠毒素I 检测方法
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牛奶中金黄色葡萄球菌的耐药性及其肠毒素分型研究 被引量:10
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作者 王娟 黄秀梅 +5 位作者 刘书科 李玉清 赵思俊 曲志娜 王玉东 王君玮 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第3期30-32,共3页
为了解我国部分生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌污染状况和耐药情况,为指导奶牛场安全合理用药和保障消费者食品安全提供依据。采集3个省共6个奶牛场及挤奶站的新鲜牛奶进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定、药敏试验以及分离菌肠毒素PCR分型。结果... 为了解我国部分生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌污染状况和耐药情况,为指导奶牛场安全合理用药和保障消费者食品安全提供依据。采集3个省共6个奶牛场及挤奶站的新鲜牛奶进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定、药敏试验以及分离菌肠毒素PCR分型。结果从338份生鲜牛奶中共分离鉴定金黄色葡萄球菌共39株,分离率为11.54%;所有分离菌株都有不同程度的耐药,尤其对磺胺类药物和青霉素类的耐药性非常严重;92.3%的菌株含SEA SAJ基因肠毒素。 展开更多
关键词 生鲜牛奶 黄色葡萄球菌 耐药性 肠毒素
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金黄色葡萄球菌耐药性及肠毒素分型研究 被引量:8
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作者 史红 王娟 +7 位作者 郑增忍 单虎 王述柏 李玉清 黄秀梅 刘开成 韩艳 张鹏 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第6期87-90,共4页
为了解从生鲜乳中分离得到的31株金黄色葡萄球菌的耐药性和肠毒素分布情况,用微量肉汤稀释法进行药敏试验,用PCR方法进行肠毒素的检测和分型。结果表明,31株金黄色葡萄球菌耐药率在50%以上的抗菌药有7种,药耐药率小于10%的有3种;敏感率... 为了解从生鲜乳中分离得到的31株金黄色葡萄球菌的耐药性和肠毒素分布情况,用微量肉汤稀释法进行药敏试验,用PCR方法进行肠毒素的检测和分型。结果表明,31株金黄色葡萄球菌耐药率在50%以上的抗菌药有7种,药耐药率小于10%的有3种;敏感率大于50%的抗菌药有6种,敏感率小于10%的有5种。31株金黄色葡萄球菌毒素基因携带率为93.5%,同时携带2种及以上毒素的菌株占67.7%,有SEA基因的占38.7%,含其他传统的毒素基因类型SEB、SEC、SED和SEE基因的菌株只占40.4%,携带新发现的毒素基因SEG、SHE、SEI和SEJ的菌株占67.7%。说明本次试验中的31株金黄色葡萄球菌对6类13种抗菌药都有不同程度的耐药性,且多重耐药现象比较严重。生鲜乳中分离的金黄色葡萄球菌带毒率高,且携带新发现的肠毒素基因较多。 展开更多
关键词 黄色葡萄球菌 耐药性 肠毒素
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金黄色葡萄球菌新型肠毒素sek基因在3株食品分离菌株中的表达 被引量:7
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作者 王琼 唐俊妮 +3 位作者 汤承 陈娟 刘骥 蔡自建 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第13期140-146,共7页
目的:肠毒素sek基因在临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株中较为流行,研究新型肠毒素sek基因的时序性表达可为食物中毒预防和疾病控制补充新的基础数据。方法:本研究针对实验室保存的食源性金黄色葡萄球菌菌株进行21种肠毒素基... 目的:肠毒素sek基因在临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株中较为流行,研究新型肠毒素sek基因的时序性表达可为食物中毒预防和疾病控制补充新的基础数据。方法:本研究针对实验室保存的食源性金黄色葡萄球菌菌株进行21种肠毒素基因检测,筛选出3株含sek基因的菌株SA005、SA008和SAB0,针对3株菌株进行生长曲线测定,随后在培养不同时间段收集菌体提取RNA,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time-polymerase chain reaction,real time-PCR)检测肠毒素sek基因在12~120 h的相对表达水平。