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细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI-Eg95-EgA31质粒构建及鉴定被引量：16: 1; 作者周辉李文桂《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期308-311,共4页; 目的构建并鉴定细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI-Eg95-EgA31质粒。方法从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后抽提总RNA为模板,采用RT-PCR方法分别扩增Eg95和EgA31编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)扩增Eg95-EgA31融合基... 展开更多; 关键词细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pbi-eg95-ega31质粒构建鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗构建及鉴定被引量：28: 2; 作者周必英陈雅棠 +1 位作者李文桂杨梅《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期502-506,共5页; 目的构建和鉴定细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31融合基因疫苗。方法自行设计引物,从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后提取总RNA为模板,通过RT-PCR分别扩增Eg95和EgA31抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)... 展开更多; 关键词细粒棘球绦虫重组Bb—Eg95-ega31融合基因疫苗构建鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗诱导小鼠免疫应答的动态观察被引量：6: 3; 作者周必英陈雅棠 +1 位作者李文桂杨梅《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期99-102,共4页; 目的:观察细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后其免疫应答的动态变化。方法:将疫苗分别采用口服灌胃和鼻腔内接种免疫BALB/c鼠,分别于免疫后2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周用ELISA法测定免疫小鼠血清中Ig... 展开更多; 关键词细粒棘球绦虫重组BB-EG95-ega31疫苗免疫应答; 在线阅读下载PDF 职称材料

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后Th1/Th2型免疫应答的动态观察被引量：5: 4; 作者周必英陈雅棠 +1 位作者李文桂杨梅《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期327-331,共5页; 目的:动态观察细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后Th1/Th2型免疫应答的变化。方法:将5×108克隆形成单位(CFU)和5×105CFU疫苗分别采用口服灌胃和鼻腔内接种免疫BALB/c鼠,在... 展开更多; 关键词细粒棘球绦虫重组BB-EG95-ega31疫苗免疫球蛋白 TH1 TH2 细胞因子; 在线阅读下载PDF 职称材料

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗诱导小鼠脾细胞亚群变化的研究被引量：4: 5; 作者周必英陈雅棠 +1 位作者李文桂杨梅《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期211-214,共4页; 目的探讨细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫和Eg原头节攻击后小鼠的囊重抑制率及脾细胞亚群的变化。方法将细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗分别采用皮下注射、肌肉注射、鼻腔内接种和口服灌胃4种途径免疫BALB/c小... 展开更多; 关键词细粒棘球绦虫重组Bb—Eg95-ega31疫苗脾细胞亚群; 在线阅读下载PDF 职称材料

细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95构建及其在根癌农杆菌LBA4404中表达效率的研究被引量：1: 6; 作者周辉李文桂叶艳菊《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期977-980,共4页; 目的:构建细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95,分析其在根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,At)LBA4404株中的表达效率。方法:从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后抽提总RNA,采用RT-PCR方法扩增Eg95编码基因,将该基因定向克隆到植物... 展开更多; 关键词细粒棘球绦虫重组质粒pbi-eg95 根癌农杆菌构建表达效率; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI-Eg95-EgA31质粒构建及鉴定被引量：16: 1; 作者周辉李文桂; 机构重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所; 出处《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期308-311,共4页; 基金国家自然科学基金(No.30671835)资助项目; 文摘目的构建并鉴定细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI-Eg95-EgA31质粒。方法从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后抽提总RNA为模板,采用RT-PCR方法分别扩增Eg95和EgA31编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)扩增Eg95-EgA31融合基因;将该融合基因定向克隆到植物表达载体pBI121中构建pBI-Eg95-EgA31重组质粒;电穿孔转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,At)LBA4404株,抽提质粒进行酶切及PCR鉴定。结果电泳及测序证实1 016bpEg95-EgA31融合基因克隆成功。经酶切及PCR证实重组质粒pBI-Eg95-EgA31成功转入根癌农杆菌。结论成功构建了细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI-Eg95-EgA31质粒,为进一步构建细粒棘球绦虫转基因植物疫苗奠定了基础。