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基因枪介导重组hGM-CSF转移系统的建立及其在人肿瘤细胞中的稳定表达被引量：2: 1; 作者郑天荣郑秋红 +2 位作者林贤东谢云青龚福生《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第3期203-206,共4页; 目的 :建立基因枪介导的基因转移系统 ,为基因修饰的肿瘤细胞疫苗研究奠定实验基础。方法 :采用基因枪转导的方法 ,将真核表达质粒 (pcDNA3 .1GM CSF)转导入人胃癌细胞株 (SGC) ,经G418筛选获得阳性克隆 (SGC GM CSF) ,通过RT PCR方法鉴... 展开更多; 关键词重组hgm-csf转移系统基因枪肿瘤疫苗基因治疗胃癌; 在线阅读下载PDF 职称材料

携带CD自杀基因NDV重组病毒对小鼠肝癌细胞转移模型的治疗效果被引量：1: 2; 作者尹杰超苏明雪 +9 位作者刘天艳杨甲瑞尹祺黄鹤张宇曹玉凯胡爽孙锐李思雨李德山《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期28-39,共12页; 采用反向遗传操作技术构建新城疫病毒基因组NP/P 位点表达胞嘧啶脱氨酶(Cytosine deaminase,CD)基因弱毒力重组新城疫病毒rClone30-CD和中毒力重组新城疫病毒rAnhinga-CD。MTT检测结果表明,在协同5-氟胞嘧啶(5-Fluorocytosine,5-FC)条件... 展开更多; 关键词肝癌肿瘤转移重组新城疫病毒 CD/5-FC系统反向遗传操作技术; 在线阅读下载PDF 职称材料

杆状病毒表达载体系统研究进展: 3; 作者李青兵《广东蚕业》 1998年第4期60-64,共5页; 昆虫杆状病毒科(Baculoviridae)因包埋于多角体中的病毒粒子呈棒状而得名,迄今为止,用于基因工程的杆状病毒均属核型多角体病毒(nuclear polyhedrosis virus,NPV)。NPV是一类双链DNA病毒,它的DNA是90—230Kb的环状分子。利用NPV作为外... 展开更多; 关键词杆状病毒表达载体系统启动子序列外源基因昆虫杆状病毒多角体蛋白转移载体研究进展重组病毒核型多角体病毒病毒粒子; 在线阅读下载PDF 职称材料

狂犬病病毒核蛋白在Bac—To—Bac／AcMNPV杆状病毒系统的表达: 4; 《今日畜牧兽医》 2010年第3期68-68,共1页; 为真核表达狂犬病病毒的核蛋白，本研究通过RT-PCR克隆狂犬病病毒ERA株核蛋白基因．将其克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTB中，构建重组质粒pFastBacHTB-NP并将其转化DH10Bac细胞，得到重组穿梭质粒reBacmid—NP；通过转染昆虫细胞sf9... 展开更多; 关键词 ACMNPV 狂犬病病毒核蛋白基因杆状病毒系统 BAC 杆状病毒转移载体 PCR克隆重组杆状病毒; 在线阅读下载PDF 职称材料

大肠杆菌ptsHI-crr基因的敲除及其对苯丙氨酸生产的影响被引量：1: 5; 作者张怀于立涛《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期177-181,共5页; L-苯丙氨酸(L-phenylalanine)是重要的食品和医药中间体。利用大肠杆菌发酵葡萄糖生产苯丙氨酸时,对葡萄糖转运起重要作用的磷酸烯醇丙酮酸糖磷酸转移酶系统(PTS)对苯丙氨酸产量有很大影响。由ptsHI-crr操纵子编码的磷酸组氨酸载体蛋白(... 展开更多; 关键词 ptsHI-crr基因基因敲除磷酸烯醇丙酮酸糖磷酸转移酶系统 L-苯丙氨酸 RED同源重组; 在线阅读下载PDF 职称材料

巨噬细胞特异性胶原β(1-O)半乳糖基转移酶1基因敲除小鼠模型的构建与鉴定: 6; 作者仇培培孙晓娇 +4 位作者王蕾王祉祺衣楚潇刘振明张继国《中国生物化学与分子生物学报》 2025年第8期1214-1222,共9页; Colgalt1异常表达与肿瘤发生、发展密切相关,但其调控巨噬细胞影响肿瘤发展的机制尚不明确。本研究旨在构建巨噬细胞特异性Colgalt 1基因敲除小鼠模型,以深入探究Colgalt1调控巨噬细胞功能进而影响肿瘤相关疾病发生和发展的机制。首先,... 展开更多; 关键词胶原β(1-O)半乳糖基转移酶1 条件性基因敲除巨噬细胞 Cre-LoxP重组酶系统动物模型; 在线阅读下载PDF 职称材料