结果:基因检测结果显示,菌株SA005含有16S、nuc、mec A、seb、sec、sek、sex基因,SA008含有16S、nuc、mec A、sea、sek、sex基因,SAB0含有16S、nuc、sek、sex基因。3株菌株在胰酪胨大豆肉汤培养基中的生长曲线趋势较相似,18 h左右出现折点,之后细菌进入生长稳定期。3株菌株的sek基因在12~120 h全程表达,SA005的sek基因在48 h时相对表达量最高,在84 h相对表达量最低;SA008在24 h时的相对表达量最高,在48 h相对表达量最低,在60~120 h表达量相对比较稳定;SAB0在12~120 h之间相对表达量呈现抛物线趋势,在60 h和72 h的表达量相对较高且差异不显著(P〉0.05)。结论:3株菌株sek表达水平存在明显差异,相同菌株sek基因不同时间点表达也存在差异性,菌株基因背景的影响可能是造成sek基因表达差异性的关键。 展开更多
关键词 黄色葡萄球菌 肠毒素 sek基因 实时荧光定量聚合酶链式反应 时序性表达
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PCR技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素D基因 被引量:12
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作者 云泓若 李月琴 周天鸿 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 1999年第5期84-87,共4页
根据金黄色葡萄球菌肠毒素 D 基因的序列,设计相应的引物,建立检测金黄色葡萄球菌肠毒素 D 基因的 P C R 技术利用该方法可从含有肠毒素 D 基因的金黄色葡萄球菌中扩增出 P C R产物扩增产物具有特异性,长为316 个碱... 根据金黄色葡萄球菌肠毒素 D 基因的序列,设计相应的引物,建立检测金黄色葡萄球菌肠毒素 D 基因的 P C R 技术利用该方法可从含有肠毒素 D 基因的金黄色葡萄球菌中扩增出 P C R产物扩增产物具有特异性,长为316 个碱基对经限制性核酸内切酶 Hh I Ⅰ酶切证实扩增产物为 S E D 基因片段 P C R 敏感度实验显示:建立的检测金黄色葡萄球菌肠毒素 D 基因的 P C R 技术具有快速敏感简易和特异性强等特点。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 黄色葡萄球菌 肠毒素基因
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金黄色葡萄球菌肠毒素对小鼠慢性哮喘模型的抗炎作用 被引量:4
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作者 李华 刘金保 +2 位作者 陆丽 董伟华 沈守星 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期183-185,共3页
目的:用金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)和肠毒素B(SEB)干预幼年小鼠,观察它们对小鼠慢性哮喘气道炎症的影响以及对气道内相关细胞因子水平的调节作用。方法:实验组中BALB/c小鼠在出生后1周开始腹腔注射0.1 mL SEA或SEB(浓度1 mg/L),隔天注... 目的:用金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)和肠毒素B(SEB)干预幼年小鼠,观察它们对小鼠慢性哮喘气道炎症的影响以及对气道内相关细胞因子水平的调节作用。方法:实验组中BALB/c小鼠在出生后1周开始腹腔注射0.1 mL SEA或SEB(浓度1 mg/L),隔天注射,共7次。其它小组注射相同剂量生理盐水对照。BALB/c小鼠出生后4周建立哮喘模型,实验组和模型组分别在0、7和14 d用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏,在28 d开始隔天OVA雾化激发哮喘,共7次,末次激发后24-48 h内取支气管肺泡灌洗液(BALF),进行嗜酸性粒细胞和总白细胞计数,其余BALF离心-70℃冻存检测细胞因子,固定肺组织做病理切片分析。结果:SEA组和SEB组小鼠肺组织炎症反应轻于模型组,BALF中嗜酸性粒细胞数量少于模型组(P<0.05);SEA、SEB组BALF中Th1细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)高于模型组(P<0.05);而Th2细胞因子白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)和嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)均低于模型组(P<0.01)。结论:早期感染SEA、SEB可以减少小鼠慢性哮喘支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞的数量,可能通过调节Th1/Th2细胞因子比值减轻气道中的哮喘炎症反应。 展开更多