; 关键词细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pbi-eg95-ega31质粒构建鉴定; Keywords Echinococcus granulosus transgenic plant vector recombinant pbi-eg95-ega31 plasmid construction identi- fication; 分类号 R383.33 [医药卫生—医学寄生虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗构建及鉴定被引量：28: 2; 作者周必英陈雅棠李文桂杨梅; 机构重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所贵州省遵义医学院寄生虫学教研室; 出处《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期502-506,共5页; 基金国家自然科学基金资助项目(No.30801052,No.30671835); 文摘目的构建和鉴定细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31融合基因疫苗。方法自行设计引物,从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后提取总RNA为模板,通过RT-PCR分别扩增Eg95和EgA31抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Eg95和EgA31,得到Eg95-EgA31融合基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,定向克隆到大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,构建重组质粒pGEX-Eg95-EgA31,抽提质粒进行双酶切鉴定,电穿孔法转化两歧双歧杆菌(Bifidobacteria bifidum,Bb),构建细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗,抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果RT-PCR扩增出约1 016bp的Eg95-EgA31融合基因;重组质粒用双酶切鉴定可切出预期大小片段,以具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提的质粒为模板进行PCR扩增可得到约1016bp的Eg95-EgA31融合基因片段。结论成功构建了细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗,为该疫苗的开发利用奠定了实验基础。; 关键词细粒棘球绦虫重组Bb—Eg95-ega31融合基因疫苗构建鉴定; Keywords Echinococcus granulosus recombinant Bt-Eg95-ega31 fusion gene vaccine construction identification; 分类号 R383.3 [医药卫生—医学寄生虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗诱导小鼠免疫应答的动态观察被引量：6: 3; 作者周必英陈雅棠李文桂杨梅; 机构重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所遵义医学院寄生虫学教研室; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期99-102,共4页; 基金国家自然科学基金资助项目(30801052 30671835 +1 种基金 30500423 30200239); 文摘目的:观察细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后其免疫应答的动态变化。方法:将疫苗分别采用口服灌胃和鼻腔内接种免疫BALB/c鼠,分别于免疫后2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周用ELISA法测定免疫小鼠血清中IgG及其亚类和IgE水平。用MTT法测定脾淋巴细胞的增殖,用ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清液中IL-12、IFN-γ、TNF-α和IL-10水平,用流式细胞术(FCM)检测脾CD4+和CD8+T细胞百分率。结果:口服免疫小鼠血清IgG、IgG2a、IgG2b、IgG1、IgG3和IgE水平分别在免疫后8、2、6、6、8和10周达到峰值。脾淋巴细胞悬液中IL-12、IFN-γ、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后4、2、4和6周达到峰值。脾淋巴细胞增殖在免疫后6周达到峰值;脾CD4+T细胞在免疫后6周达到峰值,脾CD8+T细胞无明显变化。鼻腔内接种免疫小鼠血清IgG、IgG2a、IgG2b、IgG1、IgG3和IgE水平分别在免疫后10、6、10、8、8和10周达到峰值。脾淋巴细胞悬液中IL-12、IFN-γ、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后2、2、4和8周达到峰值。脾淋巴细胞增殖在免疫后6周达到峰值;脾CD4+T细胞在免疫后6周达到峰值,脾CD8+T细胞无明显变化。口服免疫和鼻腔内接种是两种较好的免疫途径,且前者优于后者。结论:细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗可诱导小鼠产生有效的免疫应答。; 关键词细粒棘球绦虫重组BB-EG95-ega31疫苗免疫应答; Keywords Echinococcus granulosus recombinant Bb-Eg95-ega31 vaccine immune response; 分类号 R383.3 [医药卫生—医学寄生虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后Th1/Th2型免疫应答的动态观察被引量：5: 4; 作者周必英陈雅棠李文桂杨梅; 机构重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所; 出处《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期327-331,共5页; 基金国家自然科学基金(编号:30801052和30671835); 文摘目的:动态观察细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后Th1/Th2型免疫应答的变化。方法:将5×108克隆形成单位(CFU)和5×105CFU疫苗分别采用口服灌胃和鼻腔内接种免疫BALB/c鼠,在免疫后2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周各剖杀4只小鼠,收集血清,用ELISA法测定血清IgG及其亚类和IgE水平;无菌取脾,用ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平。