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金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测 被引量：7
1
作者 段鸿斌 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第7期2617-2619,共3页
[目的]为细菌毒素的检测提供理论依据。[方法]以BALB/c小白鼠为免疫对象,以自制的高纯度金黄色葡萄球菌B型肠毒素（SEB）为免疫抗原,研究其抗体的产生过程和效价,并建立SEB的间接竞争ELISA检测方法。[结果]自制SEB纯度较高,能较好地刺... [目的]为细菌毒素的检测提供理论依据。[方法]以BALB/c小白鼠为免疫对象,以自制的高纯度金黄色葡萄球菌B型肠毒素（SEB）为免疫抗原,研究其抗体的产生过程和效价,并建立SEB的间接竞争ELISA检测方法。[结果]自制SEB纯度较高,能较好地刺激动物产生抗体。以自制SEB为免疫抗原注射BALB/c小白鼠,其最高效价为1∶100 000。SEB浓度在1-1 000 ng/ml范围内,竞争抑制率与SEB浓度的对数值呈显著线性关系。当SEB的浓度为5-500 ng/ml时,随样品中SEB浓度的增加,污染样品的回收率变异系数减小,检测准确度提高。[结论]对不同污染程度的牛奶样品,利用间接竞争ELISA法检测其SEB残留的灵敏度远远高于生化法。 展开更多
关键词 牛奶 金黄色葡萄球菌b型肠毒素 抗原 抗体 ELISA
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金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测研究 被引量：1
2
作者 薛士鹏 《中国实用医药》 2015年第18期287-288,共2页
目的探讨金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测的临床应用价值。方法本次研究的对象是小白鼠,将本院自制的金黄色葡萄球菌B型肠毒素作为免疫抗体,研究这种抗体在产生过程中的作用,采用金黄色葡萄球菌B型肠毒素间接竞争酶联免疫吸附试... 目的探讨金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测的临床应用价值。方法本次研究的对象是小白鼠,将本院自制的金黄色葡萄球菌B型肠毒素作为免疫抗体,研究这种抗体在产生过程中的作用,采用金黄色葡萄球菌B型肠毒素间接竞争酶联免疫吸附试验（ELISA）检验方式对其进行检验,总结出金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测在细菌霉素中检测的理论依据。结果本院自制的金黄色葡萄球菌B型肠毒素纯度较高,能够与金黄色葡萄球菌B型肠毒素的浓度呈现出线性关系。在本次研究过程中,小白鼠最高效价为1：10000。从本次试验中发现,当金黄色葡萄球菌B型肠毒素的浓度在2～1000 ng/ml范围中时竞争性抑制率与金黄色葡萄球菌B型肠毒素浓度10～450 ng/ml时样品中的金黄色葡萄球菌B型肠毒素浓度会随之增加。结论采用金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测这种方式应用于检测中具有极强的价值,灵敏度较高,能够检测出样品中金黄色葡萄球菌B型肠毒素的残留情况。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌b型肠毒素 酶联免疫检测 临床应用价值 研究
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金黄色葡萄球菌B型肠毒素的培养产毒与柱层析纯化 被引量：7
3
作者 王小红 谢笔钧 +2 位作者 史贤明 孙科 李伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第5期88-91,共4页
本文采用玻璃纸覆盖琼脂平板法,在37℃培养金黄色葡萄球菌48h后,收集菌体,10000×g离心15min,上清液经聚乙二醇20000浓缩。浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32层析和葡聚糖凝胶SephadexG-75过滤纯化,获得电泳纯的金黄色葡萄球... 本文采用玻璃纸覆盖琼脂平板法,在37℃培养金黄色葡萄球菌48h后,收集菌体,10000×g离心15min,上清液经聚乙二醇20000浓缩。浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32层析和葡聚糖凝胶SephadexG-75过滤纯化,获得电泳纯的金黄色葡萄球菌B型肠毒素。实验证明,利用该简化的二步柱层析分离得到的金黄色葡萄球菌B型肠毒素完全能满足血清学检实验和鉴定的要求,方法简便易行,一般实验室均可使用。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 b型肠毒素 培养产毒 离子交换层析 凝胶过滤
