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金黄色葡萄球菌肠毒素Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定
被引量：
2
1
作者
徐君英
丁丁
+1 位作者
孙红颖
陈枢青
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期265-270,共6页
目的:制备稳定分泌抗金黄色葡萄球菌肠毒素(SEI)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的性质进行鉴定。方法:以SEI蛋白免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术,经ELISA检测筛选及3次有限稀释,获得目的杂交瘤细胞株;采用杂交瘤细胞免疫小鼠...
目的:制备稳定分泌抗金黄色葡萄球菌肠毒素(SEI)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的性质进行鉴定。方法:以SEI蛋白免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术,经ELISA检测筛选及3次有限稀释,获得目的杂交瘤细胞株;采用杂交瘤细胞免疫小鼠,制备并纯化了单克隆抗体,并对所获得的单克隆抗体进行性质鉴定。结果:最终获得了两株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞8F7与D8,两者分别为IgG2b型与IgG1型;亲和常数分别为9.215×108L.mol-1和1.968×1010L.mol-1;两者均有较强的特异性,与纯化的SEG、SEE、SEC及金黄色葡萄球菌上清液均未有交叉反应;相加实验表明两个单克隆抗体识别的为相同表位。结论:单克隆抗体的成功制备,为初步建立肠毒素SEI的双抗夹心测定方法奠定了基础。
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关键词
肠毒素类
/免疫
学
葡萄球菌
金黄色/免疫学
抗体
单克隆
小鼠
近交BALBC
杂交瘤
酶联
免疫
吸附测定
免疫
球蛋白G
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职称材料
密码子优化提高重组金葡菌肠毒素O在大肠杆菌中的表达水平
2
作者
黄鹏
孙红颖
陈枢青
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期297-303,共7页
目的:优化稀有密码子提高重组肠毒素O的表达量。方法:将带H is标签的肠毒素O成熟肽克隆至pET28a质粒上,采用PCR方法对15个稀有密码子进行突变,将突变后的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),并进行蛋白表达及活性鉴定。结果:通过稀有密码...
目的:优化稀有密码子提高重组肠毒素O的表达量。方法:将带H is标签的肠毒素O成熟肽克隆至pET28a质粒上,采用PCR方法对15个稀有密码子进行突变,将突变后的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),并进行蛋白表达及活性鉴定。结果:通过稀有密码子优化,重组肠毒素O的表达量由菌液总蛋白的7.49%提高至19.8%;小鼠淋巴细胞增殖试验表明,通过密码子优化的肠毒素O具有刺激淋巴细胞增殖的作用,并且其增殖作用与未优化前的肠毒素O相当。结论:稀有密码子优化能够有效增加肠毒素O的表达量。
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关键词
葡萄球菌
金黄色/免疫学
肠毒素类
/免疫
学
密码子
基因表达
遗传载体
质粒
突变
细胞增殖
淋巴细胞
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职称材料
题名
金黄色葡萄球菌肠毒素Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定
被引量：
2
1
作者
徐君英
丁丁
孙红颖
陈枢青
机构
浙江大学药学院药理毒理与生化药学研究所
北京中医药大学生物制药系
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期265-270,共6页
基金
浙江省科技厅重大科技攻关项目(2004C13041)
文摘
目的:制备稳定分泌抗金黄色葡萄球菌肠毒素(SEI)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的性质进行鉴定。方法:以SEI蛋白免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术,经ELISA检测筛选及3次有限稀释,获得目的杂交瘤细胞株;采用杂交瘤细胞免疫小鼠,制备并纯化了单克隆抗体,并对所获得的单克隆抗体进行性质鉴定。结果:最终获得了两株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞8F7与D8,两者分别为IgG2b型与IgG1型;亲和常数分别为9.215×108L.mol-1和1.968×1010L.mol-1;两者均有较强的特异性,与纯化的SEG、SEE、SEC及金黄色葡萄球菌上清液均未有交叉反应;相加实验表明两个单克隆抗体识别的为相同表位。结论:单克隆抗体的成功制备,为初步建立肠毒素SEI的双抗夹心测定方法奠定了基础。
关键词
肠毒素类
/免疫
学
葡萄球菌
金黄色/免疫学
抗体
单克隆
小鼠
近交BALBC
杂交瘤
酶联
免疫
吸附测定
免疫
球蛋白G
Keywords
Enterotoxins/immunol
StaphylococcusMice, inbred BALB C
Hybridomas
Immunoglobulin Gaureu/immunol
Antibodies,monoclonal Enzyme-linked immunosorbent assay
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
密码子优化提高重组金葡菌肠毒素O在大肠杆菌中的表达水平
2
作者
黄鹏
孙红颖
陈枢青
机构
浙江大学药学院药物毒理与生化药学研究所
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期297-303,共7页
文摘
目的:优化稀有密码子提高重组肠毒素O的表达量。方法:将带H is标签的肠毒素O成熟肽克隆至pET28a质粒上,采用PCR方法对15个稀有密码子进行突变,将突变后的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),并进行蛋白表达及活性鉴定。结果:通过稀有密码子优化,重组肠毒素O的表达量由菌液总蛋白的7.49%提高至19.8%;小鼠淋巴细胞增殖试验表明,通过密码子优化的肠毒素O具有刺激淋巴细胞增殖的作用,并且其增殖作用与未优化前的肠毒素O相当。结论:稀有密码子优化能够有效增加肠毒素O的表达量。
关键词
葡萄球菌
金黄色/免疫学
肠毒素类
/免疫
学
密码子
基因表达
遗传载体
质粒
突变
细胞增殖
淋巴细胞
Keywords
Staphylococcus aureus/immunol
Enterotoxins/immunol
Codon
Gene expression
Genetic vectors
Plasmids
Mutation
Cell proliferation
Lymphocytes
分类号
Q93 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
金黄色葡萄球菌肠毒素Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定
徐君英
丁丁
孙红颖
陈枢青
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009
2
在线阅读
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职称材料
2
密码子优化提高重组金葡菌肠毒素O在大肠杆菌中的表达水平
黄鹏
孙红颖
陈枢青
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011
0
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职称材料
已选择
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