关键词 葡萄球菌 黄色 肠毒素 哮喘 细胞因子类
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T6SS效应蛋白Tse1的原核表达及其对金黄色葡萄球菌的抑菌作用
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作者 张曼琪 赵冰雨 +5 位作者 温如如 张静雯 孙孟冉 占乐杨 苟婧萱 宋祥军 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期2917-2926,共10页
Ⅵ型分泌系统(typeⅥsecretion systems,T6SS)广泛存在于革兰阴性菌中,其效应蛋白Tse1在细菌种间竞争中发挥着重要的作用。本研究旨在探究Tse1对金黄色葡萄球菌(Staphylococcu saureus,S.aureus)的抑菌作用,探索其在耐药性细菌中的表现... Ⅵ型分泌系统(typeⅥsecretion systems,T6SS)广泛存在于革兰阴性菌中,其效应蛋白Tse1在细菌种间竞争中发挥着重要的作用。本研究旨在探究Tse1对金黄色葡萄球菌(Staphylococcu saureus,S.aureus)的抑菌作用,探索其在耐药性细菌中的表现和影响。利用含有重组质粒pET-28a-Tse1的大肠杆菌原核表达系统诱导Tse1蛋白表达并纯化。通过荧光显微镜及扫描电镜观察重组蛋白Tse1对金黄色葡萄球菌细胞壁的破坏作用。最后,采用琼脂孔扩散抑菌试验、微量肉汤稀释法测定重组蛋白Tse1对金黄色葡萄球菌的抗菌活性及其与抗生素联合作用的效果。结果表明,在16℃,IPTG浓度为0.5 mmol·L^(-1)诱导16 h时,Tse1蛋白的表达量达到最高并以可溶性形式存在于上清液中,蛋白相对分子质量约为22 ku。重组蛋白Tse1与S.aureus共培后可发现蛋白结合在菌体表面并能破坏其细胞壁,破坏程度表现为剂量依赖形式。琼脂孔扩散抑菌试验表明重组蛋白Tse1对S.aureus不同菌株均有明显抑菌作用,并且与青霉素(PG)联合使用能明显提升Tse1蛋白的抑菌效果。本试验建立了Tse1蛋白的原核表达及纯化方法,证明了Tse1蛋白对金黄色葡萄球菌具有抑菌作用,与青霉素联合应用能增强其抑菌效果,为挖掘新型抗生素替代品提供了相关理论基础。 展开更多
关键词 抗生素替代 分泌系统 Tse1 黄色葡萄球菌
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产A型肠毒素金黄色葡萄球菌的筛选及其重组表达 被引量:2
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作者 吴双 张仁利 +2 位作者 耿艺介 高世同 胡章立 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期451-454,共4页
目的分离产A型肠毒素金黄色葡萄球菌标准株,克隆和表达金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),研究其生物学特征。方法应用PCR扩增SEA基因片段,与克隆载体pGEMT-easy连接,亚克隆到表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达和纯化重组蛋... 目的分离产A型肠毒素金黄色葡萄球菌标准株,克隆和表达金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),研究其生物学特征。方法应用PCR扩增SEA基因片段,与克隆载体pGEMT-easy连接,亚克隆到表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达和纯化重组蛋白,用重组蛋白免疫小鼠获得抗血清,进行重组蛋白免疫原性分析。结果成功克隆SEA全长基因,经DNA序列分析证实与GenBank收录序列具有100%的同源性。表达蛋白相对分子质量为31000,以包涵体形式存在。纯化、复性后获得有活性的rSEA蛋白,rSEA蛋白能够识别天然的SEA。结论SEA基因成功克隆到表达质粒内并表达,rSEA具备抗原性,为制备单抗、诊断试剂及金黄色葡萄球菌致病机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 黄色葡萄球菌A肠毒素 重组表达 蛋白纯化 复性
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牛乳金黄色葡萄球菌分离株超抗原肠毒素基因分型研究 被引量:2
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作者 孙颖 汤婷婷 +2 位作者 鲍庆晗 郭海勇 崔京春 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第12期14-18,共5页