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基于荧光生物传感技术检测牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素B 被引量：5
4
作者 王美玲 胡婷 +3 位作者 李昌哲 周焕英 高志贤 罗鹏 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第1期57-64,共8页
目的利用纳米金粒子(gold nanoparticles,AuNPs)荧光猝灭性能和核酸适配体的高亲和力,构建一种简便、灵敏的纳米金“Turn-on”型荧光生物传感方法检测牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxins B,SEB)的方法。方法以Au... 目的利用纳米金粒子(gold nanoparticles,AuNPs)荧光猝灭性能和核酸适配体的高亲和力,构建一种简便、灵敏的纳米金“Turn-on”型荧光生物传感方法检测牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxins B,SEB)的方法。方法以AuNPs作为荧光体的能量受体(猝灭剂),荧光素-单链DNA(fluorescein-ssDNA,FAM-ssDNA)作为荧光能量供体,冷冻法制备AuNPs-SEB适配体复合物,基于AuNPsSEB适配体复合物/SEB/FAM-ssDNA的竞争性结合,构建纳米金“Turn-on”型荧光生物传感检测方法。对缓冲体系pH和反应时间等条件进行优化,以牛奶为代表对方法检测性能进行验证。结果在优化好的实验条件(pH 7.5、反应时间15 min和反应温度25℃)下,在10^(-1)~10^(4)ng/mL范围内,荧光强度与SEB质量浓度之间呈现良好的线性关系,其相关系数为0.995,检出限为0.062 ng/mL。应用于牛奶样品中SEB的测定,方法回收率为91.2%~108.0%,相对标准偏差在2.6%~5.2%范围之间。结论该纳米金“Turn-on”型荧光生物传感检测技术具有简便、灵敏和准确等优点,可为食品中污染物的检测提供一种可行的新方法。 展开更多
关键词 纳米金粒子 核酸适配体 荧光生物传感 金黄色葡萄球菌肠毒素b 牛奶
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外周血指标对鼻息肉患者黏膜中IL-5和金黄色葡萄球菌肠毒素特异性免疫球蛋白E阳性表达的预测价值
5
作者 郑铭 司马宇彤 +3 位作者 普晓瑜 庄梦岩 王向东 张罗 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 CSCD 2024年第7期440-445,共6页
目的借助外周血指标预测慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)2型生物标志物。方法收集2020年6月~2022年5月在北京同仁医院鼻科住院的CRSwNP患者临床资料,检测外周血中嗜酸粒细胞百分比(Eos%)、Eos计数、骨膜蛋白和总IgE以及CRSwNP黏膜中白细胞介... 目的借助外周血指标预测慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)2型生物标志物。方法收集2020年6月~2022年5月在北京同仁医院鼻科住院的CRSwNP患者临床资料,检测外周血中嗜酸粒细胞百分比(Eos%)、Eos计数、骨膜蛋白和总IgE以及CRSwNP黏膜中白细胞介素5(IL-5)和金黄色葡萄球菌肠毒素特异性免疫球蛋白E(Staphylococcus aureus enterotoxinimmunoglobulin E,SE-IgE)。应用受试者工作特征(ROC)曲线评估每个外周血指标对黏膜IL-5/SE-IgE阳性表达预测价值,利用Logistic回归筛选对黏膜IL-5/SE-IgE阳性有预测价值的外周血指标,构建诺模图模型。结果CRSwNP患者哮喘比例、血中Eos%、骨膜蛋白和总IgE在IL-5/SE-IgE阳性和阴性两组之间,均具有统计学差异。ROC曲线单因素分析显示血Eos%、Eos计数、骨膜蛋白和总IgE对黏膜IL-5和SE-IgE阳性预测的AUC分别波动在0.655~0.784和0.721~0.802,Logistic回归确认血中Eos%、总IgE和血中骨膜蛋白、总IgE可分别作为IL-5和SE-IgE阳性的独立预测因素。构建预测CRSwNP黏膜IL-5/SE-IgE阳性的诺模图模型,一致性指数(C-index)为0.804和0.81,提示具有很好的预测准确性。结论血中Eos%、总IgE和血中骨膜蛋白、总IgE分别构建的诺模图,对CRSwNP黏膜IL-5和SE-IgE阳性表达具有很好的预测价值,可以预判CRSwNP内型和表型严重性。 展开更多
