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IL6/IL6R系统介导重组IL6-PE40外毒素融合蛋白靶向杀伤白血病细胞的新策略: 1; 作者崔建舞奚永志 +7 位作者郑黎燕刘爽刘楠屠敏郭斯启陈兴国金荔孔繁华《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第10期1048-1049,共2页; 关键词白血病 il6/il6R 重组il6-pe40外毒素融合蛋白; 在线阅读下载PDF 职称材料

新型重组IL6D24PE40KDEL外毒素融合蛋白的理化分析: 2; 作者崔建武郭斯启 +3 位作者孙玉英刘楠梁飞奚永志《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期825-828,共4页; 为了对构建成功的新型重组IL6D2 4 PE4 0KDEL外毒素融合蛋白的部分物化表征进行分析鉴定 ,采用Edman法、SDS PAGE法、胰蛋白酶消化的MALDI TOF MS质谱法、蛋白印迹法和MTT法分别测定该融合蛋白的N 末端 6个氨基酸、相对分子量、肽谱、... 展开更多; 关键词外毒素融合蛋白 il6D24-pe40KDEL 纯化鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

B7-PE40新型重组融合外毒素的分子生物学特性预测被引量：2: 3; 作者张惠丽奚永志 +4 位作者孔繁华陈汝光袁志宏刘楠关海容《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2001年第4期327-332,共6页; 为探讨构建的重组外毒素融合蛋白B7 1 Linker PE4 0和B7 2 Linker PE4 0及其接头设计的合理性 ,应用核酸和蛋白质序列分析软件系统GOLDKEY ,对上述重组外毒素融合蛋白的柔性、抗原性、亲水性、表位和二级结构等分子生物学特性进行了... 展开更多; 关键词 B7-pe40重组融合外毒素蛋白分子结构预测计算机模拟分子生物学移植免疫学; 在线阅读下载PDF 职称材料

新型重组免疫抑制融合毒素蛋白B7-2-PE40KDEL的分离纯化被引量：1: 4; 作者关海容孙玉英 +6 位作者袁志宏张惠丽梁飞刘楠郭斯启习彩霞奚永志《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期123-127,共5页; 为了建立高效快捷能分离大量重组B7-2-PE40KDEL融合蛋白的下游纯化路线,比较了不同组合的纯化策略和条件,包括反相层析、金属螯合层析、阴离子交换层析、蓝染料亲和层析和凝胶过滤层析等,并采用MTT法检测该融合蛋白的靶向杀伤活性。结... 展开更多; 关键词重组外毒素融合蛋白 B7-2-pe40KDEL 蛋白纯化靶向杀伤生物活性; 在线阅读下载PDF 职称材料

新型重组融合毒素蛋白B7-2-PE40KDEL部分表征的鉴定: 5; 作者关海容孙玉英 +6 位作者袁志宏张惠丽梁飞刘楠郭斯启习彩霞奚永志《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期157-160,166,共5页; 目的:对构建的新型重组B7-2-PE40KDEL外毒素融合蛋白的部分表征进行分析鉴定。方法:采用SDS-PAGE相对分子量、胰蛋白酶消化的MALDI-TOF-MS质谱、蛋白印迹、全波长扫描和MTT法分别测定该融合蛋白相对分子量、肽谱、抗原特异性以及靶向杀... 展开更多; 关键词重组外毒素融合蛋白 B7-2-pe40KDEL 肽谱抗原特异性生物学活性; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名IL6/IL6R系统介导重组IL6-PE40外毒素融合蛋白靶向杀伤白血病细胞的新策略: 1; 作者崔建舞奚永志郑黎燕刘爽刘楠屠敏郭斯启陈兴国金荔孔繁华; 机构军事医学科学院附属医院免疫学研究室国家生物医学分析中心免疫学研究室; 出处《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第10期1048-1049,共2页; 基金国家自然科学基金 (No .395 0 0 0 6 2和No .395 0 0 0 98) 中荷科技交流基金资助项目; 关键词白血病 il6/il6R 重组il6-pe40外毒素融合蛋白; 分类号 R733.7 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名新型重组IL6D24PE40KDEL外毒素融合蛋白的理化分析: 2; 作者崔建武郭斯启孙玉英刘楠梁飞奚永志; 机构军事医学科学院附属医院免疫学研究室; 出处《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期825-828,共4页; 基金国家自然科学基金资助课题编号 395 0 0 0 62及 39870 875; 文摘为了对构建成功的新型重组IL6D2 4 PE4 0KDEL外毒素融合蛋白的部分物化表征进行分析鉴定 ,采用Edman法、SDS PAGE法、胰蛋白酶消化的MALDI TOF MS质谱法、蛋白印迹法和MTT法分别测定该融合蛋白的N 末端 6个氨基酸、相对分子量、肽谱、抗原特异性以及靶向杀伤生物学活性。