肠出血性大肠杆菌z4832基因缺失突变株的构建: 7; 作者谭林林王建新 +1 位作者李涛王慧《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第8期1111-1115,共5页; 目的利用Red重组系统的同源重组功能,敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7(EHEC O157∶H7)的乙酰转移酶基因z4832,构建z4832基因缺失突变株。方法EHEC O157∶H7的基因组作为模板,PCR扩增目的基因两侧的同源臂序列;将上下游同源臂连接于p UC19-... 展开更多; 关键词肠出血性大肠杆菌O157∶H7 RED重组系统乙酰转移酶抗生素; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基因枪介导重组hGM-CSF转移系统的建立及其在人肿瘤细胞中的稳定表达被引量：2: 1; 作者郑天荣郑秋红林贤东谢云青龚福生; 机构福建省肿瘤医院福建省肿瘤医院肿瘤分子室福建省肿瘤医院免疫病理室; 出处《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第3期203-206,共4页; 基金福建省自然科学基金项目 (C970 67)资助; 文摘目的 :建立基因枪介导的基因转移系统 ,为基因修饰的肿瘤细胞疫苗研究奠定实验基础。方法 :采用基因枪转导的方法 ,将真核表达质粒 (pcDNA3 .1GM CSF)转导入人胃癌细胞株 (SGC) ,经G418筛选获得阳性克隆 (SGC GM CSF) ,通过RT PCR方法鉴定 ,重组载体已整合到胃癌细胞的基因组中。结果 :SDS PAGE和Westernblot分析的SGC GM CSF上清液结果显示rhGM CSF主带在 3 0kD左右 ,SGC GM CSF在体外长期培养中保持稳定分泌 ,分泌量达到 2 4h平均 2 47ng 10 6 cell。结论 :建立的基因枪介导的基因转移系统安全、有效。; 关键词重组hgm-csf转移系统基因枪肿瘤疫苗基因治疗胃癌; Keywords GM CSF gene gun cancer vaccines gene therapy; 分类号 R735.2 [医药卫生—肿瘤] R730.54 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名携带CD自杀基因NDV重组病毒对小鼠肝癌细胞转移模型的治疗效果被引量：1: 2; 作者尹杰超苏明雪刘天艳杨甲瑞尹祺黄鹤张宇曹玉凯胡爽孙锐李思雨李德山; 机构东北农业大学生命科学学院黑龙江省疾控中心; 出处《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期28-39,共12页; 基金国家重点研发计划项目(2017YFD0501000); 文摘采用反向遗传操作技术构建新城疫病毒基因组NP/P 位点表达胞嘧啶脱氨酶(Cytosine deaminase,CD)基因弱毒力重组新城疫病毒rClone30-CD和中毒力重组新城疫病毒rAnhinga-CD。MTT检测结果表明,在协同5-氟胞嘧啶(5-Fluorocytosine,5-FC)条件下,两株重组新城疫病毒可在体外有效杀伤人肝癌细胞HepG2。通过Balb/c鼠尾静脉注射小鼠肝癌细胞H22构建小鼠肝癌细胞转移模型,经重组病毒协同5-FC联合治疗,荷瘤小鼠转移肿瘤体积显著缩小、肿瘤组织出现明显凋亡与坏死。体内试验结果表明,中毒力重组新城疫病毒rAnhinga-CD抑瘤效果优于弱毒力重组新城疫病毒rClone30-CD。; 关键词肝癌肿瘤转移重组新城疫病毒 CD/5-FC系统反向遗传操作技术; Keywords hepatocellular carcinoma tumor metastasis recombinant newcastle disease virus CD/5- FC system reverse genetic technique; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名杆状病毒表达载体系统研究进展: 3; 作者李青兵; 机构广东省农科院蚕业研究所; 出处《广东蚕业》 1998年第4期60-64,共5页; 文摘昆虫杆状病毒科(Baculoviridae)因包埋于多角体中的病毒粒子呈棒状而得名,迄今为止,用于基因工程的杆状病毒均属核型多角体病毒(nuclear polyhedrosis virus,NPV)。NPV是一类双链DNA病毒,它的DNA是90—230Kb的环状分子。利用NPV作为外源基因表达载体的设想最初是由Miller 1981年提出。; 关键词杆状病毒表达载体系统启动子序列外源基因昆虫杆状病毒多角体蛋白转移载体研究进展重组病毒核型多角体病毒病毒粒子; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名狂犬病病毒核蛋白在Bac—To—Bac／AcMNPV杆状病毒系统的表达: 4; 出处《今日畜牧兽医》 2010年第3期68-68,共1页; 文摘为真核表达狂犬病病毒的核蛋白，本研究通过RT-PCR克隆狂犬病病毒ERA株核蛋白基因．