关键词 鼻窦炎 鼻息肉 预测 白细胞介素5 金黄色葡萄球菌肠毒素特异性免疫球蛋白E 受试者工作特征 诺模图
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金黄色葡萄球菌新型肠毒素I双抗夹心-酶联免疫检测方法的建立 被引量：7
6
作者 朱安妮 唐俊妮 +3 位作者 赵燕英 汤承 陈娟 刘骥 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第16期193-198,共6页
目的:建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素I(staphylococcal enterotoxin I,SEI)的双抗夹心酶联免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)。方法:利用DAS-ELISA检测程序确定单克隆抗体... 目的:建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素I(staphylococcal enterotoxin I,SEI)的双抗夹心酶联免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)。方法:利用DAS-ELISA检测程序确定单克隆抗体、抗血清、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的羊抗兔Ig G(Ig G/HRP)的最佳稀释度,再通过检测不同包被缓冲液、封闭时间、抗原包被时间、Ig G/HRP作用时间以及四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine,TMB)显色时间条件下的OD450 nm值对实验条件进行优化,最后用灵敏度、批内变异、批间变异和加标回收率指标对方法进行评价。结果:抗SEI单克隆抗体的最佳稀释质量浓度为2.89 mg/L,抗SEI兔血清稀释度1∶2 000,酶标二抗稀释度1∶6 000;1×磷酸缓冲盐溶液(p H 7.4)为最佳包被缓冲液;最佳封闭时间、抗原孵育时间、酶标二抗孵育时间和TMB显色时间分别为60、90、30 min和15 min。该方法的回归方程为y=0.040 9x+0.042 9,R2=0.993 3;灵敏度为0.5μg/L,精密度批内变异低于10%,批间变异低于15%,除巴氏杀菌牛乳外,对生理盐水、熟牦牛肉糜、大米饭和超高温瞬时灭菌牛乳回收率达90%以上。结论:本研究建立了一种快速检测SEI的双抗夹心方法。 展开更多
关键词 双抗夹心酶联免疫吸附 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌肠毒素I 检测方法
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金黄色葡萄球菌耐药性及肠毒素分型研究 被引量：8
7
作者 史红 王娟 +7 位作者 郑增忍 单虎 王述柏 李玉清 黄秀梅 刘开成 韩艳 张鹏 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第6期87-90,共4页
为了解从生鲜乳中分离得到的31株金黄色葡萄球菌的耐药性和肠毒素分布情况,用微量肉汤稀释法进行药敏试验,用PCR方法进行肠毒素的检测和分型。结果表明,31株金黄色葡萄球菌耐药率在50%以上的抗菌药有7种,药耐药率小于10%的有3种;敏感率... 为了解从生鲜乳中分离得到的31株金黄色葡萄球菌的耐药性和肠毒素分布情况,用微量肉汤稀释法进行药敏试验,用PCR方法进行肠毒素的检测和分型。结果表明,31株金黄色葡萄球菌耐药率在50%以上的抗菌药有7种,药耐药率小于10%的有3种;敏感率大于50%的抗菌药有6种,敏感率小于10%的有5种。31株金黄色葡萄球菌毒素基因携带率为93.5%,同时携带2种及以上毒素的菌株占67.7%,有SEA基因的占38.7%,含其他传统的毒素基因类型SEB、SEC、SED和SEE基因的菌株只占40.4%,携带新发现的毒素基因SEG、SHE、SEI和SEJ的菌株占67.7%。说明本次试验中的31株金黄色葡萄球菌对6类13种抗菌药都有不同程度的耐药性,且多重耐药现象比较严重。生鲜乳中分离的金黄色葡萄球菌带毒率高,且携带新发现的肠毒素基因较多。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 耐药性 肠毒素
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金黄色葡萄球菌新型肠毒素sek基因在3株食品分离菌株中的表达 被引量：7
8
作者 王琼 唐俊妮 +3 位作者 汤承 陈娟 刘骥 蔡自建 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第13期140-146,共7页
