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固化金属离子亲和层析富集磷酸化多肽方法的选择及优化
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作者 李耀军 罗元明 +3 位作者 武淑珍 高友鹤 刘彦信 郑德先 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第1期1-4,共4页
在磷酸化蛋白质组学研究中,根据是否需要对待富集样品进行甲酯化处理,可将固化金属离子亲和层析(IMAC)方法分为两类,即需要甲酯化处理的IMAC方法(ME-IMAC)和不需要甲酯化处理的IMAC方法(Non-ME-IMAC)。要实现对磷酸化多肽的有效富集和鉴... 在磷酸化蛋白质组学研究中,根据是否需要对待富集样品进行甲酯化处理,可将固化金属离子亲和层析(IMAC)方法分为两类,即需要甲酯化处理的IMAC方法(ME-IMAC)和不需要甲酯化处理的IMAC方法(Non-ME-IMAC)。要实现对磷酸化多肽的有效富集和鉴定,就必须对富集方法进行选择和优化。利用基质辅助激光解析离子化串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对两种方法富集的磷酸化多肽进行了比较研究。结果表明,ME-IMAC方法容易发生样品丢失,质谱结果的分析也比较复杂,而Non-ME-IMAC方法则不仅操作简单而且富集效果理想。另外,优化了Non-ME-IMAC方法的实验条件,指出最佳的结合溶液是8%ACN/0.3%TFA,最佳的洗脱溶液是0.1mol/L EDTA(pH值8.0),从而建立了一套完整而简单有效的磷酸化多肽富集方法。 展开更多
关键词 磷酸化多肽 甲酯化反应 固化的金属离子亲和层析 质谱
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铜离子与SALI3-2蛋白的相互作用 被引量:2
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作者 唐玉林 高占 +3 位作者 徐宏 贺建芝 董一含 郑易之 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期128-134,共7页
用1/2 MS固体培养基培养拟南芥幼苗,研究了CuCl2对转Sali3-2基因植株生长的影响,发现转基因植株Sali3-2的表达可提高其耐受Cu2+胁迫的能力.进一步克隆Sali3-2基因,表达并纯化了缺失信号肽的SALI3-2蛋白.利用固定金属离子亲和色谱(IMAC)... 用1/2 MS固体培养基培养拟南芥幼苗,研究了CuCl2对转Sali3-2基因植株生长的影响,发现转基因植株Sali3-2的表达可提高其耐受Cu2+胁迫的能力.进一步克隆Sali3-2基因,表达并纯化了缺失信号肽的SALI3-2蛋白.利用固定金属离子亲和色谱(IMAC)分析发现,Cu2+能够与SALI3-2蛋白结合.通过荧光光谱及圆二色光谱(CD)进一步研究了Cu2+与SALI3-2蛋白间的键合机理.结果表明,Cu2+可引起SALI3-2蛋白内源性荧光猝灭,其猝灭机制为静态猝灭;Cu2+与SALI3-2蛋白的结合常数为8.89×106,结合位点数为1.6.CD分析显示,Cu2+与SALI3-2蛋白的结合未使SALI3-2蛋白二级结构发生明显改变.由此推测,在高浓度铜离子胁迫下,SALI3-2蛋白通过结合一定数量的Cu2+使蛋白的构象发生改变,这可能是SALI3-2蛋白的表达使植物耐受Cu2+胁迫能力提高的分子机制之一. 展开更多
关键词 离子 SALI3-2蛋白 金属离子亲和层析 荧光光谱 圆二色光谱
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