将其克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTB中，构建重组质粒pFastBacHTB-NP并将其转化DH10Bac细胞，得到重组穿梭质粒reBacmid—NP；通过转染昆虫细胞sf9包装重组杆状病毒。; 关键词 ACMNPV 狂犬病病毒核蛋白基因杆状病毒系统 BAC 杆状病毒转移载体 PCR克隆重组杆状病毒; 分类号 S852.655 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名大肠杆菌ptsHI-crr基因的敲除及其对苯丙氨酸生产的影响被引量：1: 5; 作者张怀于立涛; 机构北京科技大学应用科学学院生物科学与技术系; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期177-181,共5页; 文摘 L-苯丙氨酸(L-phenylalanine)是重要的食品和医药中间体。利用大肠杆菌发酵葡萄糖生产苯丙氨酸时,对葡萄糖转运起重要作用的磷酸烯醇丙酮酸糖磷酸转移酶系统(PTS)对苯丙氨酸产量有很大影响。由ptsHI-crr操纵子编码的磷酸组氨酸载体蛋白(HPr),酶I(EI)和酶IIAGlc是PTS的必要组分,通过敲除ptsHI-crr得到PTS缺陷菌株,可以使葡萄糖代谢更多地流向苯丙氨酸生物合成。采用Red同源重组技术将大肠杆菌染色体上的ptsHI-crr基因替换为四环素抗性基因,得到PTS缺陷菌株。该菌株在以葡萄糖为惟一碳源的培养基中摇瓶培养,菌密度为对照菌株的2.7倍,苯丙氨酸产量为对照菌株的6.3倍。; 关键词 ptsHI-crr基因基因敲除磷酸烯醇丙酮酸糖磷酸转移酶系统 L-苯丙氨酸 RED同源重组; Keywords ptsHI-crr genes Gene knock-out Phosphoenolpyruvate sugar phosphotransferase system L-phenylalanine Red homologous recombination; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名巨噬细胞特异性胶原β(1-O)半乳糖基转移酶1基因敲除小鼠模型的构建与鉴定: 6; 作者仇培培孙晓娇王蕾王祉祺衣楚潇刘振明张继国; 机构山东第一医科大学(山东省医学科学院)药学院(药物研究所); 出处《中国生物化学与分子生物学报》 2025年第8期1214-1222,共9页; 基金北京市自然科学基金(No.7232252) 中国博士后科学基金会面上项目(No.2022M721336) +1 种基金山东省自然科学基金面上项目(No.2R2023MH361)资助。; 文摘 Colgalt1异常表达与肿瘤发生、发展密切相关,但其调控巨噬细胞影响肿瘤发展的机制尚不明确。本研究旨在构建巨噬细胞特异性Colgalt 1基因敲除小鼠模型,以深入探究Colgalt1调控巨噬细胞功能进而影响肿瘤相关疾病发生和发展的机制。首先,利用基因编辑构建了Colgalt1^(flox+)小鼠,随后将其与髓细胞系(包括单核细胞、成熟巨噬细胞)组织特异性表达的Lyz2-Cre^(+)小鼠进行杂交。通过这一策略,成功获得基因型为Colgalt1^(-/-)Lyz2-Cre^(+)的小鼠,实现了巨噬细胞中Colgalt 1基因的条件性敲除,以Colgalt1 flox/flox Lyz2-Cre^(-)小鼠作为对照组。通过PCR和琼脂糖凝胶电泳技术对敲除小鼠的Flox及Cre基因型进行鉴定。采用实时荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹技术,检测敲除小鼠骨髓来源巨噬细胞中Colgalt1的表达水平。Western印迹结果显示,与对照组相比,敲除小鼠骨髓来源的巨噬细胞中Colgalt1的表达水平显著下调(P<0.01);RT-qPCR结果显示,与对照组相比,敲除小鼠骨髓来源的巨噬细胞中Colgalt 1在mRNA水平显著下调(P<0.001),而在小鼠的肝、肺和脾等组织中,Colgalt 1基因的mRNA表达无明显差异。此外,采用免疫组织化学方法检测肝内特异性巨噬细胞中Colgalt1的表达,结果显示,在敲除小鼠肝的巨噬细胞中未观察到Colgalt1阳性表达。通过苏木精-伊红染色观察2组小鼠肝组织内细胞形态,结果显示,2组小鼠肝组织内细胞形态无明显差异,且组织器官未发现明显病变,小鼠整体生存亦未受到影响,最后,通过RT-qPCR检测了巨噬细胞相关炎性因子在2组小鼠BMDMs中的表达,结果表明,与对照组相比,敲除组小鼠BMDMs中TNF-α表达显著下调(P<0.05),而IL-10(P<0.01)、精氨酸酶1(arginase1)(P<0.001)和CD206(P<0.001)表达显著上调,表明巨噬细胞敲除Colgalt 1后呈现抗炎趋势并向M2极化。