猴金属硫蛋白MT1 α-结构域中Cys33和Cys34的突变对蛋白质稳定性的影响

1

作者 余文浩 蔡斌 +2 位作者 高原 陈东 黄仲贤 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第4期569-575,共7页

重组猴金属硫蛋白 MT1及其 C3 3 M,C3 4S和 C3 3 M/ C3 4S突变体蛋白的蛋白质快速液相色谱( FPLC)分析表明 ,突变体蛋白 C3 4S和 C3 3 M/ C3 4S存在着两个稳定的流分 f1和 f2 .CD光谱和重金属离子分析表明 ,突变体蛋白多流分不仅与半胱... 重组猴金属硫蛋白 MT1及其 C3 3 M,C3 4S和 C3 3 M/ C3 4S突变体蛋白的蛋白质快速液相色谱( FPLC)分析表明 ,突变体蛋白 C3 4S和 C3 3 M/ C3 4S存在着两个稳定的流分 f1和 f2 .CD光谱和重金属离子分析表明 ,突变体蛋白多流分不仅与半胱氨酸和 Cd2 + 离子结合方式和构型有关 ,还与金属结合量有关 .突变体蛋白多流分的结果表明 ,在把猴金属硫蛋白 α-结构域中的 Cys3 3和 Cys3 4突变为非半胱氨酸残基以建立 β-β结构域的金属硫蛋白时 ,可导致蛋白形成多种结构形式 .这表明 α-结构域在稳定金属硫蛋白的结构中起着重要的作用 。 展开更多

关键词 金属硫蛋白mt1α-结构域 Cys33 Cys34 蛋白质 稳定性 突变体 圆二色谱 电喷雾质谱 半胱氨酸 结构

在线阅读 下载PDF 职称材料

人金属硫蛋白-3的α结构域的表达及其性质研究

2

作者 王寒松 俞梅敏 茹炳根 《北京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期470-476,共7页

参考E .coli偏爱密码子 ,设计并合成人MT 3α结构域 (α MT 3)的DNA片段 ,克隆到表达载体pGEX 4T 1中。经IPTG诱导 ,在E .coli中高效表达出谷胱甘肽 S 转移酶 (GST) α融合蛋白。凝血酶酶切融合蛋白 (用CdCl2 或ZnSO4辅助 )后 ,得到... 参考E .coli偏爱密码子 ,设计并合成人MT 3α结构域 (α MT 3)的DNA片段 ,克隆到表达载体pGEX 4T 1中。经IPTG诱导 ,在E .coli中高效表达出谷胱甘肽 S 转移酶 (GST) α融合蛋白。凝血酶酶切融合蛋白 (用CdCl2 或ZnSO4辅助 )后 ,得到纯化的结合镉或锌的α MT 3蛋白。质谱分子量检测及氨基酸组成分析证明得到了目的蛋白。紫外吸收光谱及圆二色性光谱研究重组α MT 3的结构。MT 3的与其余MT的α结构域不同 ,α MT 3的圆二色性光谱在 2 2 0nm左右为负峰 ,说明α MT 3可能包含一个α 螺旋的二级结构。 展开更多