目的：肠毒素sek基因在临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株中较为流行,研究新型肠毒素sek基因的时序性表达可为食物中毒预防和疾病控制补充新的基础数据。方法：本研究针对实验室保存的食源性金黄色葡萄球菌菌株进行21种肠毒素基... 目的：肠毒素sek基因在临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株中较为流行,研究新型肠毒素sek基因的时序性表达可为食物中毒预防和疾病控制补充新的基础数据。方法：本研究针对实验室保存的食源性金黄色葡萄球菌菌株进行21种肠毒素基因检测,筛选出3株含sek基因的菌株SA005、SA008和SAB0,针对3株菌株进行生长曲线测定,随后在培养不同时间段收集菌体提取RNA,利用实时荧光定量聚合酶链式反应（real time-polymerase chain reaction,real time-PCR）检测肠毒素sek基因在12~120 h的相对表达水平。结果：基因检测结果显示,菌株SA005含有16S、nuc、mec A、seb、sec、sek、sex基因,SA008含有16S、nuc、mec A、sea、sek、sex基因,SAB0含有16S、nuc、sek、sex基因。3株菌株在胰酪胨大豆肉汤培养基中的生长曲线趋势较相似,18 h左右出现折点,之后细菌进入生长稳定期。3株菌株的sek基因在12~120 h全程表达,SA005的sek基因在48 h时相对表达量最高,在84 h相对表达量最低;SA008在24 h时的相对表达量最高,在48 h相对表达量最低,在60~120 h表达量相对比较稳定;SAB0在12~120 h之间相对表达量呈现抛物线趋势,在60 h和72 h的表达量相对较高且差异不显著（P〉0.05）。结论：3株菌株sek表达水平存在明显差异,相同菌株sek基因不同时间点表达也存在差异性,菌株基因背景的影响可能是造成sek基因表达差异性的关键。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 新型肠毒素 sek基因 实时荧光定量聚合酶链式反应 时序性表达
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乳品中金黄色葡萄球菌肠毒素B免疫传感检测方法的研究 被引量：6
9
作者 高博 孙秀兰 +1 位作者 张银志 顾小红 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期169-172,共4页
本文利用自制的金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)抗体构建了一种L-半胱氨酸和纳米金的双层自组装免疫传感器,采用循环伏安法及交流阻抗法对传感器进行表征与测定,并对各项相关条件进行优化,最终建立了SEB检测的标准曲线,线性范围分别在2～10 ... 本文利用自制的金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)抗体构建了一种L-半胱氨酸和纳米金的双层自组装免疫传感器,采用循环伏安法及交流阻抗法对传感器进行表征与测定,并对各项相关条件进行优化,最终建立了SEB检测的标准曲线,线性范围分别在2～10 ng/mL和10～100 ng/mL,相关系数分别为0.9939和0.9926,检出限(S/N=3)为0.667 ng/mL,乳品检测回收率在84.3%～93.2%之间。该传感器特异性良好,稳定性好,可再生使用,可应用于乳品中SEB的快速检测。 展开更多
关键词 免疫传感器 金黄色葡萄球菌肠毒素b L-半胱氨酸 纳米金 交流阻抗谱
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食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因型检测与分布研究 被引量：4
10
作者 冯震 蒋波 +1 位作者 房蕊 杨美成 《食品安全质量检测学报》 CAS 2015年第9期3460-3467,共8页
目的对食源性致病金黄色葡萄球菌肠毒素SEA^SEJ基因型分布状况进行调查,并探讨菌株分型与肠毒素基因型分布之间的关联性。方法采用PCR方法扩增金黄色葡萄球菌及肠毒素SEA^SEJ基因型核酸片段,应用全自动微生物基因指纹鉴定系统(Ribo Prin... 目的对食源性致病金黄色葡萄球菌肠毒素SEA^SEJ基因型分布状况进行调查,并探讨菌株分型与肠毒素基因型分布之间的关联性。方法采用PCR方法扩增金黄色葡萄球菌及肠毒素SEA^SEJ基因型核酸片段,应用全自动微生物基因指纹鉴定系统(Ribo Printer)对菌株进行分型和类聚状况分析。结果分离的24个待测菌株可分为6个亚型,各亚型均匀分布;待测10种肠毒素基因型中,SEI型、SEG型、SEA型和SEB型的出现频率较高,分别占54.2%、41.7%、37.5%和25.0%,同时表达两种以上肠毒素基因型的比率约50%,SEG型和SEI型肠毒素的表达分布具有协同性;金黄色葡萄球菌的溯源性特点与肠毒素分布规律一致。结论食源性金黄色葡萄球菌肠毒素呈现多基因型协同表达的特点,各菌株亚型与肠毒素基因型分布之间存在一定的关联性。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素 全自动微生物基因指纹鉴定系统 基因分型