综上所述,本研究成功构建了巨噬细胞特异性Colgalt 1基因敲除小鼠,为深入探究Colgalt1在巨噬细胞功能调控以及肿瘤疾病发生机制中的具体作用,提供了更为可靠的实验动物模型,有望为肿瘤等疾病的治疗提供新的靶点和思路。; 关键词胶原β(1-O)半乳糖基转移酶1 条件性基因敲除巨噬细胞 Cre-LoxP重组酶系统动物模型; Keywords collagen β(1-O) galactosyltransferase 1(colgalt1) conditional gene knockout macrophage cre-LoxP recombinase system animal model; 分类号 Q7 [生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名肠出血性大肠杆菌z4832基因缺失突变株的构建: 7; 作者谭林林王建新李涛王慧; 机构安徽医科大学军事医学科学院微生物流行病研究所军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室; 出处《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第8期1111-1115,共5页; 基金国家自然科学基金(编号:81401643); 文摘目的利用Red重组系统的同源重组功能,敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7(EHEC O157∶H7)的乙酰转移酶基因z4832,构建z4832基因缺失突变株。方法EHEC O157∶H7的基因组作为模板,PCR扩增目的基因两侧的同源臂序列;将上下游同源臂连接于p UC19-kana质粒上卡那霉素(kana)抗性基因的两端;PCR扩增获得中间嵌合卡那霉素抗性基因的同源臂线性片段,利用质粒p KD46介导的重组技术敲除z4832基因,利用p CP20质粒介导的重组技术去除抗性标记。PCR扩增及DNA测序验证目的基因缺失后,测定突变株及野生株的生长曲线,检测在抗菌药物氧氟沙星中的存活率。结果成功构建EHEC O157∶H7 z4832基因缺失突变株。z4832缺失突变株生长速度与野生株差异无统计学意义,但在含氧氟沙星的LB培养基中突变株存活率升高(P<0.05),在含氧氟沙星的M9培养基中存活率下降(P<0.05)。结论构建z4832缺失突变株,研究z4832与肠出血性大肠杆菌耐药性之间的关系,为进一步研究乙酰转移酶在EHEC O157∶H7中的作用机制奠定了基础。; 关键词肠出血性大肠杆菌O157∶H7 RED重组系统乙酰转移酶抗生素; Keywords EHEC O157 ： H7 kRed recombinant system acetyltransferase antibiotics; 分类号 Q939.93 [生物学—微生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	基因枪介导重组hGM-CSF转移系统的建立及其在人肿瘤细胞中的稳定表达	郑天荣郑秋红林贤东谢云青龚福生	《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD	2002	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	携带CD自杀基因NDV重组病毒对小鼠肝癌细胞转移模型的治疗效果	尹杰超苏明雪刘天艳杨甲瑞尹祺黄鹤张宇曹玉凯胡爽孙锐李思雨李德山	《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2019	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	杆状病毒表达载体系统研究进展	李青兵	《广东蚕业》	1998	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	狂犬病病毒核蛋白在Bac—To—Bac／AcMNPV杆状病毒系统的表达		《今日畜牧兽医》	2010	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	大肠杆菌ptsHI-crr基因的敲除及其对苯丙氨酸生产的影响	张怀于立涛	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2010	1	在线阅读下载PDF 职称材料
6	巨噬细胞特异性胶原β(1-O)半乳糖基转移酶1基因敲除小鼠模型的构建与鉴定	仇培培孙晓娇王蕾王祉祺衣楚潇刘振明张继国	《中国生物化学与分子生物学报》	2025		在线阅读下载PDF 职称材料
7	肠出血性大肠杆菌z4832基因缺失突变株的构建	谭林林王建新李涛王慧	《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心	2016	0	在线阅读下载PDF 职称材料