结果表明 :所构建表达纯化的新型重组IL6D2 4 PE4 0KDEL外毒素融合蛋白N末端 6个氨基酸序列为Met Ile Asp Lys Gln Ile ,而IL 6缺失 2 4个氨基酸后的原序列为Ile Asp Lys Gln Ile ,由于采用了大肠杆菌表达系统 ,因此在N末端第 1位多出了 1个Met,经12 %SDS PAGE蛋白电泳和凝胶成像系统分析计算 ,其相对分子量为 5 8.75kD ,与理论值 5 6.9kD相比误差在5 %之内。MALTI TOF MS质谱测定共获得 10个与理论预测值相符的肽段 ,经瑞士生物信息研究所的EXPASY分子生物服务网站的Peptident数据库搜索证明 ,在分子量为 5 7kD左右的范围内未检索到与上述条件相符的已知蛋白 ,证明本融合蛋白为全新蛋白 ,与预测的目的蛋白相符。WB实验显示IL6D2 4 PE4 0KDEL外毒素融合蛋白能与IL 6及PEA抗体特异性结合。MTT生物活性测定表明 ,该融合蛋白对表达IL 6R的多发性骨髓瘤细胞系U2 66产生特异性杀伤 ,而对不表达IL6R的CEM淋巴细胞系无任何杀伤。结论; 关键词外毒素融合蛋白 il6D24-pe40KDEL 纯化鉴定; Keywords exotoxin fusion protein il6D24 PE40KDEL purification identification; 分类号 R996 [医药卫生—毒理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名B7-PE40新型重组融合外毒素的分子生物学特性预测被引量：2: 3; 作者张惠丽奚永志孔繁华陈汝光袁志宏刘楠关海容; 机构军事医学科学院附属医院免疫学研究室深圳市宝安中心血站; 出处《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2001年第4期327-332,共6页; 基金国家自然科学基金 (编号 3990 0 187) 军队"九五"医药卫生科研基金资助~~; 文摘为探讨构建的重组外毒素融合蛋白B7 1 Linker PE4 0和B7 2 Linker PE4 0及其接头设计的合理性 ,应用核酸和蛋白质序列分析软件系统GOLDKEY ,对上述重组外毒素融合蛋白的柔性、抗原性、亲水性、表位和二级结构等分子生物学特性进行了计算机模拟预测。结果发现它们分别保留了B7 1,B7 2和PE4 0的表位特征 ,没有出现新的表位 ,其柔性接头处的抗原性也极低。与B7 1,B7 2和PE4 0的一、二级结构比较发现 ,这两种融合蛋白各有数个氨基酸残基改变 ,有的氨基酸改变可轻微影响融合蛋白的二级结构。原核表达的两个融合蛋白经Western印迹分析显示 ,它们能分别与B7 1,B7 2和PE4 0单克隆抗体发生特异性结合 ,表明它们较好地保留了B7和PE4 0的抗原性和空间结构 ,与预测的结果一致。提示预测结果会有助于我们研究该系列融合蛋白的体内、外生物学效应 ,以及设计构建新的其他融合蛋白。; 关键词 B7-pe40重组融合外毒素蛋白分子结构预测计算机模拟分子生物学移植免疫学; Keywords recombinant fusion exotoxin B7-pe40 molecular construction prediction computer analysis; 分类号 R318.5 [医药卫生—生物医学工程] R392.4 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名新型重组免疫抑制融合毒素蛋白B7-2-PE40KDEL的分离纯化被引量：1: 4; 作者关海容孙玉英袁志宏张惠丽梁飞刘楠郭斯启习彩霞奚永志; 机构军事医学科学院附属医院免疫学研究室及国家生物医学分析中心免疫学研究室; 出处《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期123-127,共5页; 基金国家自然科学基金资助课题编号30200111; 文摘为了建立高效快捷能分离大量重组B7-2-PE40KDEL融合蛋白的下游纯化路线,比较了不同组合的纯化策略和条件,包括反相层析、金属螯合层析、阴离子交换层析、蓝染料亲和层析和凝胶过滤层析等,并采用MTT法检测该融合蛋白的靶向杀伤活性。结果表明,在反相层析分离中疏水相分别采用了常规的甲醇和乙腈,结果为所分离的该重组融合蛋白均发生了变性,从色谱柱中分离出来就生成了絮状沉淀。在蓝染料亲和层析一步分离中,由于全菌体蛋白中与亲和树脂发生非特异结合的成分较多,极难区分目的蛋白和杂蛋白。但是,PRSETA-B7-2-PE40KDEL表达载体上带有翻译增强序列T7-g10,可在表达目的蛋白N端融合6个组氨酸,这十分有利于通过Ni-NTA金属鏊和层析法快速高纯度地纯化表达产物。根据这一特性,经反复筛选实验设计最终确定了金属螯合层析、阴离子交换层析和凝胶过滤层析三步法的纯化路线,用于纯化分离B7-2-PE40KDEL融合蛋白。所得的目的蛋白的纯度可达95%以上,总回收率为8%。