关键词 人金属硫蛋白-3 α-mt-3 α结构域 基因克隆 基因表达 α-螺旋 性质

在线阅读 下载PDF 职称材料

日粮锌水平对生长肉兔生产性能、血清肝脏抗氧化酶活性和金属硫蛋白-1基因表达的影响 被引量：15

3

作者 徐振华 李福昌 秦应和 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期337-342,共6页

本文旨在探讨日粮不同锌添加水平和锌源对2～3月龄生长肉兔生产性能、血清肝脏抗氧化酶活性和金属硫蛋白-1(MT-1)基因表达的影响。选用2月龄新西兰肉兔70只,随机分为7个处理,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别以硫酸锌和蛋氨... 本文旨在探讨日粮不同锌添加水平和锌源对2～3月龄生长肉兔生产性能、血清肝脏抗氧化酶活性和金属硫蛋白-1(MT-1)基因表达的影响。选用2月龄新西兰肉兔70只,随机分为7个处理,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别以硫酸锌和蛋氨酸锌形式添加40、80和120mg/kg锌,预试期7d,正试期23d。结果表明:日粮锌添加水平对生长肉兔平均日增重(ADG)和料重比(F/G)无显著性影响(P>0.05),对平均日采食量(ADI)影响显著(P<0.05);不同锌水平对血清铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性影响显著(P<0.05),对肝脏CuZn-SOD和GSH-Px活性影响极显著(P<0.01);随日粮锌水平的增加,肝脏、肾脏MT-1mRNA相对表达丰度呈先升高后降低趋势(P<0.01),80mg/kg添加水平时2种锌源MT-1mRNA相对表达丰度均达到最高。MT-1mRNA相对表达丰度可以作为评价动物机体锌营养状况的敏感指标。 展开更多

关键词 锌 生长肉兔 生产性能 抗氧化酶 金属硫蛋白-1 MRNA

在线阅读 下载PDF 职称材料

日粮锌对肉兔生产性能、机体抗氧化酶和金属硫蛋白-1表达的影响 被引量：5

4

作者 秦应和 徐振华 李福昌 《饲料研究》 CAS 北大核心 2009年第12期57-58,共2页

探讨了日粮添中加不同水平和来源的锌对断奶～2月龄生长肉兔生产性能、血清肝抗氧化酶活性和金属硫蛋白-1(MT-1)基因表达的影响。选用140只35日龄断奶新西兰肉兔,随机分为7个处理,每处理20只兔,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中... 探讨了日粮添中加不同水平和来源的锌对断奶～2月龄生长肉兔生产性能、血清肝抗氧化酶活性和金属硫蛋白-1(MT-1)基因表达的影响。选用140只35日龄断奶新西兰肉兔,随机分为7个处理,每处理20只兔,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别以硫酸锌和蛋氨酸锌的形式添加40、80和120mg/kg锌,预试期7d,正试期18d。结果表明:日粮中添加不同蛋氨酸锌水平对生长肉兔平均日增质量(ADG)影响显著,以80mg/kg蛋氨酸锌组最高;日粮中锌源及添加水平对平均日采食量(ADI)和料重比(F/G)影响不显著;日粮锌源及添加水平对血清铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)活性影响极显著,对血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量影响显著;极显著影响肝GSH-Px活性,显著影响肝CuZn-SOD活性和MDA含量;日粮锌源及添加水平极显著影响肝和肾MT-1mRNA相对表达丰度,蛋氨酸锌组MT-1mRNA相对表达丰度在日粮锌添加水平为80mg/kg时达到最大值。这说明,日粮中添加不同水平和来源的锌对早期生长肉兔的增质量、血清肝抗氧化酶活性和MT-1基因表达有明显的影响,适宜的锌添加水平有利于肉兔生产性能的发挥。 展开更多

关键词 锌 生长肉兔 生产性能 抗氧化酶 金属硫蛋白-1 MRNA

在线阅读 下载PDF 职称材料

金属硫蛋白和同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞PAI-1活性及mRNA表达的影响 被引量：6

5

作者 张辉 党瑜华 张菲斐 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2004年第3期476-478,共3页