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金黄色葡萄球菌肠毒素B诱导兔急性上颌窦炎的实验研究 被引量：2
11
作者 卫红齐 王天友 +5 位作者 王秋萍 袁辉 朱政文 刘志勇 邬晓帆 曹忠胜 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第6期577-580,共4页
目的金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)作为超抗原(superantigen)目前被认为可能是导致鼻窦炎发生、发展并向慢性转化的主要因素之一。文中通过向兔上颌窦腔注入不同浓度SEB,明确其能否成功诱导急性上颌窦炎。方... 目的金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)作为超抗原(superantigen)目前被认为可能是导致鼻窦炎发生、发展并向慢性转化的主要因素之一。文中通过向兔上颌窦腔注入不同浓度SEB,明确其能否成功诱导急性上颌窦炎。方法 45只兔随机分成3组,每组15只。每天分别向兔右上颌窦腔注入低浓度SEB(0.3 ng/ml,A组)、中等浓度SEB(3 ng/ml,B组)及高浓度SEB(30ng/ml,C组)各2ml,3组兔左上颌窦腔每天注入2ml等渗盐水作为对照侧。3d、7d及14 d后每组随机选取5只兔处死,取双上颌窦分泌物行普通细菌培养及鼻窦黏膜标本光镜下观察。结果 3 d后,3组兔右上颌窦分泌物普通细菌培养结果均为阴性;7d及14d后,A组右上颌窦分泌物普通细菌培养结果为阴性,B、C组右上颌窦分泌物普通细菌培养阳性率均为100%。光镜下黏膜病理半定量结果示:B、C组与A组比较,3 d后炎性细胞浸润差异有统计学意义(P<0.05),7d及14d后炎性细胞浸润及上皮溃疡形成差异均有统计学意义(P<0.05);C组与B组比较,7d及14d后上皮溃疡形成差异均有统计学意义(P<0.05)。3组兔左上颌窦细菌培养结果均为阴性,黏膜形态学未见明显改变。结论持续灌注中高浓度SEB 7 d可成功诱导急性鼻窦炎,且随着SEB浓度增加鼻窦黏膜形态学改变更加显著。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素 鼻窦炎 黏膜 组织形态学
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牛乳金黄色葡萄球菌分离株超抗原肠毒素基因分型研究 被引量：2
12
作者 孙颖 汤婷婷 +2 位作者 鲍庆晗 郭海勇 崔京春 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第12期14-18,共5页
为研究牛乳金黄色葡萄球菌SP-3分离株携带超抗原肠毒素的基因型,设计合成了金黄色葡萄球菌超抗原肠毒素基因SEA-SEE及TSST-1特异性引物,并以其固有基因femA和femB为阳性对照,以分离菌株DNA为模板,经PCR扩增菌株携带的毒素基因。结果表明... 为研究牛乳金黄色葡萄球菌SP-3分离株携带超抗原肠毒素的基因型,设计合成了金黄色葡萄球菌超抗原肠毒素基因SEA-SEE及TSST-1特异性引物,并以其固有基因femA和femB为阳性对照,以分离菌株DNA为模板,经PCR扩增菌株携带的毒素基因。结果表明,SP-3分离株和阳性对照菌株均含有femA和femB基因,且牛乳分离株携带sea、sec、sed和tst-1 4种超抗原肠毒素基因,为开展动物源超抗原毒素基因系统分型及有效防控金黄色葡萄球菌奶牛乳腺炎奠定基础。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 超抗原 肠毒素 基因分型
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金黄色葡萄球菌在猪肉上的生长以及新型肠毒素基因sek的表达 被引量：2
13
作者 王琼 张荣 +2 位作者 陈娟 龙虎 唐俊妮 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期190-194,共5页
