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重组MAGE-A1/EGFP质粒转染人树突状细胞体外诱导MAGE-A1特异性T细胞免疫
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作者 于津浦 任秀宝 +2 位作者 刘虹 曹水 郝希山 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期49-52,57,共5页
目的:应用人重组真核表达载体pMAGE-A1/EGFP转染的树突状细胞(DCs)在体外诱导MAGE-A1特异性T 细胞免疫。方法:构建重组质粒pMAGE-A1/EGFP,体外电转染该质粒入DCs,通过流式细胞仪检测和胞内染色法LDH法比较转染前后DCs在蛋白表达、细胞... 目的:应用人重组真核表达载体pMAGE-A1/EGFP转染的树突状细胞(DCs)在体外诱导MAGE-A1特异性T 细胞免疫。方法:构建重组质粒pMAGE-A1/EGFP,体外电转染该质粒入DCs,通过流式细胞仪检测和胞内染色法LDH法比较转染前后DCs在蛋白表达、细胞成熟度和诱导MAGE-A1特异性T细胞免疫能力的差异。结果:成功构建pMAGE-A1/EGFP 真核表达质粒,电穿孔法导入DCs后观察到MAGE-A1与EPFG实现等效表达,分别为8.8%±0.9%和8.47%±0.78%。 pMAGE-A1/EGFP转染的DCs表面CD86、CD40L和CD83表达水平显著升高,提示DCs的成熟度增加;同时表达的MAGE-A1 蛋白可与小鼠来源抗MAGE-A1的单抗发生特异性结合,并在体外诱导MAGE-A1特异性CD4+T细胞克隆扩增,当再次接触 MAGE-A1抗原时大量分泌IFN-γ。结论:pMAGE-A1/EGFP转染的DCs不仅能在体外诱导MAGE-A1特异性T细胞免疫,还可通过流式细胞仪进行快速检测,为临床开展MAGE-A1为基础的免疫治疗奠定了一定基础。 展开更多
关键词 重组真核表达载体 树突状细胞 MAgE-A1 EgFP 异性t细胞免疫
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人rG1特异反应性T细胞生物学特性的研究
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作者 陈雪华 李宁丽 +3 位作者 刘炳亚 朱正钢 Annie Cartman 张一平 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2000年第S1期19-21,30,共4页
目的分析重组人软骨抗原凝集原 (rG1 )体外诱导建立的 1 1株rG1特异性T细胞株的生物学特性。方法采用直接标记免疫荧光法对rG1特异性T细胞株进行表型分析 ;采用QuantikineELISAKits定量检测细胞培养上清液中的IFN -γ与IL - 4;采用RT -... 目的分析重组人软骨抗原凝集原 (rG1 )体外诱导建立的 1 1株rG1特异性T细胞株的生物学特性。方法采用直接标记免疫荧光法对rG1特异性T细胞株进行表型分析 ;采用QuantikineELISAKits定量检测细胞培养上清液中的IFN -γ与IL - 4;采用RT -PCR方法分析其BV的限制性取用。 结果所建细胞株均表现为CD3阳性 (98.6 %± 1 .5 % ) ,大部分细胞株 (9/ 1 1 )为CD4阳性 (97.1 %± 2 .5 % ) ,而其余 2株为CD4和CD8混合表达 ,其中CD4阳性为 82 .95 % ,CD8阳性为 36 .5 0 %。 8株分泌IFN -γ(5 44± 390 pg/ml) ,而IL - 4阴性 ,为Thl细胞 ;1株同时分泌IFN -γ和IL - 4,为Th0细胞 ;2株细胞未测出IFN -γ和IL - 4分泌 ;无Th2细胞株出现。所有T细胞株均选择性取用αβ(97.4%± 2 .4% )TCR受体。 结论所建立的rG1特异性T细胞株经表面鉴定为纯度很高的CD3阳性T细胞 ,多表现为CD4阳性 ,细胞因子分泌类型多属Th1T细胞。 展开更多
关键词 软骨抗原凝集原 重组g1特异性t细胞株 表型分析 细胞因子 类风湿性关节炎
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