为研究牛乳金黄色葡萄球菌SP-3分离株携带超抗原肠毒素的基因型,设计合成了金黄色葡萄球菌超抗原肠毒素基因SEA-SEE及TSST-1特异性引物,并以其固有基因femA和femB为阳性对照,以分离菌株DNA为模板,经PCR扩增菌株携带的毒素基因。结果表明... 为研究牛乳金黄色葡萄球菌SP-3分离株携带超抗原肠毒素的基因型,设计合成了金黄色葡萄球菌超抗原肠毒素基因SEA-SEE及TSST-1特异性引物,并以其固有基因femA和femB为阳性对照,以分离菌株DNA为模板,经PCR扩增菌株携带的毒素基因。结果表明,SP-3分离株和阳性对照菌株均含有femA和femB基因,且牛乳分离株携带sea、sec、sed和tst-1 4种超抗原肠毒素基因,为开展动物源超抗原毒素基因系统分型及有效防控金黄色葡萄球菌奶牛乳腺炎奠定基础。 展开更多
关键词 黄色葡萄球菌 超抗原 肠毒素 基因分
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金黄色葡萄球菌在猪肉上的生长以及新型肠毒素基因sek的表达 被引量:2
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作者 王琼 张荣 +2 位作者 陈娟 龙虎 唐俊妮 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期190-194,共5页
目的:研究金黄色葡萄球菌在猪肉上的生长以及新型肠毒素sek的时序性表达。方法:将实验室保存的三株携带sek基因的金黄色葡萄球菌SA005、SA008和SAB0分别接种于无菌猪肉上37℃静置培养至120 h,每隔12 h取样进行细菌计数以及p H测定,同... 目的:研究金黄色葡萄球菌在猪肉上的生长以及新型肠毒素sek的时序性表达。方法:将实验室保存的三株携带sek基因的金黄色葡萄球菌SA005、SA008和SAB0分别接种于无菌猪肉上37℃静置培养至120 h,每隔12 h取样进行细菌计数以及p H测定,同时收集不同时间点的菌体提取RNA,利用实时荧光定量PCR监测细菌生长过程中sek的相对表达量。结果:三株菌株在猪肉上生长36 h以后进入稳定期,48 h肉上已经出现肉眼可见的金黄色葡萄球菌菌体聚集,120 h肉粒变得粘稠并有黏液渗出;猪肉p H在细菌生长的36 h前变化不大,在120 h已逐渐上升到p H8.85-9.14;三株金黄色葡萄球菌sek的表达量在细菌生长的对数期有一次高表达,随后表达量下降,在生长的稳定后期表达量再次升高,其中,SA005的sek基因在细菌的生长过程中表达量明显高于SA008和SAB0(p〈0.01)。结论:三株金黄色葡萄球菌在猪肉上生长,肠毒素sek基因持续表达但相对表达量因菌株而存在差异,sek基因在转录水平上的高表达将会带来食品安全的潜在威胁。 展开更多
关键词 黄色葡萄球菌 猪肉 肠毒素sek 荧光实时定量PCR 时序性表达
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分泌抗金黄色葡萄球菌C1型肠毒素杂交瘤细胞系的建立及初步应用 被引量:4
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作者 杨琨 董邦权 +3 位作者 赵宁 刘雪松 金伯泉 李恩善 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1995年第3期26-29,共4页
应用常规方法建立了3株稳定分泌抗金黄色葡萄球菌C1型肠毒素(SEC1)单克隆抗体(McAb)的小鼠杂交瘤细胞系B3、C4和G8。其中B3和C4均为IgG1(k),G8为IgG2a(k)。B3和G8与SEA、SEB及S... 应用常规方法建立了3株稳定分泌抗金黄色葡萄球菌C1型肠毒素(SEC1)单克隆抗体(McAb)的小鼠杂交瘤细胞系B3、C4和G8。其中B3和C4均为IgG1(k),G8为IgG2a(k)。B3和G8与SEA、SEB及SED均无交叉反应;C4虽与SEA和SED无交叉反应,但与SEB有交叉反应。间接ELISA测定小鼠腹水效价为10-5~10-8。应用识别不同表位的McAb建立了双McAb夹心ELISA法检测SEC1,敏感性可达1ng/ml。 展开更多
关键词 黄色葡萄球菌 肠毒素C1 单克隆抗体 无性素
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热诱导潜在食物中毒威胁源重组M型金黄色葡萄球菌肠毒素去折叠及聚合过程 被引量:2
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作者 刘骥 田万帆 +3 位作者 唐俊妮 陈娟 赵燕英 于基成 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第21期32-45,共14页