目的：研究金黄色葡萄球菌在猪肉上的生长以及新型肠毒素sek的时序性表达。方法：将实验室保存的三株携带sek基因的金黄色葡萄球菌SA005、SA008和SAB0分别接种于无菌猪肉上37℃静置培养至120 h,每隔12 h取样进行细菌计数以及p H测定,同... 目的：研究金黄色葡萄球菌在猪肉上的生长以及新型肠毒素sek的时序性表达。方法：将实验室保存的三株携带sek基因的金黄色葡萄球菌SA005、SA008和SAB0分别接种于无菌猪肉上37℃静置培养至120 h,每隔12 h取样进行细菌计数以及p H测定,同时收集不同时间点的菌体提取RNA,利用实时荧光定量PCR监测细菌生长过程中sek的相对表达量。结果：三株菌株在猪肉上生长36 h以后进入稳定期,48 h肉上已经出现肉眼可见的金黄色葡萄球菌菌体聚集,120 h肉粒变得粘稠并有黏液渗出;猪肉p H在细菌生长的36 h前变化不大,在120 h已逐渐上升到p H8.85-9.14;三株金黄色葡萄球菌sek的表达量在细菌生长的对数期有一次高表达,随后表达量下降,在生长的稳定后期表达量再次升高,其中,SA005的sek基因在细菌的生长过程中表达量明显高于SA008和SAB0（p〈0.01）。结论：三株金黄色葡萄球菌在猪肉上生长,肠毒素sek基因持续表达但相对表达量因菌株而存在差异,sek基因在转录水平上的高表达将会带来食品安全的潜在威胁。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 猪肉 新型肠毒素sek 荧光实时定量PCR 时序性表达
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金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C在草莓中表达的研究 被引量：3
14
作者 代晓航 郭灵安 魏超 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第9期3516-3520,共5页
目的研究金黄色葡萄球菌在草莓中生长情况及与3种肠毒素SEA、SEB、SEC产生的相关性。方法将实验菌株进行肠毒素分型确认后,分别制备10^4 CFU/g（高）、10^2CFU/g（低）两个浓度菌液,采用浸泡方式人工污染到草莓上,分别于8℃、25℃下贮存... 目的研究金黄色葡萄球菌在草莓中生长情况及与3种肠毒素SEA、SEB、SEC产生的相关性。方法将实验菌株进行肠毒素分型确认后,分别制备10^4 CFU/g（高）、10^2CFU/g（低）两个浓度菌液,采用浸泡方式人工污染到草莓上,分别于8℃、25℃下贮存,贮存过程中参照GB 4789对草莓进行金黄色葡萄球菌计数和金黄色葡萄球菌肠毒素（A-C）检测。结果适宜条件下,无论初始污染程度高低,金黄色葡萄球菌都能在草莓上正常生长代谢并产生肠毒素,特别是SEA的产生较SEB和SEC迅速。其中,25℃贮存条件下,金黄色葡萄球菌累计到10^4 CFU/g以上就可从样品中检测到SEA,累计到10^5 CFU/g以上可以检测到SEC,累计到10^7CFU/g以上可以检测到SEB;8℃贮存条件下,48 h内未检测到肠毒素。结论以草莓作为金黄色葡萄球菌培养基质,获得了金黄色葡萄球菌生长及与3种常见肠毒素产生的相关性,对草莓微生物风险评估及相关标准制订具有参考意义。 展开更多
关键词 草莓 金黄色葡萄球菌 肠毒素
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热诱导潜在食物中毒威胁源重组M型金黄色葡萄球菌肠毒素去折叠及聚合过程 被引量：2
15
作者 刘骥 田万帆 +3 位作者 唐俊妮 陈娟 赵燕英 于基成 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第21期32-45,共14页
热失活工艺是降低加工食品中潜在的细菌和毒素含量的有效手段。M型金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins M,SEM)归属于V型超抗原,具有较弱的催吐活性,是一种潜在的金黄色葡萄球菌所致食物中毒威胁源。本研究利用圆二色光... 热失活工艺是降低加工食品中潜在的细菌和毒素含量的有效手段。M型金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins M,SEM)归属于V型超抗原,具有较弱的催吐活性,是一种潜在的金黄色葡萄球菌所致食物中毒威胁源。本研究利用圆二色光谱、荧光光谱、变性/活性聚丙烯酰胺凝胶电泳监测重组M型金黄色葡萄球菌肠毒素(recombinant staphylococcal enterotoxin M,rSEM)热诱导变性过程。结果表明,在低于40℃时,rSEM具有富含α-螺旋(17%)、β-折叠(32%)、转角(21%)的天然折叠态结构,分子表面唯一的121号色氨酸残基位于β-掌型结构域中相对疏水的环境中。随着温度从42℃升高到55℃,rSEM二级结构中减少的α-螺旋含量被增加的β-折叠/转角含量所弥补,蛋白质分子之间聚集状态未发生明显改变,最大荧光发射波长明显蓝移,同时350 nm和340 nm波长处的荧光强度比表现出反S型曲线,说明42~55℃温和加热可导致另一种形式的rSEM折叠中间态(intermediate state,IS)形成。在55~90℃温度范围内,rSEM二级结构基本维持稳定。与此同时,当加热温度从65℃升高至80℃时,350 nm与340 nm波长处的荧光发射强度比并未显示出蛋白处于完全变性状态,说明在加热过程中rSEM二级结构基本维持稳定,而三级结构具有较大动态变化的可能性,这可能与β-掌型结构域可以通过诱导契合结合具有不同构象的主要组织性相容复合体等位基因产物有关系。此外,在70℃乃至更高的温度,rSEM的聚集程度明显增加并且在90℃时达到最大。综上,rSEM中间态形成、聚合体产生以及稳定的β-折叠/转角结构是该蛋白在高温下依然保持热稳定性的基础。通过对rSEM热诱导去折叠过程的研究有助于阐明rSEM耐热机理,未来利用该方法对其他各类金葡菌肠毒素热失活机制进行类似研究将利于食品安全性生产工艺过程的改善。 展开更多