Western-blot实验显示,所得蛋白可与B7-2及PEA抗体特异性结合;MTT生物活性测定表明,该融合蛋白对表达CD28受体的人T细胞系Jurkat产生特异性杀伤作用,而对不表达CD28的淋巴细胞系Raji无任何杀伤作用。结论:建立了高效快速纯化大量重组B7-2-PE40KDEL融合蛋白的技术路线,所纯化的重组B7-2-PE40KDEL融合蛋白能特异性靶向杀伤表达CD28受体的人T细胞。; 关键词重组外毒素融合蛋白 B7-2-pe40KDEL 蛋白纯化靶向杀伤生物活性; Keywords recombination exotoxin fusion protein B7-2-pe40KDEL protein purification selective killing biological activity; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学] R730.3 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名新型重组融合毒素蛋白B7-2-PE40KDEL部分表征的鉴定: 5; 作者关海容孙玉英袁志宏张惠丽梁飞刘楠郭斯启习彩霞奚永志; 机构北京军事医学科学院附属医院免疫学研究室及国家生物医学分析中心免疫学研究室; 出处《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期157-160,166,共5页; 基金国家自然科学基金资助课题(No.30200111); 文摘目的:对构建的新型重组B7-2-PE40KDEL外毒素融合蛋白的部分表征进行分析鉴定。方法:采用SDS-PAGE相对分子量、胰蛋白酶消化的MALDI-TOF-MS质谱、蛋白印迹、全波长扫描和MTT法分别测定该融合蛋白相对分子量、肽谱、抗原特异性以及靶向杀伤生物学活性。结果:B7-2-PE40KDEL经12%SDS-PAGE蛋白电泳和凝胶成像系统分析计算,其相对分子量为72628,与理论预测值69561相比误差在5%之内;全波长扫描分析显示该目的蛋白分别在225nm和276nm处各有一吸收峰;MALTI-TOF-MS质谱测定共获得15个与理论预测值相符的肽段,经瑞士生物信息研究所的EXPASY分子生物服务网站的Peptident数据库搜索证明,在分子量为60000～80000的范围内未检索到与上述条件相符的已知蛋白,证明本融合蛋白为全新蛋白,与我们预测的目的蛋白相符;Westernblot实验显示B7-2-PE40KDEL能与人B7-2及PEA抗体特异性结合;MTT杀伤活性测定表明,该融合蛋白对表达CD28+的人T淋巴瘤细胞系Jurkat产生特异性杀伤,而对不表达的CD28-淋巴细胞系Raji无任何杀伤。结论:重组B7-2-PE40KDEL外毒素融合蛋白为一全新的具有靶向B7:CD28细胞杀伤活性的蛋白质。; 关键词重组外毒素融合蛋白 B7-2-pe40KDEL 肽谱抗原特异性生物学活性; Keywords Recombination exotoxin fusion protein B7-2-pe40KDEL Peptide mass fingerprinting Antigen specificity Biogical activity; 分类号 R392.11 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	IL6/IL6R系统介导重组IL6-PE40外毒素融合蛋白靶向杀伤白血病细胞的新策略	崔建舞奚永志郑黎燕刘爽刘楠屠敏郭斯启陈兴国金荔孔繁华	《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心	2000	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	新型重组IL6D24PE40KDEL外毒素融合蛋白的理化分析	崔建武郭斯启孙玉英刘楠梁飞奚永志	《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD	2004	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	B7-PE40新型重组融合外毒素的分子生物学特性预测	张惠丽奚永志孔繁华陈汝光袁志宏刘楠关海容	《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD	2001	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	新型重组免疫抑制融合毒素蛋白B7-2-PE40KDEL的分离纯化	关海容孙玉英袁志宏张惠丽梁飞刘楠郭斯启习彩霞奚永志	《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD	2006	1	在线阅读下载PDF 职称材料
5	新型重组融合毒素蛋白B7-2-PE40KDEL部分表征的鉴定	关海容孙玉英袁志宏张惠丽梁飞刘楠郭斯启习彩霞奚永志	《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2008	0	在线阅读下载PDF 职称材料