热失活工艺是降低加工食品中潜在的细菌和毒素含量的有效手段。M型金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins M,SEM)归属于V型超抗原,具有较弱的催吐活性,是一种潜在的金黄色葡萄球菌所致食物中毒威胁源。本研究利用圆二色光... 热失活工艺是降低加工食品中潜在的细菌和毒素含量的有效手段。M型金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins M,SEM)归属于V型超抗原,具有较弱的催吐活性,是一种潜在的金黄色葡萄球菌所致食物中毒威胁源。本研究利用圆二色光谱、荧光光谱、变性/活性聚丙烯酰胺凝胶电泳监测重组M型金黄色葡萄球菌肠毒素(recombinant staphylococcal enterotoxin M,rSEM)热诱导变性过程。结果表明,在低于40℃时,rSEM具有富含α-螺旋(17%)、β-折叠(32%)、转角(21%)的天然折叠态结构,分子表面唯一的121号色氨酸残基位于β-掌型结构域中相对疏水的环境中。随着温度从42℃升高到55℃,rSEM二级结构中减少的α-螺旋含量被增加的β-折叠/转角含量所弥补,蛋白质分子之间聚集状态未发生明显改变,最大荧光发射波长明显蓝移,同时350 nm和340 nm波长处的荧光强度比表现出反S型曲线,说明42~55℃温和加热可导致另一种形式的rSEM折叠中间态(intermediate state,IS)形成。在55~90℃温度范围内,rSEM二级结构基本维持稳定。与此同时,当加热温度从65℃升高至80℃时,350 nm与340 nm波长处的荧光发射强度比并未显示出蛋白处于完全变性状态,说明在加热过程中rSEM二级结构基本维持稳定,而三级结构具有较大动态变化的可能性,这可能与β-掌型结构域可以通过诱导契合结合具有不同构象的主要组织性相容复合体等位基因产物有关系。此外,在70℃乃至更高的温度,rSEM的聚集程度明显增加并且在90℃时达到最大。综上,rSEM中间态形成、聚合体产生以及稳定的β-折叠/转角结构是该蛋白在高温下依然保持热稳定性的基础。通过对rSEM热诱导去折叠过程的研究有助于阐明rSEM耐热机理,未来利用该方法对其他各类金葡菌肠毒素热失活机制进行类似研究将利于食品安全性生产工艺过程的改善。 展开更多
关键词 M黄色葡萄球菌肠毒素 圆二色光谱 荧光光谱 变性/活性聚丙烯酰胺凝胶电泳 热失活
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多重PCR方法快速检测牛乳中金黄色葡萄球菌及其肠毒素基因型 被引量:2
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作者 李荔枝 张军 +3 位作者 胡萍 周国君 王晓静 朱建荣 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2013年第12期34-39,45,共6页
针对金黄色葡萄球菌肠毒素基因A,B,C,D(SEA,SEB,SEC,SED)设计了特异性引物,并以其耐热核酸酶nuc基因作为阳性对照,运用多重PCR方法建立金黄色葡萄球菌及其肠毒素基因型的快速检测方法,通过优化多重PCR反应体系及条件,得到最优组合。结... 针对金黄色葡萄球菌肠毒素基因A,B,C,D(SEA,SEB,SEC,SED)设计了特异性引物,并以其耐热核酸酶nuc基因作为阳性对照,运用多重PCR方法建立金黄色葡萄球菌及其肠毒素基因型的快速检测方法,通过优化多重PCR反应体系及条件,得到最优组合。结果表明,该方法特异性好、检测效率高、能够同时对4种肠毒素进行分型,其中SEA,SEB,SEC,SED的检测灵敏度达到0.072,0.072,0.2268,0.198 g/L,适合运用于牛乳中金黄色葡萄球菌及其肠毒素的快速检测。 展开更多
关键词 多重PCR 黄色葡萄球菌 肠毒素基因 牛乳
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金黄色葡萄球菌M型肠毒素原核表达、纯化、鉴定及溶液构象分析 被引量:1
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作者 刘骥 杨帆 +5 位作者 田万帆 龙虎 孙思雨 周玉珊 赵燕英 唐俊妮 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第24期40-46,共7页
葡萄球菌肠毒素M是由金黄色葡萄球菌νSa基因岛编码的分泌型超抗原。本研究将截去N端信号肽的金黄色葡萄球菌M型肠毒素(staphylococcal?enterotoxin?M,SEM)蛋白编码基因亚克隆至原核表达载体p ET-28a(+),构建重组表达质粒p ET-28a(+)-Δ... 葡萄球菌肠毒素M是由金黄色葡萄球菌νSa基因岛编码的分泌型超抗原。本研究将截去N端信号肽的金黄色葡萄球菌M型肠毒素(staphylococcal?enterotoxin?M,SEM)蛋白编码基因亚克隆至原核表达载体p ET-28a(+),构建重组表达质粒p ET-28a(+)-ΔNspsem;随后转化感受态E.coli?Rosetta(DE3)并探讨融合蛋白最佳表达条件;利用Ni2+-Sepharose?4?Fast?Flow亲合层析纯化出His-ΔNsp SEM融合蛋白;经质谱鉴定,纯化的融合蛋白对SEM的氨基酸覆盖率达96.3%;凝血酶切除6×His标签肽后,圆二色谱分析表明ΔNsp SEM重组蛋白富含β-折叠(35%)和β-转角(21%)以及较少α-螺旋(16%)等二级结构;荧光发射谱揭示ΔNsp SEM在278?nm和295?nm波长处激发时具有相同的Trp发射峰(341?nm);十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析表明ΔNsp SEM重组蛋白表现出较高的热稳定性。研究结果表明重组蛋白SEM表达成功,纯化的ΔNsp SEM重组蛋白溶液构象紧密并具有接近天然状态的结构,这为深入研究SEM蛋白的结构与功能提供理论支持。 展开更多