关键词 M型金黄色葡萄球菌肠毒素 圆二色光谱 荧光光谱 变性/活性聚丙烯酰胺凝胶电泳 热失活
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多重PCR方法快速检测牛乳中金黄色葡萄球菌及其肠毒素基因型 被引量：2
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作者 李荔枝 张军 +3 位作者 胡萍 周国君 王晓静 朱建荣 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2013年第12期34-39,45,共6页
针对金黄色葡萄球菌肠毒素基因A,B,C,D(SEA,SEB,SEC,SED)设计了特异性引物,并以其耐热核酸酶nuc基因作为阳性对照,运用多重PCR方法建立金黄色葡萄球菌及其肠毒素基因型的快速检测方法,通过优化多重PCR反应体系及条件,得到最优组合。结... 针对金黄色葡萄球菌肠毒素基因A,B,C,D(SEA,SEB,SEC,SED)设计了特异性引物,并以其耐热核酸酶nuc基因作为阳性对照,运用多重PCR方法建立金黄色葡萄球菌及其肠毒素基因型的快速检测方法,通过优化多重PCR反应体系及条件,得到最优组合。结果表明,该方法特异性好、检测效率高、能够同时对4种肠毒素进行分型,其中SEA,SEB,SEC,SED的检测灵敏度达到0.072,0.072,0.2268,0.198 g/L,适合运用于牛乳中金黄色葡萄球菌及其肠毒素的快速检测。 展开更多
关键词 多重PCR 金黄色葡萄球菌 肠毒素基因型 牛乳
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金黄色葡萄球菌M型肠毒素原核表达、纯化、鉴定及溶液构象分析 被引量：1
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作者 刘骥 杨帆 +5 位作者 田万帆 龙虎 孙思雨 周玉珊 赵燕英 唐俊妮 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第24期40-46,共7页
葡萄球菌肠毒素M是由金黄色葡萄球菌νSa基因岛编码的分泌型超抗原。本研究将截去N端信号肽的金黄色葡萄球菌M型肠毒素(staphylococcal?enterotoxin?M,SEM)蛋白编码基因亚克隆至原核表达载体p ET-28a(+),构建重组表达质粒p ET-28a(+)-Δ... 葡萄球菌肠毒素M是由金黄色葡萄球菌νSa基因岛编码的分泌型超抗原。本研究将截去N端信号肽的金黄色葡萄球菌M型肠毒素(staphylococcal?enterotoxin?M,SEM)蛋白编码基因亚克隆至原核表达载体p ET-28a(+),构建重组表达质粒p ET-28a(+)-ΔNspsem;随后转化感受态E.coli?Rosetta(DE3)并探讨融合蛋白最佳表达条件;利用Ni2+-Sepharose?4?Fast?Flow亲合层析纯化出His-ΔNsp SEM融合蛋白;经质谱鉴定,纯化的融合蛋白对SEM的氨基酸覆盖率达96.3%;凝血酶切除6×His标签肽后,圆二色谱分析表明ΔNsp SEM重组蛋白富含β-折叠(35%)和β-转角(21%)以及较少α-螺旋(16%)等二级结构;荧光发射谱揭示ΔNsp SEM在278?nm和295?nm波长处激发时具有相同的Trp发射峰(341?nm);十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析表明ΔNsp SEM重组蛋白表现出较高的热稳定性。研究结果表明重组蛋白SEM表达成功,纯化的ΔNsp SEM重组蛋白溶液构象紧密并具有接近天然状态的结构,这为深入研究SEM蛋白的结构与功能提供理论支持。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌M型肠毒素 原核表达 纯化 质谱 圆二色谱 荧光发射谱 热稳定性
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食品中金黄色葡萄球菌肠毒素研究进展
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作者 安刚 《食品安全导刊》 2024年第33期141-143,共3页