目的 :探讨同型半胱氨酸 (homocysteine ,Hcy)与金属硫蛋白 (metallothionein ,MT)对人脐静脉内皮细胞 (hu manumbilicalveinendothelialcells,HUVECs)纤溶酶原激活物抑制剂 (Plasminogenactivatorinhibitor 1 ,PAI 1 )活性及mR NA表达... 目的 :探讨同型半胱氨酸 (homocysteine ,Hcy)与金属硫蛋白 (metallothionein ,MT)对人脐静脉内皮细胞 (hu manumbilicalveinendothelialcells,HUVECs)纤溶酶原激活物抑制剂 (Plasminogenactivatorinhibitor 1 ,PAI 1 )活性及mR NA表达的影响。方法 :0 .1mmol/L、0 .5mmol/L、1 .0mmol/LHcy及 1 .0mmol/LHcy加不同浓度MT(1nmol/L ,5nmol/L ,1 0nmol/L ,5 0nmol/L)分别作用HUVECs 6h后 ,用PAI 1发色底物法检测PAI 1活性 ;用RT PCR技术检测PAI 1mRNA。结果 :Hcy呈浓度依赖性地增加HUVECsPAI 1活性及其mRNA表达 (P均 <0 .0 1 ) ;不同浓度的MT均可显著降低Hcy所致的PAI 1活性及其mRNA表达的增高 (P均 <0 .0 5 ) ,且呈剂量依赖性。结论 :MT可降低Hcy所致的PAI 展开更多

关键词 金属硫蛋白 同型半胱氨酸 人脐静脉内皮细胞 组织型纤溶酶原激活物抑制剂-1

在线阅读 下载PDF 职称材料

锌对缺血再灌注损伤家兔心肌金属硫蛋白-1基因表达的影响 被引量：1

6

作者 沈炳玲 颜利求 +2 位作者 刘继英 邢冬红 秦毅 《中国心血管杂志》 2005年第3期161-163,共3页

目的研究锌对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用RT-PCR技术,检测分析金属硫蛋白-1(MT-1)基因在家兔缺血再灌注损伤心肌的表达及锌对其基因表达的调节。结果各组家兔心肌组织中均有MT-1基因的表达,缺血再灌注组MT-1基因的表达... 目的研究锌对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用RT-PCR技术,检测分析金属硫蛋白-1(MT-1)基因在家兔缺血再灌注损伤心肌的表达及锌对其基因表达的调节。结果各组家兔心肌组织中均有MT-1基因的表达,缺血再灌注组MT-1基因的表达较正常对照组明显下降(P<0.01),补锌再灌注组MT-1基因的表达较缺血再灌注组明显上调(P<0.01)。结论锌对家兔心肌缺血再灌注损伤的分子机制中,调节其心肌组织中MT-1基因转录水平的表达可能是一条重要途径。 展开更多

关键词 锌 缺血再灌注损伤 金属硫蛋白-1 反转录聚合酶链式反应

在线阅读 下载PDF 职称材料

Balb/C小鼠金属硫蛋白-1 cDNA的克隆及序列分析 被引量：1

7

作者 林琳 丁文勇 赵宝昌 《吉林大学自然科学学报》 CSCD 北大核心 2001年第1期85-87,共3页

以 RNA一步提取法 ,采用 RT-PCR技术成功地将 Balb/ C小鼠金属硫蛋白 -1 c DNA基因片段克隆于质粒 p UC-1 9上 ,并对克隆片段 c

关键词 BALB/C小鼠 逆转录聚合梅链式反应 序列分析 基因克隆 核苷酸 RT-PCR技术 金属硫蛋白-1CDNA

在线阅读 下载PDF 职称材料

膜型基质金属蛋白酶-1在圆锥角膜中表达的研究

8

作者 曾昌洪 邓应平 +3 位作者 王琳 罗清礼 孙晓萍 曾树森 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期91-91,共1页

关键词 膜型基质金属蛋白酶-1 圆锥角膜 免疫组织化学法 mt1-MMP matrix 正常角膜 角膜白斑

在线阅读 下载PDF 职称材料

食管癌组织中MT-1-2与-3的表达差异及临床意义 被引量：4

9

作者 李振华 田子强 +3 位作者 丛斌 张月峰 温士旺 李勇 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第15期1091-1095,共5页