关键词 黄色葡萄球菌M肠毒素 原核表达 纯化 质谱 圆二色谱 荧光发射谱 热稳定性
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金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测 被引量:7
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作者 段鸿斌 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第7期2617-2619,共3页
[目的]为细菌毒素的检测提供理论依据。[方法]以BALB/c小白鼠为免疫对象,以自制的高纯度金黄色葡萄球菌B型肠毒素(SEB)为免疫抗原,研究其抗体的产生过程和效价,并建立SEB的间接竞争ELISA检测方法。[结果]自制SEB纯度较高,能较好地刺... [目的]为细菌毒素的检测提供理论依据。[方法]以BALB/c小白鼠为免疫对象,以自制的高纯度金黄色葡萄球菌B型肠毒素(SEB)为免疫抗原,研究其抗体的产生过程和效价,并建立SEB的间接竞争ELISA检测方法。[结果]自制SEB纯度较高,能较好地刺激动物产生抗体。以自制SEB为免疫抗原注射BALB/c小白鼠,其最高效价为1∶100 000。SEB浓度在1-1 000 ng/ml范围内,竞争抑制率与SEB浓度的对数值呈显著线性关系。当SEB的浓度为5-500 ng/ml时,随样品中SEB浓度的增加,污染样品的回收率变异系数减小,检测准确度提高。[结论]对不同污染程度的牛奶样品,利用间接竞争ELISA法检测其SEB残留的灵敏度远远高于生化法。 展开更多
关键词 牛奶 黄色葡萄球菌B肠毒素 抗原 抗体 ELISA
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葡萄球菌D型肠毒素超抗原TCR Vβ结合位点的研究
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作者 李亚斐 钟理 +1 位作者 朱锡华 杨劲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期757-759,共3页
目的 :研究金黄色葡萄球菌D型肠毒素 (SED)超抗原与TCRVβ结合的关键位点。 方法 :利用定点突变技术 ,构建了 6种SED的突变体。用3   H TdR掺入法检测这些突变体促进T细胞增殖的活性。对促增殖活性降低的突变体 ,进一步用流式细胞仪... 目的 :研究金黄色葡萄球菌D型肠毒素 (SED)超抗原与TCRVβ结合的关键位点。 方法 :利用定点突变技术 ,构建了 6种SED的突变体。用3   H TdR掺入法检测这些突变体促进T细胞增殖的活性。对促增殖活性降低的突变体 ,进一步用流式细胞仪检测他们与MHC Ⅱ类分子结合的活性和其TCRVβ特异性。结果 :发现N2 3位氨基酸是SED与人TCRVβ5结合的关键位点。H2 6位氨基酸可能是SED与人的其他TCRVβ(除TCRVβ5、TCRVβ8和TCRVβ12 .1)结合的关键位点 ,值得进一步研究。结论 :本结果丰富了对超抗原免疫识别的认识 ,为葡萄球菌超抗原相关疾病的防治 。 展开更多
关键词 超抗原 金黄色葡萄球菌d型肠毒素 TCR 结合位点
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金黄色葡萄球菌五种肠毒素基因PCR-DHPLC检测方法的建立
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作者 陈彬 王颖 +4 位作者 郑晶 黄晓蓉 林杰 彭华毅 邵碧英 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期172-177,共6页
本文设计合成了5种肠毒素基因的特异性引物,对PCR的退火温度、DNA模板量进行优化,建立了5种肠毒素基因(SEA、SEB、SEC、SED、SEE)的聚合酶链式反应-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)检测方法,并测定方法的灵敏度和特异性。结果表明建立的PCR... 本文设计合成了5种肠毒素基因的特异性引物,对PCR的退火温度、DNA模板量进行优化,建立了5种肠毒素基因(SEA、SEB、SEC、SED、SEE)的聚合酶链式反应-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)检测方法,并测定方法的灵敏度和特异性。结果表明建立的PCR-DHPLC检测方法的特异性很好,灵敏度可达到100cfu/m L。PCR-DHPLC方法具有快速、准确、高通量等优点,在进出口食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测上有很好的应用价值。 展开更多