金黄色葡萄球菌是一种重要的食源性致病菌,其产生的肠毒素在引发食物中毒方面发挥了关键作用。研究表明,这些毒素具有较强的耐热性,常规的烹饪方法难以完全去除,已成为食品安全监控的重点。本文概述了食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的研究... 金黄色葡萄球菌是一种重要的食源性致病菌,其产生的肠毒素在引发食物中毒方面发挥了关键作用。研究表明,这些毒素具有较强的耐热性,常规的烹饪方法难以完全去除,已成为食品安全监控的重点。本文概述了食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的研究进展,旨在为有效预防和控制肠毒素污染提供参考。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素 食品安全 检测技术
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利用简并引物检测金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因 被引量：1
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作者 刘继超 陈柏儒 +1 位作者 姜铁民 陈历俊 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2015年第5期59-61,共3页
通过设计简并引物建立一种PCR技术同步快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A和B基因的方法。根据金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因编码序列,设计一对特异性简并引物SEAB来扩增靶基因片段,长度分别为105bp和135bp,通过对金黄色葡萄球菌肠毒素A、B... 通过设计简并引物建立一种PCR技术同步快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A和B基因的方法。根据金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因编码序列,设计一对特异性简并引物SEAB来扩增靶基因片段,长度分别为105bp和135bp,通过对金黄色葡萄球菌肠毒素A、B菌株和4株对照菌株进行PCR检测,评价该引物的特异性;对金黄色葡萄球菌肠毒素B的DNA系列10倍稀释,对其灵敏性进行PCR检测。结果显示,金黄色葡萄球菌肠毒素A和B菌株的DNA检测结果呈阳性,4株对照菌株的检测结果呈阴性,通过基因测序证实了PCR产物的特异性,SEB的DNA最低检测浓度为3.58ng,整个检测过程不超过20h。建立了一个特异、快速灵敏的在同一条件下,金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因的PCR检测方法。 展开更多
关键词 PCR 金黄色葡萄球菌 肠毒素 A、b基因
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金黄色葡萄球菌肠毒素B的分离纯化 被引量：1
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作者 朱俊友 李玉锋 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期136-138,共3页
为了分离纯化金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB),在离心、浓缩后,将浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32和葡聚糖凝胶G-75两步柱层析,再经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,获得了电泳纯的金黄色葡萄球菌肠毒素B。实验证明,该简化的二步柱层... 为了分离纯化金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB),在离心、浓缩后,将浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32和葡聚糖凝胶G-75两步柱层析,再经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,获得了电泳纯的金黄色葡萄球菌肠毒素B。实验证明,该简化的二步柱层析分离得到的SEB纯度高,方法简便易行,一般实验室均可采用。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素b 分离纯化
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