目的:金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类广泛存在于生物体体内的低分子量、富含半胱氨酸的蛋白质。本研究旨在明确MT-1、-2和MT-3在食管癌中的表达差异以及MT-1、-2和MT-3的表达量与各临床病理特征的关系。方法:随机选取2008年7月至... 目的:金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类广泛存在于生物体体内的低分子量、富含半胱氨酸的蛋白质。本研究旨在明确MT-1、-2和MT-3在食管癌中的表达差异以及MT-1、-2和MT-3的表达量与各临床病理特征的关系。方法:随机选取2008年7月至2009年7月河北医科大学第四医院胸外科行手术治疗的食管癌患者114例,其中,男64例,女50例;年龄40～75岁,平均年龄61岁。胸上段食管癌21例,肠中段食管癌58例,肠下段食管癌35例。依据国际抗癌联盟(UICC)食管癌TNM分期(2009年):Ⅱa期34例,Ⅱb期36例,Ⅲ期31例,Ⅳ期13例。组织类型均为鳞癌;组织学分级为高分化59例,中分化癌36例,低分化癌19例。应用Western blot检测肿瘤组织及切缘正常组织中MT-1、-2和MT-3的表达情况,对MT-1、-2和MT-3的表达量与临床病理参数,以及MT-1、-2与MT-3表达的关系进行分析。结果:MT-1、-2和MT-3在食管癌组织中的表达量均高于切缘正常组织(MT-1、-2t=5.214,P<0.01),(MT-3t=4.287,P<0.01),且均与肿瘤组织病理分期(MT-1、-2 r_s=0.896,P<0.01),(MT-3 r_s=-0.501,P<0.01),分化程度(MT-1、-2 r_s=-0.548,P<0.01),(MT-3 r_s=0.664,P<0.01)有关,与肿瘤部位(MT-1、-2 r_s=0.253,P>0.05),(MT-3r_s0.172,P>0.05)无关。结论:MT-1、-2和MT-3在食管癌组织中均存在高表达,其表达水平与食管癌的发生、发展及组织分化密切相关,而且MT-3在食管癌组织中的表达规律与MT-1,-2有显著不同。 展开更多

关键词 食管癌 金属硫蛋白-1 金属硫蛋白-2 金属硫蛋白-3 WESTERN BLOT

在线阅读 下载PDF 职称材料

莱菔硫烷抑制HepG-2细胞MMP-9的活性以及ERK1/2磷酸化

10

作者 刘伟 刘建平 +2 位作者 冯秀芝 陈锐 丁年良 《中华中医药学刊》 CAS 2011年第6期1374-1377,共4页

目的：探讨莱菔硫烷（su lforaphane,SFN）对肝癌细胞系HepG-2细胞基质金属蛋白酶（m atrix m etallo-prote inase,MMP）-9的活性及对细胞外信号调节激酶（extracelluar signal-regu lated k inase,ERK）1/2磷酸化的影响。方法：体外培... 目的：探讨莱菔硫烷（su lforaphane,SFN）对肝癌细胞系HepG-2细胞基质金属蛋白酶（m atrix m etallo-prote inase,MMP）-9的活性及对细胞外信号调节激酶（extracelluar signal-regu lated k inase,ERK）1/2磷酸化的影响。方法：体外培养HepG-2细胞,用SFN预处理后,四氮唑盐酶还原法检测细胞的增殖情况,以及LDH的漏出率;明胶酶谱实验和实时荧光定量PCR检测MMP-9的酶活性和mRNA表达水平;W estern b lot检测ERK1/2的磷酸化情况;最后采用定量实时PCR法检测SFN对HepG-2细胞表达Raf激酶抑制蛋白（Raf k inase inh ib itorprote in,RK IP）,Spred-1和Spred-2 mRNA的影响。结果：0,20,40,50μM SFN处理24~72h后,均能抑制HepG-2的生长,LHD漏出率实验显示SFN对细胞无明显的毒性;SFN能明显抑制MMP-9的活性和mRNA的表达水平,同时能抑制ERK1/2的磷酸化。另外,SFN能明显提高RK IP、Spred-1和Spred-2 mRNA的表达水平。结论：SFN对HepG-2细胞生长以及MMP-9的活性具有抑制作用,它可能通过抑制ERK1/2磷酸化,诱导RK IP,Spred-1和Spred-2表达而发挥抗肿瘤的作用。 展开更多

