流行性腹泻病毒M基因与甲病毒载体重组RNA的构建 被引量：14

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作者 余丽芸 侯喜林 《动物医学进展》 CSCD 2005年第5期73-76,共4页

将猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M基因导入甲病毒载体(plasmid Semliki ForestViru,pSFV) ,研究该基因及其编码蛋白的表达。首先将扩增的病毒M 基因导入pSFV的SP6 启动子下游。用Spe Ⅰ酶将pSFV M重组质粒DNA 线性化,再将其体外转录成5′末... 将猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M基因导入甲病毒载体(plasmid Semliki ForestViru,pSFV) ,研究该基因及其编码蛋白的表达。首先将扩增的病毒M 基因导入pSFV的SP6 启动子下游。用Spe Ⅰ酶将pSFV M重组质粒DNA 线性化,再将其体外转录成5′末端含帽子结构的重组RNA。然后通过电穿孔法将此重组RNA转染BHK 21 细胞,收集病毒样粒子用于感染BHK 21 细胞。采用细胞免疫化学的方法对转染和感染细胞的表达产物进行分析。pSFV M RNA 转染和病毒粒子感染哺乳动物细胞表达的M 蛋白,可与PEDV多克隆抗体起特异反应,证明体外转录的重组RNA 含有PEDV M的特异序列。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 M基因 甲病毒载体 重组rna

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流行性腹泻病毒E基因与pSFV重组RNA的构建 被引量：2

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作者 余丽芸 侯喜林 《黑龙江八一农垦大学学报》 2005年第1期47-50,共4页

将猪流行性腹泻病毒(PEDV)的E基因导入甲病毒载体(pSFV) ,研究该基因及其编码蛋白的表达。首先将扩增的病毒E基因导入pSFV 的Sp6启动子下游。用SpeⅠ酶将pSFV- E重组质粒DNA线性化,再将其体外转录成5′末端含帽子结构的重组RNA。然后通... 将猪流行性腹泻病毒(PEDV)的E基因导入甲病毒载体(pSFV) ,研究该基因及其编码蛋白的表达。首先将扩增的病毒E基因导入pSFV 的Sp6启动子下游。用SpeⅠ酶将pSFV- E重组质粒DNA线性化,再将其体外转录成5′末端含帽子结构的重组RNA。然后通过电穿孔法将此重组RNA转染BHK21细胞,收集病毒样粒子用于感染BHK21细胞。采用细胞免疫化学的方法对转染和感染细胞的表达产物进行分析。pSFV-E RNA 转染和病毒粒子感染哺乳动物细胞表达的E蛋白,可与抗PEDV多克隆抗体起特异反应,证明体外转录的重组RNA含有PEDV E 的特异序列。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 E基因 甲病毒载体 重组rna

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趋化因子受体CXCR4反义RNA重组表达载体的构建及其在真核细胞中的表达 被引量：2

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作者 邢卉春 徐小元 +4 位作者 王勤环 于敏 公伟波 斯崇文 邵一鸣 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期155-158,共4页

目的 :构建趋化因子受体CXCR4反义RNA真核表达载体并获取重组假病毒颗粒以用于抗HIV 1研究。方法 :用RT PCR法从健康人外周血单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcells ,PBMCs)中获得目的基因 ,并以正、反两个方向定向插入到逆转录... 目的 :构建趋化因子受体CXCR4反义RNA真核表达载体并获取重组假病毒颗粒以用于抗HIV 1研究。方法 :用RT PCR法从健康人外周血单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcells ,PBMCs)中获得目的基因 ,并以正、反两个方向定向插入到逆转录病毒载体 pLXSN。重组载体用脂质体转染剂 (lipofectAMINE)转染PA317包装细胞 ,抗G418克隆的细胞上清经逆转录后用荧光定量PCR(fluorogenic quantitativePCR ,FQ PCR)测定假病毒滴度 ,进一步感染NIH 3T3细胞。结果 :CXCR4正、反义RNA的真核表达载体 ,经PA317细胞包装形成的假病毒颗粒已成功地感染NIH 3T3细胞 ,目的基因在该细胞中得到整合与表达。结论 :从PBMCs中获得的目的基因通过逆转录病毒载体可转移至真核细胞中并得到表达 ,为进一步研究CXCR4反义RNA的抗HIV 1作用奠定了基础。 展开更多

关键词 趋化因子受体 CXCR4反义rna重组表达载体 构建 真核细胞 表达

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植物病毒RNA间重组的研究现状

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作者 王海河 谢联辉 《福建农业大学学报》 CSCD 1999年第1期47-53,共7页