关键词 黄色葡萄球菌 肠毒素 聚合酶链式反应(PCR) 变性高效液相色谱(dHPLC)
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1株马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌致病性分析 被引量:3
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作者 吴自豪 蔡依龙 +1 位作者 陀海欣 陈伟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期718-726,共9页
国内鲜有马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)相关报道,本研究对1株新疆马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌的致病性进行评估,以期为马乳源金黄色葡萄球菌的相关研究提供基础数据。使用选择性培养基从新疆健康马乳中分... 国内鲜有马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)相关报道,本研究对1株新疆马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌的致病性进行评估,以期为马乳源金黄色葡萄球菌的相关研究提供基础数据。使用选择性培养基从新疆健康马乳中分离金黄色葡萄球菌,然后通过生化鉴定和分子鉴定方法对金黄色葡萄球菌进行鉴定。对所获得的金黄色葡萄球菌进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、spa分型、药物敏感性检测、生物被膜形成能力、溶血活性、毒力基因检测、小鼠皮肤脓肿和致病性试验。再对分离株进行小鼠细胞的黏附、侵袭和胞内增殖试验,以评估其致病性。结果显示,从马乳中分离得到1株PVL+ST22型金黄色葡萄球菌(1/65,1.5%),spa分型为t304。仅对青霉素耐药,无生物被膜形成能力,但携带9种毒力基因(sec、seg、seh、tsst-1、hla、hlb、clfA、clfB和cna),并且具有溶血活性。小鼠皮肤脓肿和致病性试验表明,其可导致小鼠形成皮肤脓肿,并且在高剂量感染时可导致小鼠死亡。ST22型金黄色葡萄球菌可在小鼠巨噬细胞中黏附(4.26%)、侵袭(6.45%)和胞内增殖,并可造成细胞凋亡。综上,马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌具有较强的致病力,可能在宿主致病和公共卫生安全等方面存在隐患。 展开更多
关键词 马乳 PVL+ ST22黄色葡萄球菌 致病性
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金黄色葡萄球菌新型肠毒素SEK原核表达、纯化及溶液构象分析 被引量:3
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作者 田万帆 刘骥 +1 位作者 赵燕英 唐俊妮 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第4期138-145,共8页
金黄色葡萄球菌K型肠毒素(Staphylococcus aureus enterotoxin K,SEK)由金黄色葡萄球菌肠毒素基因簇编码,流行病学显示,编码SEK蛋白的sek基因在食品源金黄色葡萄球菌菌株中具有较高的检出率,说明SEK也可能是一种重要的食品中毒潜在致病... 金黄色葡萄球菌K型肠毒素(Staphylococcus aureus enterotoxin K,SEK)由金黄色葡萄球菌肠毒素基因簇编码,流行病学显示,编码SEK蛋白的sek基因在食品源金黄色葡萄球菌菌株中具有较高的检出率,说明SEK也可能是一种重要的食品中毒潜在致病因子。本研究将截去N端信号肽的SEK蛋白编码基因与原核表达载体pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒pET-28a(+)-ΔNspsek;通过对sek基因在不同原核表达宿主菌中的表达及表达条件优化分析,确立SEK蛋白的最优表达条件;利用镍亲合层析纯化含组氨酸(His)标签的SEK融合蛋白,将凝血酶切除His标签后的SEK蛋白进行聚合状态及热稳定分析、荧光发射谱和圆二色谱分析。结果表明,重组蛋白SEK表达成功,热处理导致蛋白部分降解;荧光光谱揭示SEK蛋白在278 nm和295 nm波长处具有相同的最大色氨酸发射峰;344 nm波长处表明SEK蛋白处于紧密折叠的天然状态;圆二色谱分析表明,ΔNspSEK重组蛋白富含β-折叠(23.6%)、β-转角(28%)以及α-螺旋(29.1%)等二级结构。为深入研究SEK蛋白的结构与功能提供基础,也对改进食品加工工艺和提高食品安全具有指导意义。 展开更多
关键词 黄色葡萄球菌K肠毒素 原核表达 纯化 热稳定性 荧光发射谱 圆二色谱
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