关键词 莱菔硫烷 肝细胞癌 基质金属蛋白酶-9 细胞外信号调节激酶1/2

在线阅读 下载PDF 职称材料

呫吨酮并吡啶衍生物XP-16诱导人肺癌A549细胞凋亡 被引量：1

11

作者 戴支凯 杨成芳 +3 位作者 陈毅飞 蒋君男 车冠华 覃江克 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期838-842,共5页

目的探讨呫吨酮并吡啶衍生物5,9-二(2-吡咯烷基乙酰氨基)-7H-吡啶并[4,3-c]呫吨-7-酮(XP-16)对人肺癌A549细胞的抗肿瘤作用及其可能作用机制。方法通过MTT法、细胞形态学和克隆实验观察XP-16对A549细胞增殖的影响;应用Hoechst 33258和P... 目的探讨呫吨酮并吡啶衍生物5,9-二(2-吡咯烷基乙酰氨基)-7H-吡啶并[4,3-c]呫吨-7-酮(XP-16)对人肺癌A549细胞的抗肿瘤作用及其可能作用机制。方法通过MTT法、细胞形态学和克隆实验观察XP-16对A549细胞增殖的影响;应用Hoechst 33258和PI双染法观察细胞凋亡;荧光分光光度计检测细胞内钙([Ca2+]i)及线粒体膜电位;qRT-PCR检测Bad和金属硫蛋白1A(metallothionein 1A,MT-1A)mRNA表达。结果 XP-16能抑制A549细胞增殖,呈剂量和时间依赖性。XP-16作用A549细胞24 h后,A549细胞出现染色质聚集、核碎裂等典型的凋亡形态学改变;随XP-16剂量的增加,A549细胞凋亡百分率逐渐增大。XP-16作用后,A549细胞的[Ca2+]i和线粒体膜电位降低、Bad和MT-1A mRNA的表达增加。结论 XP-16具有诱导A549细胞凋亡的作用,可能与其降低[Ca2+]i和线粒体膜电位有关。MT-1A表达的上调可能是[Ca2+]i降低的结果。 展开更多

关键词 5 9-二(2-吡咯烷基乙酰氨基)-7H-吡啶并[4 3-c] 呫吨-7-酮 人肺癌A549细胞 线粒体膜电位 凋亡 金属硫蛋白1A 细胞内钙

在线阅读 下载PDF 职称材料

脑络通颗粒对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化血管重构的影响 被引量：4

12

作者 严士海 张建平 +2 位作者 王海丹 高峰 朱长乐 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期480-484,共5页

目的观察脑络通颗粒(制首乌、黄精、海藻等)对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型的影响。方法高脂饲料饲养30只ApoE-/-小鼠10个月,随机分为模型组、脑络通组(6.67 g/kg)、辛伐他汀组(6.67 mg/kg),每组10只。给药后小鼠取血清,生化法检测血脂... 目的观察脑络通颗粒(制首乌、黄精、海藻等)对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型的影响。方法高脂饲料饲养30只ApoE-/-小鼠10个月,随机分为模型组、脑络通组(6.67 g/kg)、辛伐他汀组(6.67 mg/kg),每组10只。给药后小鼠取血清,生化法检测血脂;取主动脉,Masson染色法观察血管胶原/面积比;Wetern blot检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)、基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP2)的水平。结果脑络通能调整血脂水平,使血管胶原/面积比增加(P<0.01),明显降低MMP2、MMP9、MT1-MMP水平(P<0.05),明显升高TIMP1、TIMP2水平(P<0.05)。与辛伐他汀组相当。结论脑络通具有改善血管重构的作用,其机制可能与降低MMP2、MMP9、MT1-MMP水平,增加TIMP1、TIMP2的表达有关。 展开更多

关键词 脑络通颗粒 APOE^-/-小鼠 动脉粥样硬化 基质金属蛋白酶(MMP2、MMP9) 膜型基质金属蛋白酶1(mt1-MMP) 基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP1、TIMP2)

在线阅读 下载PDF 职称材料