根据近几年来研究的最新资料，从植物病毒RNA间的重组位点的特征以及重组体亲本链双方的来源的角度对植物病毒RNA的重组类型作了介绍，并对其重组机制作了综述．

关键词 植物病毒rna rna重组 重组机制

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RNA病毒的重组机制及其研究进展 被引量：4

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作者 周艳 郑海红 袁世山 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第6期71-76,共6页

RNA重组是RNA病毒普遍存在的变异方式之一,但仍有很多关键性问题尚未阐释清楚。目前认为重组机制主要有两种,复制型重组机制即模板转换(template-switch),又称为copy-choice机制;另一种为非复制型重组机制,即断裂连接机制(breakage-reli... RNA重组是RNA病毒普遍存在的变异方式之一,但仍有很多关键性问题尚未阐释清楚。目前认为重组机制主要有两种,复制型重组机制即模板转换(template-switch),又称为copy-choice机制;另一种为非复制型重组机制,即断裂连接机制(breakage-religation)和类似于剪接的反酯作用(splicing-like transesterification)机制。由于重组在病毒进化变异过程中发挥着不同的作用,阐明重组机制有助于研究病毒进化变异和复制转录等生命周期过程。本文拟就RNA重组类型、重组机制、对RNA病毒重组的研究、重组的生物学意义及应用4个方面,综述RNA病毒重组机制及其研究进展。 展开更多

关键词 rna病毒 rna重组 重组机制

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rAAV2-slug-siRNA对原位胰腺癌移植瘤转移和血管生成影响的实验研究 被引量：2

6

作者 陈俭云 崔海宁 +1 位作者 王正文 张克君 《海南医学院学报》 CAS 2012年第1期5-8,11,共5页

目的:研究slug基因的RNA干扰重组腺病毒载体(rAAV2-slug-siRNA)对原位胰腺癌移植瘤的转移和血管生成的影响。方法:建立胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型,随机分成3组,每组8只,分为空白对照组(腹腔注射生理盐水)、阴性对照组... 目的:研究slug基因的RNA干扰重组腺病毒载体(rAAV2-slug-siRNA)对原位胰腺癌移植瘤的转移和血管生成的影响。方法:建立胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型,随机分成3组,每组8只,分为空白对照组(腹腔注射生理盐水)、阴性对照组(腹腔注射rAAV2-GFP)、实验组(腹腔注射rAAV2-slug-siRNA)。10周后利用CO2麻醉法处死裸鼠,观察原位胰腺癌移植瘤的重量,抑瘤率,肝、胃肠、腹腔转移,腹水等情况,及肿瘤细胞微血管密度(MVD)。RT-PCR检测移植瘤的slug mR-NA表达,Western blot检测slug蛋白的表达。结果:胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型建立成功,成瘤率100%。实验组原位胰腺癌移植瘤瘤重明显低于阴性对照组(P<0.05),抑瘤率为70.83%。阴性对照组诱发的裸鼠胰腺癌质地硬,肿块向四周浸润并形成癌性粘连,与阴性对照组相比,实验组腹膜、肝、毗邻脏器转移率和形成腹水率均明显下降(P<0.05)。实验组MVD明显少于阴性对照组(P<0.05),slug mRNA相对表达量(RT-PCR)和slug蛋白相对表达量(Western blot)明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论:rAAV2-slug-siRNA可能通过抑制肿瘤血管生成而抑制原位胰腺癌移植瘤转移。 展开更多

关键词 胰腺癌 slug基因的rna干扰重组腺病毒载体 移植瘤转移 血管生成

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小RNA合成技术与小RNA药物研究进展

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作者 裴佳伟 王雪 +3 位作者 黄倩 谭慎行 田野 骞爱荣 《陕西师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期1-15,共15页

小RNA是一类长度20~24 nt、通过RNA-RNA相互作用调控目标基因的非编码RNA,其作用靶点广泛,能够多途径调节致病基因表达,已经成为新药研发热点。小RNA药物的研发依赖于RNA原料的获取,为此总结了化学合成、体外转录合成及体内生物合成3种... 小RNA是一类长度20~24 nt、通过RNA-RNA相互作用调控目标基因的非编码RNA,其作用靶点广泛,能够多途径调节致病基因表达,已经成为新药研发热点。小RNA药物的研发依赖于RNA原料的获取,为此总结了化学合成、体外转录合成及体内生物合成3种小RNA合成方式,重点介绍了使用si-RNA结合蛋白表达siRNA、rRNA支架、tRNA支架及改良tRNA支架4种小RNA生物合成技术;提出利用杂合tRNA支架以生物发酵的方式能够大规模生产重组小RNA,该方法具有活性高、成本低、带有天然修饰、安全性高等优点,为临床RNA药物原料来源提供了备选方案。此外,归纳了美国食品药品监督管理局批准上市的14种小RNA药物以及当前在研小RNA药物的最新研究进展,分析了小RNA药物所面临的挑战及未来发展方向,以期加深对小RNA合成技术和小RNA药物研究进展的理解。 展开更多