结果:口服免疫组小鼠血清IgG、IgG2a、IgG2b、IgG1、IgG3和IgE水平分别在免疫后8～10周、2～20周、2～20周、4～8周、6～12周和10周显著升高,脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后2～16周、2～12周、2～6周和4～12周显著升高;鼻腔内接种组小鼠血清IgG、IgG2a、IgG2b、IgG1、IgG3和IgE水平分别在免疫后4～10周、4～20周、2～20周、2～12周、4～12周和10～12周显著升高,脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后2～8周、2～12周、2～8周和6～16周显著升高。结论:细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗可诱导小鼠产生1个Th1/Th2混合型免疫应答。口服免疫和鼻腔内接种是两种较好的免疫途径,且前者优于后者。; 关键词细粒棘球绦虫重组BB-EG95-ega31疫苗免疫球蛋白 TH1 TH2 细胞因子; Keywords Echinococcus granulosus Recombinant Bb-Eg95-ega31 vaccine Immunoglobulins Th1 Th2 Cytokines; 分类号 R383.3 [医药卫生—医学寄生虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗诱导小鼠脾细胞亚群变化的研究被引量：4: 5; 作者周必英陈雅棠李文桂杨梅; 机构重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所贵州省遵义医学院寄生虫学教研室; 出处《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期211-214,共4页; 基金国家自然科学基金(30801052 30671835 +1 种基金 30500423 30200239); 文摘目的探讨细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫和Eg原头节攻击后小鼠的囊重抑制率及脾细胞亚群的变化。方法将细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗分别采用皮下注射、肌肉注射、鼻腔内接种和口服灌胃4种途径免疫BALB/c小鼠,免疫后8周每鼠用50个Eg原头节攻击感染,感染后25周剖杀小鼠,分离细粒棘球蚴包囊并称重,计算囊重抑制率;取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T细胞亚群的百分比,同时设有空载体、Bb和MRS对照。结果以上4种疫苗接种组小鼠的囊重抑制率分别为45.33%、41.33%、70.67%和62.67%;疫苗接种组的脾CD4+和CD8+T细胞亚群显著增加,鼻腔内接种和口服免疫组的的CD4+T细胞亚群和CD4+/CD8+比值显著高于皮下和肌肉注射组。结论CD4+和CD8+T细胞亚群在疫苗诱导的保护力中起重要作用。疫苗鼻腔内接种和口服免疫是两种较好的免疫途径。; 关键词细粒棘球绦虫重组Bb—Eg95-ega31疫苗脾细胞亚群; Keywords Echinococcus granulosus recombinant Bb-Eg95-ega31 vaccine splenocyte subset; 分类号 R57 [医药卫生—消化系统]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95构建及其在根癌农杆菌LBA4404中表达效率的研究被引量：1: 6; 作者周辉李文桂叶艳菊; 机构重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所; 出处《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期977-980,共4页; 基金国家自然科学基金项目(30671835); 文摘目的:构建细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95,分析其在根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,At)LBA4404株中的表达效率。方法:从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后抽提总RNA,采用RT-PCR方法扩增Eg95编码基因,将该基因定向克隆到植物表达载体pBI121中构建pBI-Eg95重组质粒;电穿孔转化A(tLBA4404),抽提质粒进行酶切及PCR鉴定。用IPTG分别诱导rAt0、1、3、5、7、9、11和13h,用SDS-PAGE和Western blot鉴定所表达的蛋白质。结果:471bpEg95基因克隆成功。经酶切及PCR证实重组质粒pBI-Eg95成功转入A(tLBA4404)。用Bio-Rad Quantity one分析系统分析,表达产物分子质量(Mr)约为16.5kD,且能被感染细粒棘球蚴的鼠血清特异识别,表达效率为约占LBA4404菌体总蛋白的20%。结论:成功构建了细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95,且能在A(tLBA4404)中表达,为进一步研究细粒棘球绦虫转基因植物疫苗奠定了基础。; 关键词细粒棘球绦虫重组质粒pbi-eg95 根癌农杆菌构建表达效率; Keywords Echinococcus granulosus Recombinant pbi-eg95 plasmid Agrobacterium tumefaciens Construction Expression efficiency; 分类号 R383.33 [医药卫生—医学寄生虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI-Eg95-EgA31质粒构建及鉴定	周辉李文桂	《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心	2008	16	在线阅读下载PDF 职称材料
2	细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗构建及鉴定	周必英陈雅棠李文桂杨梅	《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心	2009	28	在线阅读下载PDF 职称材料
3	细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗诱导小鼠免疫应答的动态观察	周必英陈雅棠李文桂杨梅	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2010	6	在线阅读下载PDF 职称材料
4	细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后Th1/Th2型免疫应答的动态观察	周必英陈雅棠李文桂杨梅	《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2010	5	在线阅读下载PDF 职称材料
5	细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗诱导小鼠脾细胞亚群变化的研究	周必英陈雅棠李文桂杨梅	《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心	2010	4	在线阅读下载PDF 职称材料
6	细粒棘球绦虫重组质粒pBI-Eg95构建及其在根癌农杆菌LBA4404中表达效率的研究	周辉李文桂叶艳菊	《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2009	1	在线阅读下载PDF 职称材料