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诱导性多能干细胞构建策略及其提高重编程效率的方法 被引量:1
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作者 李佳佳 马利兵 +1 位作者 陈秀莉 籍凤宇 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期41-48,共8页
以Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc等转录因子于体细胞中异位表达,可获得具有胚胎干细胞特性的诱导性多能干细胞(iPSCs),但是iPSCs技术的重编程效率和应用于临床上的安全性却都很低。目前,iPSCs的研究集中于3个方面:一是增加iPSCs技术的重编程... 以Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc等转录因子于体细胞中异位表达,可获得具有胚胎干细胞特性的诱导性多能干细胞(iPSCs),但是iPSCs技术的重编程效率和应用于临床上的安全性却都很低。目前,iPSCs的研究集中于3个方面:一是增加iPSCs技术的重编程效率;二是增加iPSCs应用于临床时的安全性;三是开创新的构建iPSCs的方法。第一个方面通过调整体细胞的表观遗传特性和细胞信号网络来达到;第二个方面可通过减少致癌性因子的使用及选择合适的载体系统来达到。而且,一些小分子化合物和调节细胞信号网络的方法也被用于诱导体细胞重编程为iPSCs。相对于仅仅使用转录因子重编程体细胞为iPSCs,使用小分子化合物或调节细胞信号网络的方法重编程体细胞为iPSCs的效率更高,而且通过这种方法获得的iPSCs的有更高的临床安全性。新构建iPSCs的方式与依赖含转录因子表达载体构建iPSCs的传统模式区别较大,它们的临床安全性或(和)重编程效率也得到了极大提高。使用4个转录因子的重组蛋白或体外合成并修饰的转录因子的mRNA已经能成功构建iPSCs;而使用miRNAs高效率重编程小鼠和人的体细胞为iPSCs的方法则开创了脱离转录因子重编程体细胞的全新策略。 展开更多
关键词 诱导性多能干细胞 转录因子 载体系统 重编程效率 安全性 全新策略
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不同病毒感染方法对山羊体细胞重编程效率的影响
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作者 宋辉 李卉 王锋 《安徽农业科学》 CAS 2017年第32期89-90,104,共3页
[目的]检测2种病毒感染方法(悬浮感染和贴壁感染)对体细胞重编程效率的影响。[方法]采用慢病毒作为载体携带多能因子分别使用悬浮感染和贴壁感染2种方法感染正常山羊体细胞,统计克隆形成率。[结果]悬浮感染和贴壁感染的平均克隆率分别为... [目的]检测2种病毒感染方法(悬浮感染和贴壁感染)对体细胞重编程效率的影响。[方法]采用慢病毒作为载体携带多能因子分别使用悬浮感染和贴壁感染2种方法感染正常山羊体细胞,统计克隆形成率。[结果]悬浮感染和贴壁感染的平均克隆率分别为0.44‰和0.31‰,悬浮感染的效果要显著地优于贴壁感染。[结论]悬浮感染的方式更利于山羊成纤维细胞重编程。 展开更多
关键词 诱导性多能干细胞 病毒 重编程效率
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小鼠骨髓间充质干细胞、骨髓单核细胞和胚胎成纤维细胞重编程为诱导性多能干细胞的效率比较
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作者 王尧 王雷 +4 位作者 陆玉华 范向军 朱铭岩 朱沙俊 王志伟 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1304-1311,共8页
目的比较小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)、小鼠骨髓单核细胞(BM-MNCs)和小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)重编程为诱导性多能干细胞(iPS细胞)的效率。方法用慢病毒LV-ef1a-mOct4-IRES-EGFP、LV-ef1amSox2-IRES-EGFP、LV-ef1a-mKlf4-IRES-EGFP和LV... 目的比较小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)、小鼠骨髓单核细胞(BM-MNCs)和小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)重编程为诱导性多能干细胞(iPS细胞)的效率。方法用慢病毒LV-ef1a-mOct4-IRES-EGFP、LV-ef1amSox2-IRES-EGFP、LV-ef1a-mKlf4-IRES-EGFP和LV-ef1a-mc-Myc-IRES-EGFP感染BMSCs、BMMNCs和MEFs,通过计算碱性磷酸酶染色阳性克隆数比较这3种细胞重编程为iPS细胞的效率。用胚胎干细胞表面标记检测、胚胎干细胞内源基因检测、拟胚体形成实验和畸胎瘤形成实验验证重编程获得的iPS细胞的多能性。结果起源于小鼠BMSCs、BM-MNCs及MEFs的3种iPS细胞均能形成边缘光整的致密克隆,可表达干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1,并能在体内外分化为三胚层组织。但是BMSCs来源的碱性磷酸酶阳性克隆数低于BM-MNCs和MEFs来源的克隆数。结论小鼠BMSCs、BM-MNCs及MEFs均可重编程为iPS细胞,但BMSCs重编程为iPS细胞的效率低于BM-MNCs和MEFs。 展开更多
关键词 诱导性多潜能干细胞 重编程效率 骨髓间充质干细胞 骨髓单核细胞 小鼠胚胎成纤维细胞
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生物力学因素调控细胞表观遗传状态促进细胞直接重编程
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作者 宋阳 李松 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期90-90,共1页
目的细胞直接重编程技术可以有目的地实现不同成体细胞表型间的直接转换,有效填补因后分裂细胞缺失造成的不可逆组织损伤退变。但是,由于不同细胞类型间表观遗传差异形成的壁垒阻碍,极大地制约了成体细胞的直接重编程效率,继而阻碍了该... 目的细胞直接重编程技术可以有目的地实现不同成体细胞表型间的直接转换,有效填补因后分裂细胞缺失造成的不可逆组织损伤退变。但是,由于不同细胞类型间表观遗传差异形成的壁垒阻碍,极大地制约了成体细胞的直接重编程效率,继而阻碍了该技术的临床应用。方法本研究借助成年小鼠的成纤维细胞向神经元细胞直接重编程研究模型,通过经典的水凝胶基质刚度和新颖的细胞芯片技术对成体细胞施加不同的力学刺激,通过调控成体细胞的染色质可及性,促进成纤维细胞向神经元的重编程。同时借助m RNA-金纳米探针实现重编程细胞的分选和工程转化。结果中间硬度(~20 k Pa)的基质刚度水凝胶可以通过解聚F-actin的方式,促进乙酰化转移酶(HAT)核转移,通过激活核内HAT提高细胞乙酰化水平,促进细胞重编程效率由3%提高到10%;而细胞芯片对成纤维细胞施加瞬时细胞核形变,则可以通过解聚细胞核骨架Lamin A/C,降低组蛋白和DNA的甲基化修饰H3K9me3与5-m C,促进细胞重编程效率由3%提高到~25%。最后,在重编程启动后的48 h内,借助m RNA-金纳米探针可以有效分选重编程神经元细胞至高于90%的纯度。结论差异化的力学刺激可以通过不同的信号传递方式将力学信号转导进入细胞核,并进一步影响细胞表观遗传修饰水平,促进细胞重编程效率。 展开更多
关键词 力学刺激 成纤维细胞 重编程效率 表观遗传 神经元细胞 组织损伤 信号传递 细胞类型
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