关键词 小rna合成 小rna药物 rna治疗 重组小rna

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动物病毒基因重组疫苗的研究现状

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作者 王启水 马林 《山东畜牧兽医》 2003年第3期46-47,共2页

关键词 动物病毒基因重组疫苗 研究现状 DNA病毒载体疫苗 负链rna病毒重组疫苗 正链rna病毒重组疫苗 DNA疫苗

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转基因病毒的重组是否会导致新的植物病

9

作者 朱遐 《生物技术通报》 CAS CSCD 1995年第2期16-17,共2页

外被蛋白介导的抗病毒性(其中已将部分病毒基因组导入植物)已成为抗病毒病的主要手段。但其安全性如何?密执安州立大学的Ann Greene和Richard

关键词 基因病毒 转基因植株 植物 抗病毒性 rna重组 病毒基因组 雀麦花叶病毒 病毒rna 抗病毒病 州立大学

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辣椒脉斑驳病毒湖南分离物全基因组序列测定及分子特征 被引量：2

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作者 谭汝晴 罗香文 +4 位作者 卜姗 张宇 张松柏 张德咏 刘勇 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期187-191,共5页

【目的】辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)是东南亚茄科作物主产地主要病毒种类之一,严重危害辣椒等茄科作物的生产。测定ChiVMV的全基因组序列,分析其分子特征,可以明确该病毒的适应性进化以及对我国辣椒等茄科作物... 【目的】辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)是东南亚茄科作物主产地主要病毒种类之一,严重危害辣椒等茄科作物的生产。测定ChiVMV的全基因组序列,分析其分子特征,可以明确该病毒的适应性进化以及对我国辣椒等茄科作物的潜在威胁提供科学基础。【方法】以湖南疑似感染ChiVMV辣椒为样本,采用small RNA高通量测序结合RT-PCR测定病毒全基因组序列,利用Mega、RDP及DnaSP等生物学软件分析其分子特征。【结果】ChiVMV湖南分离物全长基因组序列为9704 nt(不包含3′-A尾),与其他分离物的序列同源性为84%~94%。系统发育分析表明,我国的ChiVMV聚类为一个亚簇,与其他国家和地区分离物不存在重组事件。基因的替换指数R=3.29,替换碱基类型主要是C/T替换。【结论】碱基替换突变可能是ChiVMV湖南分离物适应性进化的主要因素。 展开更多

关键词 辣椒脉斑驳病毒 全基因组序列 系统发育分析 rna突变和重组

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锦紫苏类病毒研究进展

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作者 姜冬梅 张志想 李世访 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期27-30,39,共5页

锦紫苏又名彩叶草,是一种草本观赏植物,可以被马铃薯纺锤块茎类病毒科锦紫苏类病毒属的类病毒侵染。目前为止,共发现了6种锦紫苏类病毒,分别为锦紫苏类病毒-1~锦紫苏类病毒-6(CbVd-1~CbVd-6),它们具有共同的中央保守区(CCR),存在广泛的... 锦紫苏又名彩叶草,是一种草本观赏植物,可以被马铃薯纺锤块茎类病毒科锦紫苏类病毒属的类病毒侵染。目前为止,共发现了6种锦紫苏类病毒,分别为锦紫苏类病毒-1~锦紫苏类病毒-6(CbVd-1~CbVd-6),它们具有共同的中央保守区(CCR),存在广泛的分子间重组,其嵌合体的发现为研究类病毒RNA重组提供了较为理想的试验材料。本文系统综述了锦紫苏类病毒的分类地位及分子特征、检测方法、与寄主互作等方面的研究进展,并对锦紫苏类病毒研究中的热点和难点问题进行了讨论和展望。 展开更多

关键词 类病毒 锦紫苏 rna重组 寄主

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Upjohn遗传工程南瓜获准商品化

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作者 孙雷心 《生物技术通报》 CAS CSCD 1995年第5期13-14,共2页

美国农业部批准了Upjohn公司的遗传工程南瓜ZW-20的商品化。

关键词 遗传工程 弯颈南瓜 商品化 马铃薯Y病毒 转基因植物 删除突变 遗传改造 rna重组 雀麦花叶病毒 美国农业部

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